2. Materials and methods2.1. Animal

2. Materials and methods
2.1. Animals
The juveniles used in the present study were obtained under
laboratory conditions, from a broodstock supplied by Farm Las
Golondrinas, Entre Ríos, Argentina. Ovigerous females were individually
placed in glass aquaria of 60  40  30 cm containing
20 L of dechlorinated tap water and under continuous aeration.
The temperature was held constant at 27 ± 1 C by ATMAN water
heaters (100 W, precision 1 C), and the photoperiod was 14:10
(L:D). Each aquarium was provided with a PVC tube (10 cm in
diameter and 25 cm long) as shelter [18]. Females were fed daily
ad libitum with Elodea sp. and commercial Tetradiskus granules
(approximate composition: min. crude protein 47.5%, min. crude
fat 6.5%, max. crude fiber 2.0%, max. moisture 6.0%, min. phosphorus
1.5% and min. ascorbic acid 100 mg kg1) according to Sánchez
de Bock and López Greco [58] and Tropea et al. [64]. When juveniles
became independent at stage III [31], they were separated
from their mothers. After reaching approximately 0.200 g, juvenile
males were identified by observation of genital openings at the
base of the fifth pair of walking legs [66]. These juveniles were
maintained under the same conditions of water quality, temperature,
photoperiod and feeding described for their mothers until
the beginning of the experiment.
2.2. Experimental design
Male juveniles weighing 1.85 ± 0.03 g (developmental stage II of
male reproductive system according to Vazquez and López Greco
[67]) were selected for the experiment, and randomly assigned to
one of the following treatments:
– Andrectomy (AGA): removal of both fifth walking legs together
with the AG by cutting through the articulation between the
coxa and the cephalothorax.
– Control (C): removal of both fifth walking legs by performing a
cut in the articulation between the coxa and the base of the
pereiopod.
In both treatments, after the removal of the pereiopods the cuts
were anesthetized with Xylocaine (containing 2.5% Lidocaine) and
electro-cauterized to avoid excessive loss of hemolymph, and to
ensure the complete removal of the AG tissue. As some juveniles
died during the week that followed the microsurgeries, the experiment
was initiated once the number of animals of each treatment
had stabilized. Organisms were maintained in 60  40  30 cm
glass aquaria filled with 20 L of dechlorinated tap water with continuous
aeration. PVC tubes (10 cm in diameter and 25 cm long)
and onion bag mesh were used as shelter. Each aquarium was a
replicate, and had 4/5 crayfish (16.7–20.8 animals/m2). Three replicates
were used for each experimental group, with a total number
of six aquaria. The experiment was performed under constant conditions
of photoperiod (14:10 L:D) and temperature (27 ± 1 C by
100W ATMAN aquarium heater). The juveniles were fed daily ad
libitum with commercial Tetradiskus granules and Elodea sp. All
aquaria were cleaned and water was completely replaced once a
week. The experimental period comprised 300 days, during which
animals were sexed according to the position of the gonopores,
weighed (precision 0.01 mg) and their mortality recorded every
2 weeks. The regeneration of the removed pereiopods, the re-formation
of male gonopores and appendices masculinae, the development
of female gonopores, and the differentiation of the red patch
were also recorded.
2.3. Morphological and histological examination
At the end of the experiment, all animals were weighed (precision:
0.1 mg) and the following morphometric variables were measured
(precision: 0.01 mm): cephalothorax length (CL), from the
tip of the rostrum to the end of the cephalotorax; postorbital cephalothorax
length (POL), from behind the eye to the end of the
cephalotorax; pleon width (PWi), measured in the second abdominal
segment; length, width and height of the chelae (LC, WC and
HC, respectively); and length of the red patch (LRP), when present.
The weight of the chelae (CWe) and pleon (PWe) of each animal
were also recorded. The size of the endopod and exopod of the first
and second pleopods, together with the morphology of the pleopod
setae, were qualitatively analyzed under a light microscope (40),
and compared between groups, taking into account that in males
only plumose setae are present while with the progress of female
maturation simple (ovigerous) setae are developed in the endopod,
which is larger than the exopod [53].
After being cold-anaesthetized at 20 C for 15 min the carapace
of each animal was removed and the reproductive system
was inspected to determine their relative size, form and color. They
were then quickly dissected, weighed, and fixed in Bouin’s solution
for 4 h at room temperature. The tissues were finally dehydrated
and embedded in paraffin. Sections, 5–7 lm thick, were stained
with Hematoxylin–Eosin and Masson Trichrome. At least three
slides from each crayfish were inspected under light microscope.
The structure of the testes and the VD epithelium, the relative
amount of secretion and the composition of the primary and secondary
layers of the spermatophore [32,33,67], were qualitatively
analyzed. Also, the number of spermatic cord sections within the

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการ2.1 การสัตว์Juveniles ที่ใช้ในการศึกษาปัจจุบันได้รับภายใต้สภาพห้องปฏิบัติการ จากสูตรการจัดฟาร์มลาGolondrinas, Entre Ríos อาร์เจนตินา หญิง Ovigerous ได้ทีวางในอควาเรียแก้ว 30 40 60 ซมประกอบด้วยL 20 ของน้ำประปา dechlorinated และ aeration อย่างต่อเนื่องอุณหภูมิจัดขึ้นคงที่ 27 ± 1 C โดยน้ำ ATMANเครื่องทำความร้อน (100 W ความแม่นยำ 1 C), และชั่วโมง 14:10(L:D) พิพิธภัณฑ์สัตว์น้ำแต่ละที่มีท่อ PVC (10 ซม.ยาว 25 ซม.และเส้นผ่าศูนย์กลาง) เป็นที่พักพิง [18] ฉันได้รับทุกวันad libitum Elodea sp.และพาณิชย์ Tetradiskus เม็ด(ประมาณองค์ประกอบ: ลดโปรตีนหยาบ 47.5% ส่วนลดน้ำมันไขมัน 6.5% สูงสุด เส้นใยหยาบ 2.0% สูงสุด ความชื้น 6.0% ฟอสฟอรัสต่ำ1.5% และลดกรดแอสคอร์บิค 100 มก.กก. 1) ตาม Sánchezเดอ Bock และ López Greco [58] และ Tropea et al. [64] เมื่อ juvenilesเป็นอิสระในระยะ III [31] ถูกแยกออกจากกันจากแม่ของพวกเขา หลังจากถึงประมาณ 0.200 g เยาวชนชายระบุ โดยสังเกตช่องที่อวัยวะเพศในการฐานของการจับคู่ที่ห้าของการเดินขา [66] Juveniles เหล่านี้ได้รักษาภายใต้เงื่อนไขเดียวกันคุณภาพน้ำ อุณหภูมิชั่วโมงและให้อาหารอธิบายสำหรับมารดาของพวกเขาจนถึงจุดเริ่มต้นของการทดลอง2.2. ทดลองออกแบบชาย juveniles น้ำหนัก 1.85 ± 0.03 g (พัฒนาขั้นตอนที่สองของระบบสืบพันธุ์เพศชายตาม Vazquez López Greco[67]) สำหรับทดลอง และสุ่มให้หนึ่งในการรักษาต่อไปนี้:– Andrectomy (AGA): เอาทั้งห้าเดินขากันกับ AG โดยตัดผ่านวิคิวลาร์ระหว่างการcoxa และ cephalothorax– ควบคุม (C): เอาขาเดินทั้งห้าโดยการดำเนินการตัดวิคิวลาร์ระหว่าง coxa และฐานของการpereiopodในทั้งสองรักษา หลังจากการกำจัด pereiopods การตัดได้ด้วย ด้วย Xylocaine (ประกอบด้วย 2.5% Lidocaine) และelectro cauterized เพื่อหลีกเลี่ยงการสูญเสียมากเกินไป ของ hemolymph และการให้เอาเนื้อเยื่อ AG ที่สมบูรณ์ Juveniles บางตายในระหว่างสัปดาห์ที่ตาม microsurgeries ทดลองถูกเริ่มต้นจำนวนสัตว์การรักษาแต่ละครั้งมีเสถียร สิ่งมีชีวิตถูกรักษาไว้ใน 60 40 30 ซม.อควาเรียแก้วที่เต็มไป ด้วย dechlorinated ก๊อกน้ำต่อเนื่อง 20 Laeration ท่อ PVC (10 ซม.เส้นผ่านศูนย์กลาง และยาว 25 ซม.)และตาข่ายถุงหอมถูกใช้เป็นกำบัง มีพิพิธภัณฑ์สัตว์น้ำแต่ละทำซ้ำ และมี 4/5 เครย์ฟิช (สัตว์ 16.7-20.8 m2) เหมือนกับสามใช้สำหรับแต่ละกลุ่มการทดลอง มีจำนวนรวมของอควาเรีย 6 ทำการทดลองที่สภาวะคงของช่วงแสง (14:10 L:D) และอุณหภูมิ (27 ± 1 C โดย100W ATMAN พิพิธภัณฑ์สัตว์น้ำฮีตเตอร์) Juveniles ได้รับโฆษณาทุกวันlibitum พาณิชย์ Tetradiskus เม็ดและ Elodea sp.ทั้งหมดอควาเรียได้ถูกล้างไวรัส และน้ำถูกแทนเมื่อการสัปดาห์ วัน 300 ซึ่งประกอบด้วยรอบระยะเวลาทดลองสัตว์ถูก sexed ตามตำแหน่งของ gonoporesน้ำหนัก (ความแม่นยำ 0.01 มิลลิกรัม) และบันทึกการตายของพวกเขาทุกสัปดาห์ที่ 2 ฟื้นฟูของ pereiopods เอา การก่อตัวใหม่ของชาย gonopores และ appendices masculinae การพัฒนาหญิง gonopores และสร้างความแตกต่างของแพทช์สีแดงนอกจากนี้ยังบันทึก2.3. สัณฐาน และสรีรวิทยาสอบเมื่อสิ้นสุดการทดลอง สัตว์ทั้งหมดมีน้ำหนัก (ความแม่นยำ:0.1 มิลลิกรัม) และมีวัดตัวแปร morphometric ดังต่อไปนี้(ความแม่นยำ: 0.01 mm): ยาว cephalothorax (CL), จากการคำแนะนำของ rostrum ของ cephalotorax postorbital cephalothoraxความยาว (POL), พอตาไปสิ้นสุดcephalotorax ความกว้าง pleon (PWi), วัดในท้องที่สองเซ็กเมนต์ ความยาว ความกว้าง และความสูงของ chelae (LC สุขา และHC ตามลำดับ); และความยาวของแพทช์สีแดง (LRP), ท้องน้ำหนักของ chelae (CWe) และ pleon (PWe) ของสัตว์แต่ละนอกจากนี้ยังบันทึก ขนาดของ endopod และ exopod ครั้งแรกและสอง pleopods พร้อมรูปร่าง pleopodsetae, qualitatively ได้วิเคราะห์ภายใต้กล้องจุลทรรศน์แสง (40),และเปรียบเทียบระหว่างกลุ่ม การเข้าบัญชีที่ในชายเฉพาะ plumose setae มีอยู่ในขณะที่ มีความคืบหน้าของเพศหญิงมีพัฒนา setae ง่าย (ovigerous) พ่อแม่ใน endopodซึ่งมีขนาดใหญ่กว่า exopod [53]หลังจากเย็น-anaesthetized ที่ 20 C ใน 15 นาที carapaceของสัตว์แต่ละถูกเอาออก และระบบสืบพันธุ์ถูกตรวจสอบเพื่อกำหนดความสัมพันธ์ขนาด แบบฟอร์ม และสี พวกเขาได้แล้วเร็ว dissected ชั่งน้ำหนัก และถาวรในโซลูชันของ Bouinสำหรับ h 4 ที่อุณหภูมิห้อง เนื้อเยื่อถูกอบแห้งในที่สุดและฝังในพาราฟิน ส่วน หนา lm 5 – 7 มีสีHematoxylin – Eosin และ Masson Trichrome อย่างน้อยสามภาพนิ่งจากแต่ละเครย์ฟิชได้ตรวจสอบภายใต้กล้องจุลทรรศน์แสงโครงสร้างของการลิ้มลองและ epithelium VD ญาติจำนวนหลั่งและองค์ประกอบหลักและรองมีชั้นของ spermatophore [32,33,67], qualitativelyวิเคราะห์ ยัง จำนวน spermatic cord ส่วนภายใน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2. วัสดุและวิธีการ
2.1 สัตว์หนุ่มสาวที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้ได้รับภายใต้เงื่อนไขการทดลองจากพ่อแม่พันธุ์ที่จัดทำโดยฟาร์มลาGolondrinas, Entre Ríosอาร์เจนตินา หญิง Ovigerous เป็นรายบุคคลที่ถูกวางไว้ในตู้กระจก60? 40? 30 ซม. ที่มี20 ลิตรน้ำประปาฆ่าเชื้อด้วยคลอรีนและอยู่ภายใต้การเติมอากาศอย่างต่อเนื่อง. อุณหภูมิที่จัดขึ้นอย่างต่อเนื่องวันที่ 27 ± 1 องศาเซลเซียสโดย ATMAN น้ำเครื่องทำความร้อน(100 วัตต์, ความแม่นยำ 1 องศาเซลเซียส) และแสงเป็น 14:10 (L: D ) พิพิธภัณฑ์สัตว์น้ำแต่ละคนมีให้กับพีวีซีท่อ (10 เซนติเมตรและมีขนาดเส้นผ่าศูนย์กลาง 25 ซม. ยาว) เป็นที่พักพิง [18] ผู้หญิงได้รับการเลี้ยงดูในชีวิตประจำวันโฆษณา libitum กับ Elodea SP และเชิงพาณิชย์ Tetradiskus? เม็ด(องค์ประกอบโดยประมาณ: ต่ำสุดโปรตีน 47.5% นาทีน้ำมันดิบ.. ไขมัน 6.5% สูงสุดเยื่อใย 2.0% สูงสุดความชื้น 6.0% นาทีฟอสฟอรัส... 1.5% และต่ำสุดวิตามินซี 100 มิลลิกรัมต่อกิโลกรัม 1.?) เป็นไปตาม Sánchezเดอเบียร์และLópezกรีก[58] และโตรเปีย et al, [64] เมื่อหนุ่มสาวกลายเป็นอิสระในขั้นตอนที่สาม [31] พวกเขาถูกแยกออกจากแม่ของพวกเขา หลังจากที่ไปถึงประมาณ 0.200 กรัมเด็กและเยาวชนชายที่ถูกระบุโดยการสังเกตของการเปิดอวัยวะเพศที่ฐานของคู่ที่ห้าของขาเดิน[66] หนุ่มสาวเหล่านี้ถูกเก็บรักษาไว้ภายใต้เงื่อนไขเดียวกันของคุณภาพน้ำอุณหภูมิแสงและการให้อาหารที่อธิบายไว้สำหรับคุณแม่ของพวกเขาจนกว่าจุดเริ่มต้นของการทดลอง. 2.2 การออกแบบการทดลองเยาวชนชายที่มีน้ำหนัก 1.85 ± 0.03 กรัม (ขั้นตอนการพัฒนาที่สองของระบบสืบพันธุ์เพศชายตามVazquez และLópezกรีก[67]) ได้รับเลือกสำหรับการทดสอบและสุ่มให้หนึ่งในการรักษาต่อไปนี้: - Andrectomy (AGA): กำจัด ของทั้งสองขาเดินห้าร่วมกันกับเอจีโดยการตัดผ่านเสียงที่เปล่งออกระหว่าง. ตะโพกและ cephalothorax - การควบคุม (C): การกำจัดของขาเดินทั้งห้าโดยการดำเนินการตัดเสียงที่เปล่งออกระหว่างตะโพกและฐานของpereiopod ในการรักษาทั้งสองหลังจากการกำจัดของ pereiopods ตัดที่ถูกอสัญญีกับXylocaine (ที่มี 2.5% Lidocaine) และไฟฟ้าcauterized เพื่อหลีกเลี่ยงการสูญเสียเลือดมากเกินไปและเพื่อให้แน่ใจว่าการกำจัดที่สมบูรณ์ของเนื้อเยื่อเอจี ในฐานะที่เป็นหนุ่มสาวบางคนเสียชีวิตในช่วงสัปดาห์ที่ตาม microsurgeries การทดลองได้ริเริ่มขึ้นเมื่อจำนวนของสัตว์ในการรักษาแต่ละมีเสถียรภาพ สิ่งมีชีวิตที่ได้รับการดูแลใน 60? 40? 30 ซมตู้กระจกที่เต็มไปด้วยน้ำ20 ลิตรประปาฆ่าเชื้อด้วยคลอรีนที่มีอย่างต่อเนื่องการเติมอากาศ ท่อพีวีซี (10 ซม. และมีขนาดเส้นผ่าศูนย์กลาง 25 ซม. ยาว) และถุงตาข่ายหอมถูกนำมาใช้เป็นที่พักพิง พิพิธภัณฑ์สัตว์น้ำแต่ละคนเป็นซ้ำและมี 4/5 กั้ง (16.7-20.8 สัตว์ / m2) ซ้ำสามถูกนำมาใช้สำหรับกลุ่มทดลองแต่ละที่มีจำนวนหกตู้ การทดลองที่ได้รับการดำเนินการภายใต้เงื่อนไขที่คงที่ของแสง (14:10 L: D) และอุณหภูมิ (27 ± 1 องศาเซลเซียสโดย 100W ATMAN เครื่องทำน้ำอุ่นตู้ปลา) หนุ่มสาวได้รับการเลี้ยงดูโฆษณาทุกวันกินอย่างเต็มที่กับ Tetradiskus พาณิชย? เม็ดและ Elodea SP ทุกตู้ทำความสะอาดและน้ำก็ถูกแทนที่สมบูรณ์ครั้งหนึ่งเคยเป็นสัปดาห์ ระยะเวลาการทดลองประกอบด้วย 300 วันในระหว่างที่สัตว์ที่ถูกบ้าเซ็กส์ตามตำแหน่งของgonopores ที่ชั่งน้ำหนัก(ความแม่นยำ 0.01 มก.) และการเสียชีวิตของพวกเขาบันทึกทุก2 สัปดาห์ การฟื้นฟูของ pereiopods ลบออกอีกครั้งการก่อตัวของgonopores เพศชายและเพศภาคผนวก masculinae การพัฒนาของgonopores หญิงและความแตกต่างของแพทช์สีแดงที่ถูกบันทึกไว้ยัง. 2.3 การตรวจสอบทางสัณฐานวิทยาและเนื้อเยื่อในตอนท้ายของการทดลองสัตว์ทั้งหมดถูกชั่งน้ำหนัก (ความแม่นยำ: 0.1 มก.) และตัวแปรเมตริกต่อไปนี้ถูกวัด(ความแม่นยำ: 0.01 มม): ความยาว cephalothorax (CL) จากปลายจะงอยปากที่สิ้นสุดของ cephalotorax นั้น postorbital cephalothorax ระยะเวลา (POL) จากด้านหลังตาไปยังจุดสิ้นสุดของcephalotorax; ความกว้าง Pleon (PWI) วัดในท้องสองส่วน; ความยาวความกว้างและความสูงของ Chelae นี้ (LC, สุขาและHC ตามลำดับ); และความยาวของแพทช์สีแดง (LRP) เมื่อมีการแสดง. น้ำหนักของ Chelae (ที่ CWE) และ Pleon (PWE) ของสัตว์แต่ละถูกบันทึกไว้ยัง ขนาดของ endopod และ exopod แรกpleopods และครั้งที่สองร่วมกับสัณฐานวิทยาของ pleopod ที่setae, วิเคราะห์คุณภาพภายใต้กล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสง (40) และเมื่อเทียบระหว่างกลุ่มคำนึงถึงว่าในเพศชายเท่านั้น setae plumose มี ปัจจุบันขณะที่ความคืบหน้าของหญิงเจริญเติบโตง่าย(ovigerous) setae มีการพัฒนาใน endopod ที่ซึ่งมีขนาดใหญ่กว่าexopod เมื่อ [53]. หลังจากที่เย็นอสัญญีที่ 20 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 15 นาทีกระดองของสัตว์แต่ละจะถูกลบออกและระบบสืบพันธุ์ได้รับการตรวจสอบเพื่อกำหนดขนาดญาติของพวกเขารูปแบบและสี พวกเขาถูกชำแหละแล้วได้อย่างรวดเร็วชั่งน้ำหนักและการแก้ไขในการแก้ปัญหา Bouin ของ 4 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง เนื้อเยื่อที่ถูกอบแห้งในที่สุดและฝังตัวอยู่ในพาราฟิน ส่วน 5-7 ไมครอนหนามีการย้อมด้วยHematoxylin-Eosin และมาซซ็อง trichrome อย่างน้อยสามภาพนิ่งจากแต่ละกั้งถูกตรวจสอบภายใต้กล้องจุลทรรศน์แสง. โครงสร้างของอัณฑะและเยื่อบุผิว VD ที่ที่ญาติปริมาณของการหลั่งและองค์ประกอบของประถมศึกษาและมัธยมศึกษาชั้นของspermatophore เมื่อ [32,33,67] มีคุณภาพวิเคราะห์ นอกจากนี้ยังมีจำนวนของส่วนสายน้ำกามภายใน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการ
2.1 . สัตว์
เด็กและเยาวชนที่ใช้ในการศึกษาได้มาภายใต้สภาวะห้องปฏิบัติการ
จากพ่อแม่มาจากฟาร์มใน golondrinas argentina . kgm
, , อาร์เจนตินา ผู้หญิง ovigerous นักเรียนรายบุคคล
วางไว้ในแก้วนุกูล   60 40 30 ซม. ประกอบด้วย
20 ลิตร dechlorinated แตะน้ำและอากาศ
ใต้ต่อเนื่องอุณหภูมิที่จัดขึ้นคงที่ที่ 27 ± 1  C โดยหลักของ heaters น้ำ
( 100 W , ความแม่นยำ 1  C ) และให้แสงเป็น 14 : 10
( l : D ) แต่ละตู้มีให้กับท่อ PVC ( 10 ซม. ในเส้นผ่าศูนย์กลาง ยาว 25 cm
) เป็นที่หลบภัย [ 18 ] ตัวเมียที่เลี้ยงทุกวัน
อย่างเต็มที่กับ elodea sp . และพาณิชย์ tetradiskus  เม็ด
( ส่วนประกอบ : โปรตีนประมาณนาที 47.5% , มิน ดิบ
ไขมัน 6.5 % สูงสุดเส้นใยหยาบร้อยละ 2.0 , แม็กซ์ ความชื้น 6.0 , มิน ฟอสฟอรัส
1.5% และนาที กรดแอสคอร์บิก 100 มิลลิกรัมต่อกิโลกรัม  1 ) ตามซันเชซ
de บ็อคโลเปซและเกรโก [ 58 ] และโตรเปีย et al . [ 64 ] เมื่อเยาวชน
กลายเป็นอิสระในขั้นตอนที่ 3 [ 31 ] ,
พวกเขาถูกแยกจากแม่ หลังจากถึงประมาณ 0.200 กรัม เด็กและเยาวชน
ผู้ชายเปิดอวัยวะเพศที่ระบุสังเกต
ฐานของขาเดินคู่ที่ 5 [ 66 ] เยาวชนเหล่านี้
รักษาภายใต้เงื่อนไขเดียวกัน คุณภาพน้ำ อุณหภูมิ แสง และให้อาหาร อธิบาย

แม่ของพวกเขาจนถึงจุดเริ่มต้นของการทดลอง .
2.2 . ทดลองและชายออกแบบ
ชั่ง 1.85 ± 0.03 กรัม ( ตามระยะที่ 2
ระบบสืบพันธุ์ชายตามและเกรโก
โลเปซเควซ[ 67 ] ) ได้ถูกเลือกสำหรับการทดลอง และแบบสุ่ม
หนึ่งในการรักษาต่อไปนี้ :
- andrectomy ( AGA ) : การกำจัดทั้งห้าเดินขาด้วยกัน
กับ AG โดยตัดผ่าน ความต่างระหว่าง
coxa และซีฟาโลโทแรกซ์ .
- ควบคุม ( C ) : การกำจัดทั้งห้าเดิน โดยการตัดขา
ตัวประกบระหว่าง coxa และฐานของ pereiopod

.ทั้งในการรักษา หลังจากการกำจัดของ pereiopods ตัด
ถูกยาสลบกับยาชา ( ประกอบด้วย 2.5% และโรงลิโดเคน )
cauterized เพื่อหลีกเลี่ยงการสูญเสียของเลือดและ

รับประกันการกำจัดเนื้อเยื่อเอจี . เป็นเยาวชน
ตายในระหว่างสัปดาห์ที่ตาม microsurgeries การทดลอง
ได้ริเริ่มขึ้นเมื่อหมายเลขของสัตว์ของแต่ละการรักษา
มีความเสถียร สิ่งมีชีวิตที่ถูกเก็บรักษาไว้ใน   60 40 30 ซม.
แก้วนุกูลเติม 20 ลิตร dechlorinated น้ำประปาโดยการเติมอากาศอย่างต่อเนื่อง

ท่อพีวีซี ( 10 เซนติเมตรยาว 25 เซนติเมตร )
และตาข่ายถุงหอมที่ถูกใช้เป็นกำบัง แต่ละตู้มี
ลอกเลียนแบบ และมี 4 / 5 กุ้ง ( 16.7 – 20.8 สัตว์ / m2 ) 3 ซ้ำ
ถูกใช้สำหรับแต่ละกลุ่มที่มีจำนวนหก
วาเรีย .ทดสอบภายใต้เงื่อนไขของการไม่คงที่
( ถ้ามี L : D ) และอุณหภูมิ ( 27 ± 1  C โดย
100W อาตมันพิพิธภัณฑ์สัตว์น้ำอุ่น ) เด็กและเยาวชนได้รับทุกวัน โฆษณา
หยาบกับพาณิชย์ tetradiskus  เม็ด elodea sp . และทั้งหมด
สัตว์น้ำสะอาดน้ำถูกเปลี่ยนอย่างสมบูรณ์เมื่อ
สัปดาห์ ระยะเวลาทดลองมี 300 วัน ซึ่งในระหว่าง
สัตว์มีเพศตามตำแหน่งของ gonopores
, หนัก ( ความแม่นยำ 0.01 มก. ) และอัตราการตายของพวกเขาที่บันทึกไว้ทุก
2 สัปดาห์ การฟื้นฟูของออก pereiopods เรื่องการ gonopores
ของชายและผนวก masculinae การพัฒนา
ของ gonopores หญิง และความแตกต่างของแพทช์สีแดง

ยังบันทึก 2.3 ลักษณะทางสัณฐานวิทยาและครีบ
เมื่อสิ้นสุดการทดลอง สัตว์ทุกตัวมีน้ำหนัก ( ความแม่นยำ :
0.1 มก. ) และตามลักษณะตัวแปรวัด
( ความแม่นยำ : 0.01 มิลลิเมตร ) ความยาวซีฟาโลโทแรกซ์ ( CL ) จาก
ปลายเวทีไปยังจุดสิ้นสุดของ cephalotorax ; ความยาวซีฟาโลโทแรกซ์
postorbital ( พล ) จากเบื้องหลัง ดูจบ
cephalotorax ; กว้าง pleon ( เหตุใด ) , วัดในส่วนช่องท้อง
2 ; ความยาวความกว้างและความสูงของ chelae ( LC , ห้องสุขาและ
HC ตามลำดับ ) และความยาวของแพทช์สีแดง ( LRP ) เมื่อปัจจุบัน .
น้ำหนักของ chelae ( cwe ) และ pleon ( ปแว ) ของสัตว์แต่ละ
ยังบันทึก ขนาดของ endopod และ exopod ครั้งแรก
pleopods และสอง พร้อมกับสัณฐานของ pleopod
ซีตี้ , วิเคราะห์คุณภาพภายใต้กล้องจุลทรรศน์แสง (  40 ) ,
และเปรียบเทียบระหว่างกลุ่ม โดยคำนึงถึงว่าผู้ชาย
plumose เส้นที่มีอยู่ในขณะที่มีเพียงความคืบหน้าของหญิง
สุกง่าย ( ovigerous ) เส้นพัฒนาขึ้นใน endopod
, ซึ่งมีขนาดใหญ่กว่า exopod [ 53 ] .
หลังจากที่ถูกให้ยาสลบโดยเย็นที่  20  เป็นเวลา 15 นาทีกระดอง
ของ สัตว์แต่ละตัวจะถูกลบออกและระบบการสืบพันธุ์
ถูกตรวจสอบเพื่อตรวจสอบขนาดญาติของพวกเขารูปแบบและสี พวกเขา
แล้วได้อย่างรวดเร็วรายงาน , ชั่งน้ำหนัก และคงที่ Bouin โซลูชั่น
4 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง เนื้อเยื่อถูกแห้งและในที่สุด
ฝังในพาราฟิน ส่วนที่ 5 – 7 ผมหนา ใช้ย้อม ( ย้อม
กับ eosin และเทคนิคแมสเซิ่น . อย่างน้อยสาม
สไลด์จากแต่ละกุ้งถูกตรวจสอบภายใต้กล้องจุลทรรศน์
โครงสร้างของอัณฑะและกามโรคบุผิวปริมาณสัมพัทธ์
การหลั่งและองค์ประกอบของหลักและชั้นมัธยมของ spermatophore 32,33,67
[ ]
) เชิงคุณภาพวิเคราะห์ และหมายเลขของส่วนเกี่ยวกับน้ำอสุจิสายไฟภายใน