2.6. Adhesion capacity of isolated

2.6. Adhesion capacity of isolated strains
Adhesion capacity of isolated strains to HT-29 cells, human
colorectal adenocarcinoma cell line, was investigated. HT-29 cells
were cultured in RPMI 1640 medium with L-glutamine (300 mg/L)
(GlutaMAX, Gibco, Life Technologies, Rockville, MD, USA) supplemented
with 25 mM Hepes, 25 mM NaHCO3, 10% (v/v) fecal bovine
serum (FBS, Gibco, Life Technologies), 100 U/ml penicillin and
100 mg/ml streptomycin. Cells were grown at 37
C in atmosphere
of 5% CO2 and 95% air until a confluent monolayer was obtained.
Monolayers of HT-29 cells were seeded at a concentration of
5  105 cells/ml and dispensed into each 200 mm2 well of a 6 well
tissue culture plate. LAB strains were resuspended in HT-29 growth
medium to final concentration of 108 CFU/ml and 1 ml of the suspensionwas
added to each well of the tissue culture plate. After 1 h
incubation, the monolayers were washed four times with PBS (pH
7.4) in order to remove non-adherent bacteria. HT-29 cells were
lysed by the addition of 0.1% (v/v) Triton-X100 and the number of
viable adherent bacteria was determined by plating serially diluted
samples onto MRS agar plates. Colonies were enumerated after
anaerobic incubation for 24 h at 30 or 37
C and the adhesion capacity
was described as the number of bacterial cells adhered to a
HT-29 cell. Lactobacillus rhamnosus GG (ATCC53103) was used as a
highly adhesive positive control. Each adhesion assay was conducted
three times (three different passages) with duplicate
determinations.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.6. Adhesion capacity of isolated strainsAdhesion capacity of isolated strains to HT-29 cells, humancolorectal adenocarcinoma cell line, was investigated. HT-29 cellswere cultured in RPMI 1640 medium with L-glutamine (300 mg/L)(GlutaMAX, Gibco, Life Technologies, Rockville, MD, USA) supplementedwith 25 mM Hepes, 25 mM NaHCO3, 10% (v/v) fecal bovineserum (FBS, Gibco, Life Technologies), 100 U/ml penicillin and100 mg/ml streptomycin. Cells were grown at 37
C in atmosphereof 5% CO2 and 95% air until a confluent monolayer was obtained.Monolayers of HT-29 cells were seeded at a concentration of5  105 cells/ml and dispensed into each 200 mm2 well of a 6 welltissue culture plate. LAB strains were resuspended in HT-29 growthmedium to final concentration of 108 CFU/ml and 1 ml of the suspensionwasadded to each well of the tissue culture plate. After 1 hincubation, the monolayers were washed four times with PBS (pH7.4) in order to remove non-adherent bacteria. HT-29 cells werelysed by the addition of 0.1% (v/v) Triton-X100 and the number ofviable adherent bacteria was determined by plating serially dilutedsamples onto MRS agar plates. Colonies were enumerated afteranaerobic incubation for 24 h at 30 or 37
C and the adhesion capacitywas described as the number of bacterial cells adhered to aHT-29 cell. Lactobacillus rhamnosus GG (ATCC53103) was used as ahighly adhesive positive control. Each adhesion assay was conductedสามครั้ง (สามทางเดินแตกต่างกัน) พร้อมสำเนาวิเคราะห์ปริมาณ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.6 ความจุของการยึดเกาะของสายพันธุ์ที่แยก
ความจุการยึดเกาะของสายพันธุ์บางแห่งถึงเป็น HT-29 เซลล์ของมนุษย์
สายพันธุ์ของเซลล์มะเร็งลำไส้ใหญ่ได้รับการตรวจสอบ HT-29 เซลล์
เพาะเลี้ยงใน RPMI 1640 กลางที่มี L-Glutamine (300 mg / L)
(GlutaMAX, Gibco เทคโนโลยีชีวิต Rockville, MD, USA) เสริม
ด้วย 25 มม HEPES, 25 มม NaHCO3 10% (v / V ) อุจจาระวัว
ซีรั่ม (FBS, Gibco, ไลฟ์เทคโนโลยีส์) 100 U / ml penicillin และ
100 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร streptomycin เซลล์ที่ถูกปลูกที่ 37 องศาเซลเซียสในชั้นบรรยากาศ
ของ CO2 5% และอากาศ 95% จนกว่า monolayer ไหลมารวมกันที่ได้รับ.
monolayers ของเซลล์ HT-29 เมล็ดที่มีความเข้มข้นของ
5? 105 เซลล์ / มล. และจ่ายในแต่ละ 200 mm2 ดี 6 ดี
จานเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อ สายพันธุ์ LAB ถูก resuspended ใน HT-29 การเจริญเติบโต
ปานกลางถึงความเข้มข้นสุดท้าย 108 CFU / ml และ 1 มิลลิลิตรของ suspensionwas
เพิ่มไปยังดีจานเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อในแต่ละ หลังจาก 1 ชั่วโมง
บ่ม monolayers ถูกล้างครั้งที่สี่กับพีบีเอส (pH
7.4) เพื่อที่จะกำจัดเชื้อแบคทีเรียที่ไม่ใช่พรรคพวก HT-29 เซลล์ถูก
lysed โดยนอกเหนือจาก 0.1% (ที่ v / v) Triton-X100 และจำนวนของ
แบคทีเรียพรรคพวกที่ทำงานได้ถูกกำหนดโดยการชุบเจือจางลำดับ
ตัวอย่างลงบนจานอาหารเลี้ยงเชื้อ MRS อาณานิคมแจกแจงหลังจาก
บ่มแบบไม่ใช้ออกซิเจนเป็นเวลา 24 ชั่วโมงวันที่ 30 หรือ 37 องศาเซลเซียสและความสามารถในการยึดเกาะ
ได้รับการอธิบายว่าจำนวนของเซลล์แบคทีเรียยึดติดกับการให้
เซลล์ HT-29 Lactobacillus rhamnosus GG (ATCC53103) ถูกใช้เป็น
ควบคุมบวกกาวสูง แต่ละการทดสอบการยึดเกาะได้ดำเนินการ
สามครั้ง (สามทางเดินที่แตกต่างกัน) ด้วยซ้ำ
หาความ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.6 ความจุของการแยกสายพันธุ์ความจุของการแยกสายพันธุ์ ht-29 เซลล์ของมนุษย์ลำไส้ใหญ่ adenocarcinoma เซลล์เส้นถูกตรวจสอบ ht-29 เซลล์เพาะเลี้ยง RPMI 1640 ในระดับปานกลางกับ Glutamine ( 300 mg / L )( glutamax gibco , ชีวิต , เทคโนโลยี , วิลล์ , MD , USA ) อาหารฮีเปสโซเดี่ยม 25 มิลลิเมตร 25 มิลลิเมตร , 10% ( v / v ) อุจจาระวัวเซรั่ม ( FBS gibco เทคโนโลยีชีวิต ) , 100 U / ml เพนนิซิลิน และ100 mg / ml จัง . เซลล์มีการโตขึ้นที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส ในบรรยากาศคาร์บอนไดออกไซด์ 5% และ 95% เครื่องจนถึงชั้นที่กระจู๋กระจี๋ได้ .monolayers ของ ht-29 เซลล์มีความเข้มข้นของเมล็ด5 ) เซลล์ / มิลลิลิตรและจ่ายในแต่ละ 200 แน่นดีของ 6 ดีจานเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อ resuspended ในการเจริญเติบโต ht-29 แล็บสายพันธุ์ระดับความเข้มข้นสุดท้าย 108 CFU / ml และ 1 มิลลิลิตรของ suspensionwasเพิ่มด้วยการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อของแต่ละแผ่น หลังจาก 1 ชั่วโมงบ่ม , monolayers ถูกล้าง 4 ครั้งกับ PBS ( อ7.4 ) เพื่อขจัดแบคทีเรียติดไม่ ht-29 เซลล์คือlysed โดย 0.1 ( v / v ) triton-x100 และหมายเลขของแบคทีเรียสานุศิษย์ได้ถูกกําหนดโดยชุบเป็นเจือจางนางวุ้นตัวอย่างลงจาน มีแจกแจงหลังอาณานิคมถังบ่มเป็นเวลา 24 ชั่วโมง ที่ 30 และ 37 องศาเซลเซียส และการยึดเกาะความจุได้อธิบายไว้ว่าเป็นจำนวนเซลล์แบคทีเรียจะปฏิบัติตามht-29 เซลล์ rhamnosus Lactobacillus GG ( atcc53103 ) ถูกใช้เป็นกาวสูงการควบคุมในเชิงบวก แต่ละตัวโดยมีวัตถุประสงค์ครั้งที่สาม ( สามหัวข้อที่แตกต่างกัน ) ที่ซ้ำกันปณิธาน .