1. Reagent: The assay reagent is ma

1. Reagent: The assay reagent is made by dissolving 100 mg of Coomassie Blue G250 in 50 mL of 95% ethanol. The solution is then mixed with 100 mL of 85% phosphoric acid and made up to 1 L with distilled water (see Note 5).
The reagent should be filtered through Whatman no. 1 filter paper and then stored in an amber bottle at room temperature. It is stable for several weeks. However, during this time dye may precipitate from solution and so the stored reagent should be filtered before use.
2. Protein standard (see Note 6). Bovine γ-globulin at a concentration of 1 mg/mL (100 μg/mL for the microassay) in distilled water is used as a stock solution. This should be stored frozen at –20oC. Since the moisture content of solid protein may vary during storage, the precise concentration of protein in the standard solution should be determined from its absorbance at 280 nm. The absorbance of a 1 mg/mL solution of γ- globulin, in a 1- cm light path, is 1.35. The corresponding values for two alternative protein standards, bovine serum albumin and ovalbumin, are 0.66 and 0.75, respectively.
3. Plastic and glassware used in the assay should be absolutely clean and detergent free. Quartz (silica) spectrophotometer cuvettes should not be used, as the dye binds to this material. Traces of dye bound to glassware or plastic can be removed by rinsing with methanol or detergent solution.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

1. รีเอเจนต์: รีเอเจนต์ทดสอบจะทำ โดยยุบ 100 มิลลิกรัมของ G250 สี Coomassie ใน 50 mL ของเอทานอล 95% โซลูชั่นแล้วผสมกับ 100 mL ของกรดฟอสฟอริก 85% และทำถึง 1 L กับกลั่นน้ำ (ดูหมายเหตุ 5)รีเอเจนต์ควรมีกรองโดยใช้กระดาษกรอง Whatman no. 1 แล้ว เก็บไว้ในขวดเป็นสีเหลืองอำพันที่อุณหภูมิห้อง ได้มั่นคงหลายสัปดาห์ อย่างไรก็ตาม ในช่วงเวลานี้ย้อมอาจ precipitate จากโซลูชันและ รีเอเจนต์ที่เก็บควรมีกรองก่อนใช้2. โปรตีนมาตรฐาน (ดูหมายเหตุ 6) ใช้วัวγ-กลอบูลินที่ความเข้มข้น 1 mg/mL (100 μg/mL สำหรับการ microassay) ในน้ำกลั่นเป็นการแก้ปัญหาสินค้าคงคลัง นี้ควรเก็บแช่แข็งที่ – 20oC เนื่องจากเนื้อหาความชื้นโปรตีนแข็งอาจแตกต่างกันระหว่างการเก็บรักษา ควรกำหนดความแม่นยำความเข้มข้นของโปรตีนในสารละลายมาตรฐานจากของ absorbance ที่ 280 nm Absorbance ของโซลูชัน 1 mg/mL ของγ-กลอบูลิน ใน 1 ซม.ไฟเส้น เป็น 1.35 ค่าที่ตรงกันสำหรับมาตรฐานโปรตีนอื่นสอง วัว serum albumin และ ovalbumin มี 0.75 และ 0.66 ตามลำดับ3. พลาสติกและเครื่องแก้วที่ใช้ในการวิเคราะห์ควรจะสะอาด และผงซักฟอกอย่างฟรี ควอตซ์ (ซิลิก้า) เครื่องทดสอบกรดด่าง cuvettes ไม่ควรใช้ เป็นการย้อม binds กับวัสดุนี้ ร่องรอยของสีย้อมกับแก้วหรือพลาสติกสามารถเอาออกได้ โดยการล้างด้วยเมทานอลหรือโซลูชันผงซักฟอก

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

1. สารเคมี: สารทดสอบที่ทำโดยการละลาย 100 มิลลิกรัม Coomassie สีน้ำเงิน G250 ใน 50 มลเอทานอล 95% การแก้ปัญหาคือผสมกับ 100 มิลลิลิตรของกรดฟอสฟ 85% และสูงสุดถึง 1 ลิตรด้วยน้ำกลั่น (ดูหมายเหตุ 5).
น้ำยาควรจะกรองผ่านเบอร์ไม่มี 1 กระดาษกรองแล้วเก็บไว้ในขวดสีเหลืองอำพันที่อุณหภูมิห้อง จะมีเสถียรภาพเป็นเวลาหลายสัปดาห์ อย่างไรก็ตามในระหว่างการย้อมเวลานี้อาจเกิดการตกตะกอนจากการแก้ปัญหาและเพื่อให้การจัดเก็บสารควรจะกรองก่อนการใช้งาน.
2 โปรตีนมาตรฐาน (ดูหมายเหตุ 6) โคγ-globulin ที่ความเข้มข้น 1 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร (100 ไมโครกรัม / มิลลิลิตรสำหรับ microassay) ในน้ำกลั่นจะใช้เป็นวิธีแก้ปัญหาสต็อก นี้ควรจะเก็บไว้ที่อุณหภูมิ -20 องศาเซลเซียสแช่แข็ง เนื่องจากความชื้นของโปรตีนที่เป็นของแข็งอาจแตกต่างกันระหว่างการเก็บรักษาความเข้มข้นที่แม่นยำของโปรตีนในสารละลายมาตรฐานควรจะพิจารณาจากการดูดกลืนแสงที่ 280 นาโนเมตร การดูดกลืนแสงของการแก้ปัญหา 1 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรโกลบูลิγ-ที่ใน 1 ซม. เส้นทางแสงคือ 1.35 ค่าที่สอดคล้องกันสำหรับสองมาตรฐานโปรตีนทดแทนโปรตีนชนิดหนึ่งในซีรั่มวัวและ ovalbumin เป็น 0.66 และ 0.75 ตามลำดับ.
3 พลาสติกและแก้วที่ใช้ในการทดสอบที่ควรจะเป็นอย่างที่สะอาดและผงซักฟอกฟรี ควอตซ์ (ซิลิกา) cuvettes spectrophotometer ไม่ควรใช้เป็นสีย้อมผูกกับวัสดุนี้ ร่องรอยของสีย้อมผูกไว้กับแก้วหรือพลาสติกสามารถลบออกได้โดยการล้างด้วยเมทานอลหรือสารละลายผงซักฟอก

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

1 . ที่ใช้ : ( สารเคมีที่ถูกสร้างขึ้นโดยการละลาย 100 มก. เหล่านี้น่าจะเป็นสีฟ้า g250 50 มิลลิลิตรเอทานอล 95% โซลูชั่นที่ผสมกับ 100 มิลลิลิตรของกรดฟอสฟอริก 85% และสร้างขึ้นด้วยน้ำกลั่น 1 ลิตร ( ดูหมายเหตุ 5 )
3 whatman ควรกรองผ่านกระดาษกรอง เบอร์ 1 แล้วเก็บไว้ในขวดสีชา ที่อุณหภูมิห้อง มันคงเป็นเวลาหลายสัปดาห์ อย่างไรก็ตามในช่วงเวลานี้สีอาจตกตะกอนจากสารละลายและสารเคมีที่เก็บไว้ควรกรองก่อนใช้ .
2 โปรตีนมาตรฐาน ( ดูหมายเหตุข้อ 6 ) วัวγ - โกลบูลินที่ความเข้มข้น 1 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร ( 100 μ g / ml สำหรับ microassay ) ในน้ำกลั่นที่ใช้เป็นโซลูชั่นที่สต็อก นี้ควรจะเก็บแช่แข็งที่ - 20oc . เนื่องจากความชื้นของเส้นโปรตีนอาจแตกต่างกันในระหว่างการเก็บความเข้มข้นของโปรตีนในสารละลายมาตรฐานชัดเจนควรกำหนดของการดูดกลืนแสงที่ 280 nm . น 1 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรของสารละลายγ - โกลบูลินใน 1 ซม. เส้นทางของแสงเป็น 1.35 . ค่าตรงกันสองมาตรฐานทดแทนโปรตีน albumin ซีรั่มวัว และโอวาลบูมิน , 0.66 และ 0.75 ตามลำดับ .
3พลาสติกและแก้วที่ใช้ในการทดสอบควรเป็นอย่างสะอาดและผงซักฟอกฟรี ควอทซ์ ( ซิลิกา ) เครื่องคิวเวทท์ไม่ควรใช้เป็นสีย้อมผูกกับวัสดุนี้ ร่องรอยของการมัดย้อมแก้วหรือพลาสติกสามารถลบออกได้โดยการล้างด้วยผงซักฟอก หรือสารละลายเมทานอล .