Abstract. Microtubules are important in plant growth
and development. Localizing microtubules in sectioned
material is advantageous because it allows any tissue of
interest to be studied and it permits the positional relations
of the cells within the organ to be known. We
describe here a method that uses semi-thin (0.5-2 ~tm)
sections of material embedded in butyl-methylmethacrylate,
to which 10 mM dithiothreitol was added. After
removing the embedding material and using indirect
immunofluorescence staining, we obtain clear images of
microtubules, actin microfilaments, callose and pulse-fed
bromodeoxyuridine. This method works on the root
tissues of Arabidopsis thaliana (L.) Heynh, Pinus radiata
D. Don, Zamiafurfuracea Ait., Azolla pinnata R. Br. and
on sporophytic tissues of Funaria hygrometrica Hedw. In
general, most of the cells in the organs studied are successfully
stained. Using this method, we find that interphase
meristematic cells in all of these species have microtubules
not only in the usual cortical array but also
throughout their cytoplasm. The presence of the calcium
chelator ethylene glycol-bis([3-aminoethyl ether)-
N,N,N',N'-tetraacetic acid (EGTA) in fixation buffers
led to some tissue damage, and did not enhance the
preservation of microtubules. The common assumption
that EGTA-containing buffers stabilize plant microtubules
during fixation appears unwarranted.
Key words: Cytoskeleton - Dithiothreitol - Fluorescence
microscopy - Immuno-cytochemistry - Microtubules
นามธรรม. microtubules
มีความสำคัญในการเจริญเติบโตและการพัฒนา localizing microtubules
แบ่งในวัสดุที่เป็นประโยชน์เพราะจะช่วยให้เนื้อเยื่อใดๆ ของความสนใจที่จะศึกษาและมันช่วยให้ความสัมพันธ์ที่ตำแหน่งของเซลล์ที่อยู่ภายในอวัยวะให้เป็นที่รู้จัก เราอธิบายที่นี่วิธีการที่ใช้กึ่งบาง (0.5-2 ~ TM) ในส่วนของวัสดุที่ฝังตัวอยู่ในบิวทิล-methylmethacrylate, ที่ 10 มิลลิ dithiothreitol ถูกเพิ่มเข้ามา หลังจากถอดวัสดุฝังและการใช้ทางอ้อมการย้อมสีอิมมูโนเราได้ภาพที่ชัดเจนของmicrotubules, microfilaments โปรตีน, callose และชีพจรเลี้ยงbromodeoxyuridine วิธีการนี้จะทำงานบนรากเนื้อเยื่อของ Arabidopsis thaliana (L. ) Heynh, ปินัส radiata ดี ดอน Zamiafurfuracea เอ. อาร์แหนแดง pinnata Br และในเนื้อเยื่อของ sporophytic Funaria hygrometrica Hedw ในทั่วไปส่วนใหญ่ของเซลล์ในอวัยวะที่มีการศึกษาประสบความสำเร็จในการย้อมสี ใช้วิธีนี้เราจะพบว่าระหว่างเฟสเซลล์เจริญในทุกสายพันธุ์เหล่านี้มี microtubules ไม่เพียง แต่ในอาร์เรย์เยื่อหุ้มสมองปกติ แต่ยังทั่วพลาสซึมของพวกเขา การปรากฏตัวของแคลเซียมเอทิลีน chelator ทวิไกลคอล ([3 aminoethyl อีเธอร์) - N, N, N 'กรด n' tetraacetic (EGTA) ในบัฟเฟอร์ตรึงนำไปสู่ความเสียหายของเนื้อเยื่อบางส่วนและไม่ได้เพิ่มการเก็บรักษาของmicrotubules . สมมติฐานที่พบว่าบัฟเฟอร์ EGTA ที่มีการรักษาเสถียรภาพ microtubules พืชในช่วงการตรึงปรากฏเหตุผล. คำสำคัญ: โครงร่างของเซลล์ - dithiothreitol - เรืองแสงกล้องจุลทรรศน์- Immuno-cytochemistry - microtubules
การแปล กรุณารอสักครู่..
นามธรรม เส้นใยเป็นสิ่งสำคัญใน
การเจริญเติบโตและการพัฒนา จำกัดเส้นใยในตัด
วัสดุเป็นประโยชน์ เพราะจะช่วยให้มีความสนใจที่จะศึกษาเนื้อเยื่อ
และอนุญาตให้ตำแหน่งสัมพันธ์
ของเซลล์ในอวัยวะให้เป็นที่รู้จัก เรา
อธิบายที่นี่วิธีที่ใช้กึ่งบาง ( 0.5-2 ~ TM )
ส่วนของวัสดุฝังในบิวทิลเมทาคริเลต
,ซึ่งบัตรแข็ง 10 มม. ถูกเพิ่มเข้ามา หลังจากการฝังวัสดุ
ลบและใช้วิธีทางอ้อม
staining , เราได้รับภาพที่ชัดเจนของเส้นใย actin ไมโครฟิลาเมนท์
, ,
bromodeoxyuridine แคลโลสและชีพจรที่ได้รับ . วิธีนี้ใช้ได้กับราก
เนื้อเยื่อของ Arabidopsis thaliana ( L . ) heynh Pinus radiata
, D . ดอน zamiafurfuracea เอไอที แหนแดง , 2543 . br . และ
ในเนื้อเยื่อของ sporophytic funaria hygrometrica hedw . ใน
ทั่วไป ส่วนใหญ่ของเซลล์ในอวัยวะนี้เรียบร้อยแล้ว
เปรอะเปื้อน การใช้วิธีนี้ เราพบว่า อินเตอร์เฟส
meristematic เซลล์ทั้งหมดของชนิดเหล่านี้มีเส้นใย
ไม่เพียง แต่ในอาร์เรย์สมองปกติแต่ยัง
ตลอด ขนาดของพวกเขา การปรากฏตัวของแคลเซียม
แอลบูมิ เอทิลีนไกลคอล ทวิ [ 3-aminoethyl ether ) -
N , N , N 'N ' - tetraacetic acid ( หน่วย ) ในบัฟเฟอร์ของการตรึง
LED บางเนื้อเยื่อที่เสียหาย และไม่เพิ่ม
รักษาเส้นใย . ทั่วไปที่หน่วยที่มีบัฟเฟอร์ทำให้อัสสัมชัญ
ระหว่างเส้นใยพืชตรึงปรากฏเหตุผล .
คำสำคัญ : ขาดตอน - บัตรแข็ง - กล้องจุลทรรศน์เรืองแสง
- มมูโน cytochemistry - ไมโครทูบูล
การแปล กรุณารอสักครู่..