2.8 Determination of α-glucosidaseT

2.8 Determination of α-glucosidase
The α-glucosidase activity was determined using a modified method of McCue and Shetty (14). A standard reaction solution is prepared by mixing 0.1 ml of 9 mM p-nitrophenol α-D-glucopyranoside and 0.8 ml of 200 mM sodium of acetate buffer at pH 4.6 in a glass tube. The tubes were pre-incubated at 50°C for 5 min before addition of 0.1 ml of the enzyme extract. The reaction tubes were then incubated for a further 30 min. The enzymatic hydrolysis was stopped by addition of 1 ml of 100 mM sodium carbonate, and the samples were clarified by centrifugation at 13,500 rpm at room temperature for 5 min. The released p-nitrophenol in each sample was determined by measuring the absorbance at 400 nm compared with the blank. A standard curve was established using pure p-nitrophenol dissolved in sodium acetate buffer. One unit of α-glucosidase activity is defined as the amount of enzyme that releases 1 µ mol of p-nitrophenol per min at pH 4.6 and 50°C under assay conditions.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.8 กำหนดα-glucosidaseกิจกรรมα-glucosidase ที่ถูกกำหนดโดยใช้วิธีการปรับเปลี่ยนของ McCue Shetty (14) โซลูชันมาตรฐานปฏิกิริยาจะเตรียม โดยผสม 0.8 ml 200 mM โซเดียมบัฟเฟอร์ acetate ที่ pH 4.6 ในหลอดแก้วและ 0.1 ml ของ 9 มม. p-nitrophenol α-D-glucopyranoside หลอดถูกก่อน incubated ที่ 50 ° C สำหรับ 5 นาทีก่อนเพิ่ม 0.1 ml ของสารสกัดเอนไซม์ หลอดปฏิกิริยาได้แล้ว incubated สำหรับต่อ 30 นาที ไฮโตรไลซ์เอนไซม์ในระบบถูกหยุดลง โดยเพิ่ม 1 ml ของโซเดียมคาร์บอเนต 100 มม. และตัวอย่างที่ละเอียด โดย centrifugation ที่ 13,500 รอบต่อนาทีที่อุณหภูมิห้องใน 5 นาที กำหนด p-nitrophenol ออกในแต่ละตัวอย่าง โดยการวัด absorbance ที่ 400 nm เปรียบเทียบกับว่างเปล่า เส้นโค้งมาตรฐานก่อใช้ p-nitrophenol บริสุทธิ์ละลายในโซเดียมบัฟเฟอร์ acetate หนึ่งหน่วยα-glucosidase กิจกรรมถูกกำหนดเป็นจำนวนเอนไซม์ที่ออก 1 เขตโมลของ p-nitrophenol ต่อนาทีที่ pH 4.6 และ 50 ° C ภายใต้เงื่อนไขการทดสอบ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.8 กำหนดแอลฟากลูโคซิเดส
แอลฟากลูโคซิเดสเป็นกิจกรรมการพิจารณาแก้ไข และวิธีการ แมคคิวเศฏฏี ( 14 ) โซลูชั่นที่ตอบสนองมาตรฐานที่เตรียมไว้ โดยการผสม 0.1 มิลลิลิตร 9 มม. p-nitrophenol แอลฟา D-glucopyranoside และ 0.8 มิลลิลิตร 200 มิลลิเมตรโซเดียมของอาซีเตตบัฟเฟอร์ pH 4.6 ในหลอดแก้ว ท่อมีอุณหภูมิ 50 องศา C ก่อน 5 นาทีก่อนที่จะเพิ่ม 0.1 มิลลิลิตรเอนไซม์สกัดเข้มข้นปฏิกิริยาในหลอด แล้วบ่มสำหรับอีก 30 นาที เอนไซม์เอนไซม์ถูกหยุดโดยเพิ่ม 1 มิลลิลิตร โซเดียม คาร์บอเนต 100 มม. และจำนวน 3 , 500 รอบต่อนาที มีในที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 5 นาทีออก p-nitrophenol ในแต่ละตัวอย่างถูกกำหนดโดยวัดการดูดกลืนแสงที่ 400 nm เมื่อเทียบกับว่างเปล่าเส้นโค้งมาตรฐานก่อตั้ง ใช้เพียว p-nitrophenol ละลายโซเดียมอะซิเตตบัฟเฟอร์ หน่วยหนึ่งของแอลฟากลูโคซิเดสกิจกรรม หมายถึง ปริมาณของเอนไซม์ที่ปล่อย 1 µโมลของ p-nitrophenol ต่อนาทีที่ pH 4.6 และ 50 ° C ภายใต้เงื่อนไขการทดสอบ