A strain of A. cellulolyticus C-1 (Ferm P-18508) was provided by
Tsukishima Kikai (Tokyo, Japan), which is a hyper-producer
mutant of the original strain, A. cellulolyticus Y-94 [23,24]. The
mediumcomposition (perm3) for growth of A. cellulolyticus was
40 kg SF, 24 kg KH2PO4, 1 dm3 Tween 80, 5 kg (NH4)2SO4, 4.7 kg
K2C4H4O6$4H2O, 1.2 kg MgSO4$7H2O, 10 g ZnSO4$7H2O, 9.28 g
MnSO4$7H2O, 8.74 g CuSO4$7H2O and 2 kg urea. The pH was
adjusted to 4.0 [7]. The trace minerals were autoclaved separately
to avoid losing mineral content from the medium during
autoclaving. Urea was sterilized by filtering using a 0.45-mm
membrane filter (Toyo Roshi Kaisha, Tokyo, Japan). Sterilized
medium components were mixed on a clean bench. The
composition of cellulase-producing medium and its preparation
were similar to those for growth medium, except that the
SF concentration was 50 kgm3 and the pH was adjusted to 4.5
[7]. Seed cultivation was carried out using 5cm3mediumin test
tubes at 28 C and 18.72 rad s1 for 65 h. Cellulase production
was carried out in 500 cm3 Erlenmeyer flasks with 50 cm3
medium at 28 C and 18.72 rad s1 after addition A. cellulolyticus
inoculum with its volume fraction of 10%. After cellulase
production, the whole culture broth was centrifuged at 416 rad
s1 for 1200 s in a centrifuger (Sorvall Biofuge Primo R; Fischer
Scientific, Pittsburgh, PA, USA). The supernatant of the culture
broth containing protein was collected, mixed gradually with
cold acetone (the volume fraction of 50%), followed by centrifugation
again to precipitate protein. After centrifugation, the
precipitated protein was transferred into a porcelain mortar
and evaporated at 100 C, and the the acetone was recovered
using a rotary evaporator for reuse. The dried cellulase powder
was assayed for its cellulase activity and stored at 4 C until use
for PS saccharification.
ต้องใช้ของอ. cellulolyticus C-1 (Ferm P-18508) ได้รับTsukishima Kikai (โตเกียว ญี่ปุ่น), ซึ่งเป็นไฮเปอร์โปรดิวเซอร์mutant ของพันธุ์เดิม A. cellulolyticus Y-94 [23,24] ที่mediumcomposition (perm3) สำหรับการเจริญเติบโตของ A. cellulolyticus ได้40 กิโลกรัม SF, 24 กก. KH2PO4, 1 dm3 Tween 80, 5 กิโลกรัม (NH4) 2SO4, 4.7 กิโลกรัมK2C4H4O6$ 4H2O, 7H2O$ MgSO4 1.2 กิโลกรัม 10 g $ ZnSO4 7H2O, 9.28 gMnSO4$ 7H2O, 8.74 g CuSO4$ 7H2O และ 2 กิโลกรัมยูเรีย มี pHปรับปรุง 4.0 [7] แร่มี autoclaved แยกต่างหากเพื่อหลีกเลี่ยงการสูญเสียแร่เนื้อหาจากสื่อระหว่างautoclaving ยูเรียถูก sterilized โดยการกรองใช้ 0.45-มม.ตัวกรองเมมเบรน (โตโย Roshi Kaisha โตเกียว ญี่ปุ่น) Sterilizedส่วนกลางได้ผสมกับม้านั่งสะอาด ที่องค์ประกอบของสื่อผลิต cellulase และเตรียมของคล้ายกับการเจริญเติบโตปานกลาง ยกเว้นที่มีการความเข้มข้นของ SF ได้ 50 kgm 3 และปรับ pH เป็น 4.5[7] การเพาะปลูกเมล็ดถูกดำเนินการโดยใช้ 5cm3mediumin ทดสอบหลอดที่ 28 C และ 18.72 rad s 1 ใน 65 h. ผลิต Cellulaseทำออกมาในน้ำ 500 cm3 Erlenmeyer กับ 50 cm3กลางที่ 28 C และ 18.72 rad s 1 หลังนอกจากนี้อ. cellulolyticusinoculum กับปริมาณเศษของ 10% หลังจาก cellulaseผลิต ซุปทั้งวัฒนธรรมถูก centrifuged ที่ 416 rads 1 สำหรับ s 1200 ใน centrifuger (Sorvall Biofuge Primo R ฟิสเชอร์วิทยาศาสตร์ พิตส์เบิร์ก PA สหรัฐอเมริกา) Supernatant ของวัฒนธรรมซุปประกอบด้วยโปรตีนถูกเก็บรวบรวม ค่อย ๆ ผสมด้วยเย็นอะซิโตน (ตัวปริมาณเศษของ 50%), ตาม ด้วย centrifugationอีกครั้งเพื่อ precipitate โปรตีน หลังจาก centrifugation การโปรตีนตกตะกอนถูกถ่ายโอนลงในครกเครื่องเคลือบดินเผาและหายไปที่ 100 C และอะซีโตนถูกกู้คืนใช้ evaporator โรตารี่สำหรับนำมาใช้ใหม่ ผงแห้ง cellulaseassayed สำหรับกิจกรรมของ cellulase และเก็บไว้ที่ 4 C จนใช้สำหรับ PS saccharification
การแปล กรุณารอสักครู่..

สายพันธุ์ของเอ cellulolyticus C-1 (Ferm P-18508) ถูกจัดให้โดย
Tsukishima Kikai (โตเกียวประเทศญี่ปุ่น)
ซึ่งเป็นผู้ผลิตมากเกินไปกลายพันธุ์ของสายพันธุ์เดิมเอcellulolyticus Y-94 [23,24]
mediumcomposition (perm3) การเจริญเติบโตของเอ cellulolyticus เป็น
40 กก. เอสเอฟ 24 กก. KH2PO4 1 dm3 Tween 80, 5 กิโลกรัม (NH4) 2SO4 4.7 กิโลกรัม
K2C4H4O6 $ 4H2O 1.2 กิโลกรัม MgSO4 7H2O $ 10 กรัม ZnSO4 $ 7H2O, 9.28 กรัม
MnSO4 $ 7H2O, 8.74 กรัม CuSO 4 $ 7H2O และ 2 กกยูเรีย พีเอชที่ได้รับการปรับให้ 4.0 [7] แร่ธาตุร่องรอยถูกเบาแยกเพื่อหลีกเลี่ยงการสูญเสียแร่ธาตุจากกลางระหว่างการนึ่งฆ่าเชื้อ ยูเรียได้รับการฆ่าเชื้อโดยการกรองโดยใช้ 0.45 มมกรองเมมเบรน (Toyo Roshi Kaisha โตเกียวประเทศญี่ปุ่น) ฆ่าเชื้อส่วนประกอบสื่อผสมบนม้านั่งทำความสะอาด องค์ประกอบของกลางเซลลูเลสที่ผลิตและการเตรียมการที่มีความคล้ายคลึงกับการเจริญเติบโตสำหรับสื่อยกเว้นว่าความเข้มข้นของเอสเอฟ50 kgm 3 และค่า pH ที่ถูกปรับ 4.5 [7] การเพาะปลูกเมล็ดพันธุ์ได้รับการดำเนินการโดยใช้การทดสอบ 5cm3mediumin หลอดที่ 28 องศาเซลเซียสและ 18.72 ล้อ s? 1 สำหรับ 65 ชั่วโมง การผลิตเซลลูเลสได้ดำเนินการใน 500 cm3 ขวด Erlenmeyer 50 cm3 กลางวันที่ 28 องศาเซลเซียสและ 18.72 ล้อของ 1 หลังนอกจากนี้เอ cellulolyticus เชื้อกับส่วนปริมาณ 10% หลังจากที่เซลลูเลสผลิตน้ำซุปวัฒนธรรมทั้งหมดถูกหมุนเหวี่ยงที่ 416 ล้อ s 1 1200 ใน centrifuger (ที่ Sorvall Biofuge Primo R; ฟิสเชอร์? วิทยาศาสตร์พิตส์เบิร์ก, PA, สหรัฐอเมริกา) ใสของวัฒนธรรมที่น้ำซุปที่มีโปรตีนที่ถูกเก็บรวบรวมผสมค่อยๆกับอะซีโตนเย็น(ส่วนปริมาณ 50%) ตามด้วยการหมุนเหวี่ยงอีกครั้งเพื่อให้เกิดการตกตะกอนโปรตีน หลังจากการหมุนเหวี่ยงที่โปรตีนตกตะกอนถูกย้ายเข้ามาในครกพอร์ซเลนและระเหยที่100 องศาเซลเซียสและอะซีโตนที่ถูกกู้คืนโดยใช้เครื่องระเหยแบบหมุนเพื่อนำมาใช้ ผงแห้งเซลลูเลสได้รับการวิเคราะห์ว่าเป็นกิจกรรมที่เซลลูเลสและเก็บไว้ที่ 4 องศาเซลเซียสจนใช้สำหรับPS saccharification
การแปล กรุณารอสักครู่..

สายพันธุ์ของ cellulolyticus c-1 ( มี p-18508 ) โดย
คิชิมะ kikai ( โตเกียว , ญี่ปุ่น ) ซึ่งเป็นผู้ผลิตไฮเปอร์
กลายพันธุ์สายพันธุ์เดิม อ. cellulolyticus y-94 [ 23,24 ]
mediumcomposition ( perm3 ) สำหรับการเจริญเติบโตของ cellulolyticus คือ
40 กก. SF , kh2po4 24 กก. 1 dm3 Tween 80 , 5 กก. ( NH4 ) 2so4 , 4.7 กก
k2c4h4o6 $ 4h2o 1.2 กก. MgSO4 ใ $ 7h2o 10 กรัม znso4 $ 7h2o , g ,
$ 7h2o mnso4 8 .7h2o CuSO4 $ 74 กรัมและ 2 กิโลกรัม ปุ๋ยยูเรีย ค่า pH คือ
ปรับเป็น 4.0 [ 7 ] แร่ธาตุสังเคราะห์ต่างหาก
เพื่อหลีกเลี่ยงการสูญเสียแร่ธาตุจากอาหารระหว่าง
อัตราส่วนโฟกัส . ยูเรียถูกฆ่าเชื้อโดยการกรองโดยใช้เยื่อกรอง 0.45-mm
( ญี่ปุ่นโตโยโรชิ kaisha , โตเกียว , ) ฆ่าเชื้อ
ปานกลางผสมสะอาดส่วนประกอบบนม้านั่ง
องค์ประกอบของเอนไซม์การผลิตขนาดกลาง และการตระเตรียม
คล้ายกับพวกปานกลางการเจริญเติบโต ยกเว้นว่า
SF ความเข้มข้น 50 กิโลกรัมเมตร 3 และปรับ pH 4.5
[ 7 ] การเพาะเมล็ดมีการใช้หลอดทดสอบ
5cm3mediumin ที่ 28 C และ 18.72 ราดด้วย 1 65 ชั่วโมง เซลลูเลส การผลิต
ได้ดําเนินการใน 500 cm3 เออร์เลนเมเยอร์ flasks กับ 50 cm3
ขนาดกลางที่ 28 C และ 1872 ราดด้วย 1 หลัง 2 . cellulolyticus
3 ที่มีปริมาณ 10% หลังจากการผลิตเซลลูเลส
, ซุปวัฒนธรรมทั้งในระดับ 416 ราด
s 1 1200 ใน centrifuger ( sorvall biofuge Primo R ; ฟิชเชอร์
ทางวิทยาศาสตร์ , Pittsburgh , PA , USA ) และน่าน ของวัฒนธรรมอาหารที่มีโปรตีนเป็นข้อมูล
เย็นผสมค่อยๆกับอะซิโตน ( ปริมาณ 50 % )ตามด้วย 3
อีกครั้งตกตะกอนโปรตีน หลังการปั่นเหวี่ยงตกตะกอนโปรตีน ,
โอนเป็นกระเบื้องและปูน
ระเหยที่ 100 C และอะซิโตนถูกกู้คืนโดยใช้เครื่องระเหยแบบหมุนใช้ใหม่
. เอนไซม์ผงแห้ง
ซีรั่มสำหรับกิจกรรมเซลลูเลสและเก็บไว้ที่ 4 องศาเซลเซียส จนใช้
สำหรับ PS เส้น .
การแปล กรุณารอสักครู่..
