Advantageous Effects of Invention
[0012]
According to the การประดิษฐ์นี้, it is possible to provide a ตู้เพาะเลี้ยง capable
of preparing a large number of ลูกกลม with a uniform size with high efficiency and having a 25 micro-ที่ว่าง structure which is designed to enable การแทนที่ of a อาหารเลี้ยง and harvesting of
cells, and a วิธีเพาะเลี้ยง using the ตู้เพาะเลี้ยง.
Brief Description of Drawings
[0013]
30 Fig. 1 is a diagram showing an example of a ตู้เพาะเลี้ยง according to an
embodiment;
Fig. 2 is a cross-sectional view showing an example of the shape of a recess according to a first embodiment;
Fig. 3 is a top view showing an example of the shape of the recess according to the first
embodiment;
Fig. 4 is a diagram showing an example of the shape of a recess formed using a part of a spherical shape according to a second embodiment;
Fig. 5 is a diagram showing another example of the shape of a recess formed using a 5 part of a spherical shape according to the second embodiment;
Fig. 6 is a diagram showing an example of the shape of a recess formed using a truncated cone shape according to the second embodiment;
Fig. 7 is a diagram showing another example of the shape of a recess according to the second embodiment;
10 Fig. 8 is a diagram showing an example of the shape of an ส่วนช่องเปิด according to
a third embodiment;
Fig. 9 is a diagram showing another example of the shape of an ส่วนช่องเปิด according to the third embodiment;
Fig. 10 is a diagram showing an example of the structure of a ตู้เพาะเลี้ยง according
15 to a fourth embodiment;
Fig. 11 is a diagram showing another example of the structure of the ตู้เพาะเลี้ยง according to the fourth embodiment;
Fig. 12 is a diagram showing still another example of the structure of the ตู้เพาะเลี้ยง according to the fourth embodiment;
20 Fig. 13 is a diagram showing a survival rate of ลูกกลม in an example and a survival
rate of ลูกกลม in a comparative example at the time of การแทนที่ of a อาหารเลี้ยง;
Fig. 14 shows a photograph illustrating an image of ลูกกลม in the example and a photograph illustrating an image of ลูกกลม in the comparative example before and after the การแทนที่ of a อาหารเลี้ยง;
25 Fig. 15 shows a photograph illustrating an image of cells before the cells are recovered
in the example and a photograph illustrating an image of cells after the cells are recovered in the example; and
Fig. 16 shows photographs of ลูกกลม recovered from a ตู้เพาะเลี้ยง according to the example.
30
Description of Embodiments
[0014]
Embodiments will be described below with reference to the drawings. To clarify the explanation, omissions and simplifications are made as necessary in the following description
and the drawings. Throughout the drawings, the constituent elements having the same
configuration or function, or corresponding parts are denoted by the same reference numerals, and the descriptions thereof are omitted.
[0015]
5 First Embodiment
Fig. 1 is a diagram showing an example of a ตู้เพาะเลี้ยง according to an
embodiment. Fig. 1 shows a part of a culture plate 3 including a จำนวนที่มากกว่าหนึ่ง of ตู้เพาะเลี้ยงs 1.
Fig. 1 shows a part of a culture plate 3 including a จำนวนที่มากกว่าหนึ่ง of ตู้เพาะเลี้ยงs 1. The upper 10 part of Fig. 1 shows some of a จำนวนที่มากกว่าหนึ่ง of โพรง .10 which are formed in the bottom of each of
the ตู้เพาะเลี้ยงs 1, when viewed from the top of the culture plate 3. The จำนวนที่มากกว่าหนึ่ง of
โพรง 10 are arranged in each of the ตู้เพาะเลี้ยงs 1. In terms of the production of the
ตู้เพาะเลี้ยงs 1 and the efficiency of cell culture, it is preferable to arrange the จำนวนที่มากกว่าหนึ่ง of
โพรง 10 in a regular manner. One ตู้เพาะเลี้ยง 1 corresponds to, for example, one well 15 arranged in a plate including a จำนวนที่มากกว่าหนึ่ง of wells. In other words, the จำนวนที่มากกว่าหนึ่ง of โพรง 10 are
arranged in the respective wells of a well plate.
A well plate is an experimental/testing instrument formed of a flat plate having a
number of dents (holes or wells), and each well is used as a test tube or a petri dish. The number
of wells is, for example, 6, 24, 96, 384, or more. Examples of the shape of the bottom of each 20 well include a flat shape, a round shape, and a combination of a number of elongated microtubes
(deep well plate).
Each recess 10 forms a micro-ที่ว่าง, which is a small ที่ว่าง for culture of cells, and thus each recess can also be referred to as a microchamber.
[0016]
25 Figs. 2 and 3 show an example of the shape of a recess according to a first embodiment.
Fig. 2 shows a cross-sectional view of one recess 10, and Fig. 3 shows a top view of one recess
10. The recess 10 shown in Fig. 3 is an example of the detailed structure of each of the โพรง
10 shown in the upper part of Fig. 1.
Each recess 10 is composed of a ส่วนล่าง 11 and an ส่วนช่องเปิด 12. The 30 ส่วนล่าง 11 is a portion serving as the bottom of the ตู้เพาะเลี้ยง 1, and the opening
portion 12 is a portion disposed above the ส่วนล่าง 11. A portion where the bottom
portion 11 and the ส่วนช่องเปิด 12 are in contact is referred to as a boundary. In Fig. 2, a
portion whose length is indicated by an arrow "R" corresponds to the location of the boundary.
In Fig. 3, the boundary location is indicated by a double dashed chain line. Note that the bottom
portion 11 and the ส่วนช่องเปิด 12 are formed of a continuous surface and are produced in an integrated manner
[0017]
Figs. 2 and 3 show an equivalent diameter R and a depth (height) H of each of the 5 จำนวนที่มากกว่าหนึ่ง of โพรง 10 formed in the ตู้เพาะเลี้ยง 1.
The term "equivalent diameter R" refers to the diameter of a circle inscribed in the
ส่วนล่าง 11 of each recess 10. In this case, the equivalent diameter R is the diameter of an
inscribed circle that is inscribed at the boundary between the ส่วนล่าง 11 and the opening
portion 12. More specifically, the equivalent diameter R is the diameter of a circle inscribed in a 10 shape of a plane that is perpendicular to the direction of the height H of each recess 10 at the
boundary.
The term "depth D" refers to a length from the bottom on the inside of the bottom
portion 11 to an upper end of each recess 10. The upper end of the recess 10 corresponds to an
end (upper end) of the ส่วนช่องเปิด 12. The depth D corresponds to the depth of a ที่ว่าง
15 formed by the recess 10. In other words, the depth D is a depth from the bottom of a ที่ว่าง,
which is formed by the ส่วนล่าง 11, to an upper end of a ที่ว่าง formed by the opening
portion 12. Fig. 2 shows not only the depth D of the recess 10, but also a depth Dl of the bottom
portion 11 and a depth D2 of the ส่วนช่องเปิด 12.
[0018]
20 The ส่วนล่าง 11 forms a ที่ว่าง (first ที่ว่าง) in which cells are cultured. The
ส่วนล่าง 11 has, for example, a hemispherical shape. For example, a shape obtained by dividing a spherical shape having the equivalent diameter R as a diameter into halves can be used. The shape of the ส่วนล่าง 11 is not limited to a hemispherical shape. Other specific examples of the shape will be described in a second embodiment.
25 The ส่วนช่องเปิด 12 forms a ที่ว่าง (second ที่ว่าง) that operates to support culture
and harvesting of cells. The ส่วนช่องเปิด 12 is formed of a wall which surrounds an area
from a boundary between the ส่วนช่องเปิด 12 and the ส่วนล่าง 11 to an end (tip) of the
recess 10 and which has a taper angle in a range from 1 degree to 20 degrees. The taper angle of
the wall constituting the ส่วนช่องเปิด 12 is ที่ควรใช้คือ in a range from 5 degrees to 15 degrees, 30 and ที่ควรใช้กว่าคือ, 10 degrees. This is because if the taper angle is extremely small, it is
difficult to transfer cells from the โพรง into a อาหารเลี้ยง during harvesting of the cells, and if
the taper angle is extremely large, the cells are removed during การแทนที่ of the อาหารเลี้ยง.
[0019]
Taper angles are represented by 01 and 02 in Fig. 2. In an example of the shape of each
9
recess 10 shown in Figs. 2 and 3, the taper angles 01 and 02 are substantially the same.
The boundary between the ส่วนล่าง 11 and the ส่วนช่องเปิด 12 is fon-ned in
such a manner that the equivalent diameter R is in a range from 50 pm to 1 mm To supply
nutrients to a central portion of a spheroid, the equivalent diameter is ที่ควรใช้คือ in a range from 5 50 pm to 500 pm, and ที่ควรใช้กว่าคือ, in a range from 100 pm to 500 pm. This is because it is
said that nutrients and oxygen are transferred into cells only by diffusion and a central portion of
a spheroid with a size of 300 pm or less does not become necrotic (Efrem Curcio et al., "Mass
transfer and metabolic reactions in hepatocyte ลูกกลม cultured in rotating wall gas-permeable
membrane system", Biomaterials 28 (2007) 5487-5497). Accordingly, the above-mentioned 10 diameter range is preferable to prevent a spheroid from growing to the size of 300 pm.
On the contrary, when it is intended to cause necrosis in a central portion of a cell, like
in a cancer cell (Franziska Hirschhaeuser et al., "Multice
ผลประโยชน์ของการประดิษฐ์[0012]ตามการประดิษฐ์นี้ เป็นตู้เพาะเลี้ยงที่สามารถให้ เตรียมของลูกกลมมีขนาดสม่ำเสมอ ด้วยประสิทธิภาพสูง และมีโครงสร้างไมโคร 25-ที่ว่างซึ่งเป็นการแทนที่ของอาหารเลี้ยงที่และเก็บเกี่ยว เซลล์ และวิธีเพาะเลี้ยงที่ใช้ในตู้เพาะเลี้ยงคำอธิบายโดยย่อของภาพวาด[0013]30 fig. 1 คือ ไดอะแกรมที่แสดงตัวอย่างของตู้เพาะเลี้ยงตามลื่นFig. 2 จะดูเหลวที่แสดงตัวอย่างของทรงย่อมุมตามลื่นแรกFig. 3 เป็นมุมมองด้านบนที่แสดงตัวอย่างของทรงย่อมุมตามครั้งแรกลื่นFig. 4 เป็นไดอะแกรมแสดงตัวอย่างของทรงย่อมุมที่เกิดขึ้นโดยใช้เป็นส่วนหนึ่งของรูปทรงกลมตามลื่นสองFig. 5 คือ ไดอะแกรมที่แสดงตัวอย่างอื่นของทรงย่อมุมที่เกิดขึ้นโดยใช้ส่วนของรูปทรงกลมตามลื่นสอง 5Fig. 6 เป็นไดอะแกรมแสดงตัวอย่างของทรงย่อมุมที่เกิดขึ้นโดยใช้รูปทรงกรวยตัดตามลื่นสองFig. 7 เป็นไดอะแกรมแสดงตัวอย่างอื่นของทรงย่อมุมตามลื่นสอง10 fig. 8 คือ ไดอะแกรมที่แสดงตัวอย่างของรูปร่างของการส่วนช่องเปิดตามลื่นที่สามFig. 9 คือ ไดอะแกรมที่แสดงตัวอย่างหนึ่งของรูปร่างของการส่วนช่องเปิดตามลื่นสามFig. 10 คือ ไดอะแกรมที่แสดงโครงสร้างของตู้เพาะเลี้ยงตามตัวอย่าง15 การสี่ลื่นFig. 11 คือ ไดอะแกรมที่แสดงตัวอย่างอื่นของโครงสร้างของตู้เพาะเลี้ยงตามลื่นสี่Fig. 12 คือ ไดอะแกรมที่แสดงโครงสร้างของตู้เพาะเลี้ยงตามลื่นสี่ อย่างอื่นยัง20 fig. 13 คือ ไดอะแกรมที่แสดงอัตราการอยู่รอดของลูกกลมในตัวอย่างและการอยู่รอดอัตราของลูกกลมในตัวอย่างเปรียบเทียบเวลาของการแทนที่อาหารเลี้ยงFig. 14 แสดงภาพถ่ายที่แสดงภาพของลูกกลมในตัวอย่างและภาพที่แสดงภาพของลูกกลมในตัวอย่างเปรียบเทียบก่อน และ หลังการแทนที่ของอาหารเลี้ยง25 fig. 15 แสดงเป็นภาพถ่ายที่แสดงภาพของเซลล์ก่อนที่เซลล์จะกู้ในตัวอย่างและภาพแสดงภาพของเซลล์หลังจากที่เซลล์มีการกู้คืนในตัวอย่าง และFig. 16 แสดงภาพถ่ายของลูกกลมที่กู้คืนจากตู้เพาะเลี้ยงตามตัวอย่าง30Description of Embodiments[0014]Embodiments will be described below with reference to the drawings. To clarify the explanation, omissions and simplifications are made as necessary in the following descriptionand the drawings. Throughout the drawings, the constituent elements having the sameconfiguration or function, or corresponding parts are denoted by the same reference numerals, and the descriptions thereof are omitted.[0015]5 First Embodiment<ตู้เพาะเลี้ยง>Fig. 1 is a diagram showing an example of a ตู้เพาะเลี้ยง according to anembodiment. Fig. 1 shows a part of a culture plate 3 including a จำนวนที่มากกว่าหนึ่ง of ตู้เพาะเลี้ยงs 1. Fig. 1 shows a part of a culture plate 3 including a จำนวนที่มากกว่าหนึ่ง of ตู้เพาะเลี้ยงs 1. The upper 10 part of Fig. 1 shows some of a จำนวนที่มากกว่าหนึ่ง of โพรง .10 which are formed in the bottom of each of the ตู้เพาะเลี้ยงs 1, when viewed from the top of the culture plate 3. The จำนวนที่มากกว่าหนึ่ง of โพรง 10 are arranged in each of the ตู้เพาะเลี้ยงs 1. In terms of the production of the ตู้เพาะเลี้ยงs 1 and the efficiency of cell culture, it is preferable to arrange the จำนวนที่มากกว่าหนึ่ง of โพรง 10 in a regular manner. One ตู้เพาะเลี้ยง 1 corresponds to, for example, one well 15 arranged in a plate including a จำนวนที่มากกว่าหนึ่ง of wells. In other words, the จำนวนที่มากกว่าหนึ่ง of โพรง 10 are arranged in the respective wells of a well plate.A well plate is an experimental/testing instrument formed of a flat plate having anumber of dents (holes or wells), and each well is used as a test tube or a petri dish. The number of wells is, for example, 6, 24, 96, 384, or more. Examples of the shape of the bottom of each 20 well include a flat shape, a round shape, and a combination of a number of elongated microtubes (deep well plate).Each recess 10 forms a micro-ที่ว่าง, which is a small ที่ว่าง for culture of cells, and thus each recess can also be referred to as a microchamber.[0016]25 Figs. 2 and 3 show an example of the shape of a recess according to a first embodiment.Fig. 2 shows a cross-sectional view of one recess 10, and Fig. 3 shows a top view of one recess10. The recess 10 shown in Fig. 3 is an example of the detailed structure of each of the โพรง10 shown in the upper part of Fig. 1.
Each recess 10 is composed of a ส่วนล่าง 11 and an ส่วนช่องเปิด 12. The 30 ส่วนล่าง 11 is a portion serving as the bottom of the ตู้เพาะเลี้ยง 1, and the opening
portion 12 is a portion disposed above the ส่วนล่าง 11. A portion where the bottom
portion 11 and the ส่วนช่องเปิด 12 are in contact is referred to as a boundary. In Fig. 2, a
portion whose length is indicated by an arrow "R" corresponds to the location of the boundary.
In Fig. 3, the boundary location is indicated by a double dashed chain line. Note that the bottom
portion 11 and the ส่วนช่องเปิด 12 are formed of a continuous surface and are produced in an integrated manner
[0017]
Figs. 2 and 3 show an equivalent diameter R and a depth (height) H of each of the 5 จำนวนที่มากกว่าหนึ่ง of โพรง 10 formed in the ตู้เพาะเลี้ยง 1.
The term "equivalent diameter R" refers to the diameter of a circle inscribed in the
ส่วนล่าง 11 of each recess 10. In this case, the equivalent diameter R is the diameter of an
inscribed circle that is inscribed at the boundary between the ส่วนล่าง 11 and the opening
portion 12. More specifically, the equivalent diameter R is the diameter of a circle inscribed in a 10 shape of a plane that is perpendicular to the direction of the height H of each recess 10 at the
boundary.
The term "depth D" refers to a length from the bottom on the inside of the bottom
portion 11 to an upper end of each recess 10. The upper end of the recess 10 corresponds to an
end (upper end) of the ส่วนช่องเปิด 12. The depth D corresponds to the depth of a ที่ว่าง
15 formed by the recess 10. In other words, the depth D is a depth from the bottom of a ที่ว่าง,
which is formed by the ส่วนล่าง 11, to an upper end of a ที่ว่าง formed by the opening
portion 12. Fig. 2 shows not only the depth D of the recess 10, but also a depth Dl of the bottom
portion 11 and a depth D2 of the ส่วนช่องเปิด 12.
[0018]
20 The ส่วนล่าง 11 forms a ที่ว่าง (first ที่ว่าง) in which cells are cultured. The
ส่วนล่าง 11 has, for example, a hemispherical shape. For example, a shape obtained by dividing a spherical shape having the equivalent diameter R as a diameter into halves can be used. The shape of the ส่วนล่าง 11 is not limited to a hemispherical shape. Other specific examples of the shape will be described in a second embodiment.
25 The ส่วนช่องเปิด 12 forms a ที่ว่าง (second ที่ว่าง) that operates to support culture
and harvesting of cells. The ส่วนช่องเปิด 12 is formed of a wall which surrounds an area
from a boundary between the ส่วนช่องเปิด 12 and the ส่วนล่าง 11 to an end (tip) of the
recess 10 and which has a taper angle in a range from 1 degree to 20 degrees. The taper angle of
the wall constituting the ส่วนช่องเปิด 12 is ที่ควรใช้คือ in a range from 5 degrees to 15 degrees, 30 and ที่ควรใช้กว่าคือ, 10 degrees. This is because if the taper angle is extremely small, it is
difficult to transfer cells from the โพรง into a อาหารเลี้ยง during harvesting of the cells, and if
the taper angle is extremely large, the cells are removed during การแทนที่ of the อาหารเลี้ยง.
[0019]
Taper angles are represented by 01 and 02 in Fig. 2. In an example of the shape of each
9
recess 10 shown in Figs. 2 and 3, the taper angles 01 and 02 are substantially the same.
The boundary between the ส่วนล่าง 11 and the ส่วนช่องเปิด 12 is fon-ned in
such a manner that the equivalent diameter R is in a range from 50 pm to 1 mm To supply
nutrients to a central portion of a spheroid, the equivalent diameter is ที่ควรใช้คือ in a range from 5 50 pm to 500 pm, and ที่ควรใช้กว่าคือ, in a range from 100 pm to 500 pm. This is because it is
said that nutrients and oxygen are transferred into cells only by diffusion and a central portion of
a spheroid with a size of 300 pm or less does not become necrotic (Efrem Curcio et al., "Mass
transfer and metabolic reactions in hepatocyte ลูกกลม cultured in rotating wall gas-permeable
membrane system", Biomaterials 28 (2007) 5487-5497). Accordingly, the above-mentioned 10 diameter range is preferable to prevent a spheroid from growing to the size of 300 pm.
On the contrary, when it is intended to cause necrosis in a central portion of a cell, like
in a cancer cell (Franziska Hirschhaeuser et al., "Multice
การแปล กรุณารอสักครู่..