GFP-marked bacteria can be detected by several methods. Direct microscopy of gfp-marked bacteria is simple using an epifluorescent microscope with a GFP filter kit, and bacterial counts are rapid and precise (Leff and Leff, 1996). In our laboratory,using cells marked with the red-shifted mutant, and a filter kit (e.g., Chroma Technology Corp., Brattleboro, VT: excitation wavelength, 420–470 nm; emission wavelength 490–530 nm) individual cells are easy to see and count, fluorescing bright green on a black background. A model 120es 1.2 million pixel digital camera system (Pixera Corp., 140 Knowles Drive, Los Gatos, CA 95030, USA) interfaced with a PC is routinely used for imaging individual cells and colonies. Bloemberg et al. (1997) observed one or a few GFP-marked cells in a background of .10 unlabelled cells on a wet mount slide. An epifluorescent microscope equipped with a standard fluorescein isothiocyanate (FITO) filter set is also effective for the detection of gfp red-shifted mutants which have excitation and emission maxima at 488 and 510 nm, respectively (Cormack et al., 1996). Interfacing an epifluorescent microscope with a charged-coupled device (CCD) camera and image analysis software can enhance and allow quantification of the fluorescence of individual gfp-tagged bacteria. Since the wild-type gfp only has a minor excitation peak at 475 nm, visualization of bacteria labelled with the wild-type gfp through this filter set will not be optimal. Although a DAPI (496-diamidino-2-phenylindole) filter set with excitation and barrier filters of 330–380 and 435 nm, respectively, are suitable for wild-type gfp detection, the fluorescent protein is subject to a high level of photobleaching under short wavelength excitation.
แบคทีเรีย GFP เครื่องหมายสามารถตรวจพบโดยวิธีการหลายวิธี กล้องจุลทรรศน์โดยตรงแบคทีเรีย GFP เครื่องหมายเป็นเรื่องง่ายโดยใช้กล้องจุลทรรศน์ epifluorescent กับชุด GFP กรองและปริมาณแบคทีเรียมีความรวดเร็วและแม่นยำ (Leff และ Leff, 1996) ในห้องปฏิบัติการของเราโดยใช้เซลล์ที่มีเครื่องหมายสีแดงขยับตัวกลายพันธุ์และชุดตัวกรอง (เช่นสีมาเทคโนโลยีคอร์ป, เวอร์มอนต์. ความยาวคลื่นกระตุ้น 420-470 นาโนเมตร;ปล่อยความยาวคลื่น 490-530 นาโนเมตร) แต่ละเซลล์เป็นเรื่องง่ายที่จะเห็นและนับเรืองแสงสีเขียวสดใสบนพื้นหลังสีดำ แบบ 120es 1.2 ล้านพิกเซลกล้องระบบดิจิตอล (pixera Corp., 140 ไดรฟ์ Knowles, Los Gatos, CA 95030, USA) เชื่อมต่อกับคอมพิวเตอร์ถูกนำมาใช้เป็นประจำสำหรับการถ่ายภาพแต่ละเซลล์และอาณานิคม อัล bloemberg et(1997) ตั้งข้อสังเกตหนึ่งหรือเซลล์ GFP เครื่องหมายไม่กี่ในพื้นหลังของเซลล์ 0.10 ป้ายกำกับบนภาพนิ่งติดเปียก กล้องจุลทรรศน์ epifluorescent พร้อมกับ fluorescein isothiocyanate มาตรฐาน (Fito) ชุดกรองยังมีประสิทธิภาพในการตรวจหาการกลายพันธุ์ของ GFP แดงขยับตัวไปมาซึ่งมีการกระตุ้นและการปล่อยก๊าซเรือนกระจกสูงสุดที่ 488 และ 510 นาโนเมตรตามลำดับ (แมคค์, et al., 1996)เชื่อมต่อกับกล้องจุลทรรศน์ epifluorescent อุปกรณ์ชาร์จคู่ (CCD) กล้องและซอฟต์แวร์การวิเคราะห์ภาพสามารถเพิ่มและช่วยให้ปริมาณการเรืองแสงของแบคทีเรีย GFP ที่ติดแท็กบุคคล ตั้งแต่ GFP ป่าชนิดเท่านั้นที่มีการกระตุ้นยอดเขาเล็ก ๆ น้อย ๆ ที่ 475 นาโนเมตร, การสร้างภาพของแบคทีเรียกำกับด้วย GFP wild-type ผ่านชุดกรองนี้จะไม่ดีที่สุดแม้ว่า DAPI (496-diamidino-2-phenylindole) ชุดกรองกับตัวกรองการกระตุ้นและอุปสรรคจาก 330-380 และ 435 นาโนเมตรตามลำดับมีความเหมาะสมสำหรับการตรวจสอบ GFP wild-type, โปรตีนเรืองแสงเป็นเรื่องที่อยู่ในระดับสูงภายใต้ photobleaching กระตุ้นความยาวคลื่นสั้น
การแปล กรุณารอสักครู่..
แบคทีเรีย gfp - ทำเครื่องหมายไว้จะได้รับการตรวจพบจากหลายวิธี การตรวจวิเคราะห์สารเคมีโดยตรงของเชื้อแบคทีเรีย gfp - ทำเครื่องหมายเป็นแบบเรียบง่ายโดยใช้กล้องจุลทรรศน์ epifluorescent พร้อมด้วยชุดแผ่นกรอง gfp และนับจากแบคทีเรียได้อย่างรวดเร็วและแม่นยำ( leff และ leff 1996 ) ในห้องปฏิบัติการของเราเซลล์โดยใช้เครื่องหมายสีแดง - หันไป mutant และชุดแผ่นกรอง(เช่น CHROMA คือเทคโนโลยีแบงกิ้งคอร์ปอเรชั่น brattleboro VT ความยาวคลื่นไดนาโม)ด้วยไฟฟ้า 420-470 nmการปล่อยคลื่นแม่เหล็กไฟฟ้าความยาวคลื่น 490-530 nm )แต่ละเซลล์ได้อย่างง่ายดายเพื่อดูและนับ fluorescing สว่างสดใสสีเขียวบนพื้นหลังสีดำ รุ่น 120 เอส 1.2 ล้านพิกเซลระบบกล้องดิจิตอล( pixera Corp ., 140 knowles ขับรถ, Los gatos , CA 95030 , USA )เชื่อมต่อกับเครื่องพีซีถูกนำมาใช้อย่างสม่ำเสมอสำหรับการถ่าย ภาพ บุคคลเซลล์และอาณานิคม. bloemberg et al .( 1997 )พบว่าหนึ่งหรือเซลล์ gfp - ทำเครื่องหมายไว้ไม่กี่แห่งที่หนึ่งในพื้นหลังของอัตรา .10 เซ็นต์ unlabelled เซลล์ที่เปียก,ติดตั้งบนผนัง, ภาพ สไลด์ epifluorescent กล้องจุลทรรศน์ที่จัดให้บริการด้วยมาตรฐานรักษาตัวหิน isothiocyanate ( fito )แผ่นกรองตั้งค่าเป็นยังมีผลบังคับใช้สำหรับการตรวจจับ gfp สีแดง - หันไปข้าวเจ้าที่มีไดนาโม)ด้วยไฟฟ้าและลดการปล่อยขีดสูงสุดที่ 488 และ 510 nm ,ตามลำดับ( cormack et al ., 1996 )การอินเตอร์เฟซกล้องจุลทรรศน์ epifluorescent พร้อมด้วยจึงจำเป็นต้องมีแบตเตอรี่เต็ม - ประกอบอุปกรณ์( CCD )กล้องและซอฟต์แวร์การวิเคราะห์ ภาพ สามารถช่วยเพิ่ม ประสิทธิภาพ และช่วยให้มีคุณสมบัติฟลูเรซ - เซ็นซของแบคทีเรีย gfp - แท็กแต่ละรายได้ นับตั้งแต่ gfp ป่า - พิมพ์ที่มีไดนาโม)ด้วยไฟฟ้าเพียงเล็กน้อยสูงสุดที่ 475 nm จอภาพ ของแบคทีเรียมีป้ายที่มี gfp ป่า - พิมพ์โดยผ่านชุดแผ่นกรองนี้จะไม่ได้ดีที่สุดแม้ว่า dapi ( 496 - diamidino 2 - phenylindole )แผ่นกรองที่ตั้งค่าด้วยตัวกรองอุปสรรคและไดนาโม)ด้วยไฟฟ้าของ nm 330-380 และ 435 ตามลำดับมีความเหมาะสมสำหรับการตรวจจับ gfp ป่า - ประเภท โปรตีนจากแสงฟลูออเรสเซนต์จะขึ้นอยู่กับระดับสูงของ photobleaching ตามไดนาโม)ด้วยไฟฟ้าความยาวคลื่นเพื่อไปถึงได้ไม่ไกลนัก
การแปล กรุณารอสักครู่..