Using the pBluescript II/SBgl3 plas

Using the pBluescript II/SBgl3 plasmid as a template, the mature
SBgl3 gene with and without a polyhistidine tag was PCR-amplified
using the SBgl3-F-1 primer containing a XhoI site and either the
SBgl3-R-1 or SBgl3-R-His primer, which both contained XbaI sites.
After digestion with XhoI and XbaI, the PCR product was cloned
into the vector pPICZaA (Invitrogen). The construct was confirmed
by DNA sequencing carried out by Macrogen and designated
pPICZaA/SBgl3His. The pPICZaA/SBgl3His plasmid was linearized
with SacI and transformed into P. pastoris GS115 by electroporation.
Positive transformants harboring the SBgl3 gene were selected
on YPDS plates containing 100 lg/ml zeocin.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ใช้ plasmid II/SBgl3 pBluescript ที่เป็นแม่แบบ การเย็ดยีน SBgl3 ที่มี และไม่ มีแท็ก polyhistidine ถูกขยาย PCRใช้รองพื้น SBgl3-F-1 ที่ประกอบด้วยเว็บไซต์ XhoI และการSBgl3-R-1 หรือ SBgl3 R พระไพรเมอร์ ซึ่งทั้งสองแห่งประกอบด้วยเว็บไซต์ XbaIหลังจากย่อยอาหาร XhoI และ XbaI ผลิตภัณฑ์ PCR โคลนเป็นเวกเตอร์ pPICZaA (Invitrogen) โครงสร้างได้รับการยืนยันโดย DNA sequencing โดย Macrogen และกำหนดpPICZaA/SBgl3His Plasmid pPICZaA/SBgl3His เป็นเส้นตรงกับ SacI และเปลี่ยนเป็น P. pastoris GS115 โดย electroporationเลือกบวก transformants เก็บงำยีน SBgl3บน YPDS แผ่นที่มี 100 lg/ml zeocin

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การใช้พลาสมิด pBluescript II / SBgl3 เป็นแม่แบบผู้ใหญ่
ยีน SBgl3 ที่มีและไม่มีแท็ก polyhistidine ถูก PCR-amplified
ใช้ SBgl3-F-1 ไพรเมอร์ที่มีเว็บไซต์ XhoI และทั้ง
SBgl3-R-1 หรือ SBgl3-R- ไพรเมอร์ของเขาซึ่งทั้งสองมีเว็บไซต์ XbaI.
หลังจากการย่อยด้วย XhoI และ XbaI ผลิตภัณฑ์ PCR เป็นโคลน
เข้าไปใน pPICZaA เวกเตอร์ (Invitrogen) สร้างได้รับการยืนยัน
โดยลำดับดีเอ็นเอที่ดำเนินการโดย Macrogen และได้รับมอบหมาย
pPICZaA / SBgl3His pPICZaA / SBgl3His พลาสมิดได้รับการเชิงเส้น
กับ SACI และกลายเป็น P. pastoris GS115 โดย electroporation.
transformants บวกเก็บงำยีน SBgl3 ได้รับการคัดเลือก
บนจานที่มี YPDS 100 LG / ml zeocin

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ใช้ ) 2 / sbgl3 พลาสมิดเป็นแม่แบบของผู้ใหญ่sbgl3 ยีนที่มีและไม่มี polyhistidine แท็กคือ PCR ในปัจจุบันใช้รองพื้น sbgl3-f-1 ที่มี xhoi เว็บไซต์และใดsbgl3-r-1 หรือ sbgl3-r-his ไพรเมอร์ ซึ่งทั้งสองมีเว็บไซต์ xbai .หลังจากตัดด้วย xhoi xbai และผลิตภัณฑ์ PCR ถูกโคลนเป็นเวกเตอร์ ppiczaa ( Invitrogen ) สร้างได้รับการยืนยันโดยลำดับ ดําเนินการโดย macrogen และเขต ดีเอ็นเอppiczaa / sbgl3his . การ ppiczaa / sbgl3his พลาสมิดช่วงกับซาซิและแปลงเป็นหน้า pastoris gs115 โดย electroporation .เป็นยีนคัดเลือก transformants ที่ sbgl3ใน ypds แผ่น ( 100 LG / ml zeocin .