Analysis of germination. Spores wer

Analysis of germination. Spores were heat activated at 70°C for 30 min. Activated spores were washed twice with germination buffer (50 mM Tris-HCl, pH 7.5, 10 mM NaCl) and resuspended to an optical density at 580 nm (OD580) of 1.0. Auto-germination was monitored for 20 min. Spores that did not autogerminate were used to conduct the germination assays. Experiments were carried out in 96-well plates (200
l/well) using a Labsystems iEMS 96-well plate reader equipped with a filter with a cutoff of 580 nm (Thermo Electron Corporation, Waltham, MA). Experiments were performed in triplicate on at least two different occasions with no fewer than two different spore preparations. Standard deviations were calculated from at least six independent measurements and were typically below 10%. Spore germination was confirmed in selected samples by microscopic observation of aliquots stained using the SchaefferFulton method. Kinetic readings were carried out every minute for 1 h at 25°C. Spores were germinated with various concentrations of cogerminants (concentration ranges were selected to avoid data clusters in doublereciprocal plots) and are listed accordingly in Fig. 1A to E and Fig. S1 to S5 in the supplemental material.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การวิเคราะห์ของการงอก สปอร์ที่ถูกความร้อนใช้งาน 70° c สำหรับล้างสองครั้ง ด้วยบัฟเฟอร์การงอก (50 มม.ทริสเรทติ้ง HCl, pH 7.5, 10 มม. NaCl) 30 นาทีใช้สปอร์ และ resuspended จะมีความหนาแน่นออปติคัลที่ 580 นิวตันเมตร (OD580) 1.0 การงอกของอัตโนมัติถูกตรวจสอบสำหรับสปอร์ 20 นาทีว่า ไม่ไม่ autogerminate ใช้ในการดำเนิน assays การงอก ทดลองดำเนินการใน 96 หลุมแผ่น (200 l ดี) ใช้อ่านแผ่น 96 หลุม iEMS Labsystems มี filter กับตัดของ 580 nm (เทอร์โม คอร์ปอเรชั่นอิเล็กตรอน นีซ MA) การทดลองได้ดำเนินการลข้อในโอกาสต่าง ๆ น้อยสองกับเตรียมสปอร์แตกต่างกันไม่น้อยกว่าสอง ค่าเบี่ยงเบนมาตรฐานคำนวณจากการวัดน้อยหกที่อิสระ และได้มักจะต่ำกว่า 10% การงอกของสปอร์ถูก confirmed ในตัวอย่างที่เลือกโดยการสังเกตด้วยกล้องจุลทรรศน์ของ aliquots ย้อมโดยใช้วิธี SchaefferFulton อ่านเคลื่อนไหวดำเนินการทุกนาทีสำหรับ 1 ชั่วโมงที่ 25 องศาเซลเซียส สปอร์งอกได้ ด้วยความเข้มข้นต่าง ๆ ของ cogerminants (เลือกช่วงเพื่อหลีกเลี่ยงการคลัสเตอร์ข้อมูลใน doublereciprocal แปลงความเข้มข้น) และแสดงไว้ตามในรูป 1A E และมะเดื่อ S1 S5 ในวัสดุเสริมเพื่อ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การวิเคราะห์การงอก สปอร์ถูกเปิดใช้งานความร้อนที่ 70 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาที สปอร์เปิดใช้งานเป็นครั้งที่สองถูกล้างด้วยบัฟเฟอร์งอก (50 mM Tris-HCl พีเอช 7.5, 10 mM NaCl) และ resuspended เพื่อความหนาแน่นแสงที่ 580 นาโนเมตร (OD580) 1.0 Auto-งอกได้รับการตรวจสอบเป็นเวลา 20 นาที สปอร์ที่ไม่ได้ autogerminate ถูกนำมาใช้ในการดำเนินการตรวจงอก การทดลองดำเนินการในแผ่น 96 หลุม (200 ลิตร / ดี) โดยใช้เครื่องอ่านแผ่น Labsystems iems 96 หลุมพร้อมกับกรอง Fi ที่ตัด 580 นาโนเมตร (เทอร์โมอิเลคตรอนคอร์ปอเรชั่นเคมบริดจ์บริการ) การทดลองดำเนินการในเพิ่มขึ้นสามเท่าในอย่างน้อยสองครั้งที่แตกต่างกันไม่น้อยกว่าสองในการเตรียมการของสปอร์ที่แตกต่างกัน ค่าเบี่ยงเบนมาตรฐานจะถูกคำนวณจากอย่างน้อยหกวัดอิสระและมักจะต่ำกว่า 10% งอกของสปอถูก Fi Con rmed ในตัวอย่างที่เลือกโดยการสังเกตกล้องจุลทรรศน์ aliquots ย้อมโดยใช้วิธี SchaefferFulton อ่าน Kinetic ได้ดำเนินการทุกนาทีเป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่ 25 ° C สปอร์งอกที่มีความเข้มข้นต่างๆของ cogerminants (ช่วงความเข้มข้นที่ได้รับการคัดเลือกเพื่อหลีกเลี่ยงกลุ่มข้อมูลในแปลง doublereciprocal) และมีการระบุไว้ตามในรูป 1 เออีและรูป S1 จะ S5 ในวัสดุเสริม

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การวิเคราะห์การงอก สปอร์ถูกความร้อน 70 องศา C ใช้งานเป็นเวลา 30 นาที ใช้งานได้ซักสองครั้งกับสปอร์งอกบัฟเฟอร์ ( 50 มม. โดยกรดไฮโดรคลอริก pH 7.5 , 10 mM NaCl ) และ resuspended มีความหนาแน่นของแสงที่ 580 nm ( od580 ) 1.0 การตรวจสอบอัตโนมัติเป็น 20 นาที สปอร์ที่ไม่ได้ autogerminate ถูกใช้เพื่อทำการทดสอบความงอก . การทดลองใน 96 ดีแผ่น ( 200 ลิตร ) ใช้ labsystems IEMS 96 ดีจานอ่านพร้อมกับ lter จึงกับนี้ 580 nm ( อิเล็กตรอน เทอร์โม จำกัด เพิ่งมา ) ทดลองทั้งสามใบอย่างน้อย 2 โอกาสที่แตกต่างกันมีไม่น้อยกว่าสองต่างสปอร์ได้ เบี่ยงเบนมาตรฐาน คำนวณจากอย่างน้อยหกวัดที่เป็นอิสระและมักจะต่ำกว่า 10% การงอกของสปอร์ต่อต้านจึงเป็น rmed ในตัวอย่างโดยการสังเกตของกล้องจุลทรรศน์ schaefferfulton เฉยๆเปื้อนโดยใช้วิธี อ่านการเคลื่อนไหวได้ทดลองทุก ๆนาที เป็นเวลา 1 ชั่วโมง ที่อุณหภูมิ 25 องศา และสปอร์งอกที่มีความเข้มข้นต่าง ๆ ของ cogerminants ( สมาธิช่วงถูกเลือกเพื่อหลีกเลี่ยงข้อมูลกลุ่มใน doublereciprocal แปลง ) และมีการระบุไว้ตามในรูปที่ 1A และมะเดื่อ S1 S5 E ไปในวัสดุเสริม