Free phenolic compound identificati

Free phenolic compound identification was performed by high performance liquid chromatography (model 1100, HPLC Agilent, Palo Alto, CA, USA), using a UV detector (at 280 nm) and a C18 reverse-phase column (model 201TP54, Vydac, Hesperia, CA, USA) with a C18 guard column (Alltech Associates, Inc., Deerfield, IL, USA). Samples were filtered through 0.20 μm membranes (Sartorius Stedim Biotech GmbH, Goettingen, Germany). Separation was achieved, using a linear gradient of two solvents: solvent A (1.0% acetic acid in water v/v) and solvent B (50% methanol, 50% acetonitrile, v/v). A linear gradient was run at 30 °C with flow rate of 1 ml/min from 5% to 30% B in 25 min, from 30% to 40% B in 10 min, from 40% to 48% B in 5 min, from 48% to 70% B in 10 min, from 70% to 100% B in 5 min, isocratic at 100% B for 5 min, followed by returning to the initial conditions (10 min) and column equilibration (12 min). The injection volume was 100 μl. The evaluation of each phenolic compound, expressed as milligrams of compound per 100 g of dried pomace (mg/100DP), was based on comparison of peak sequence and intensity with standard solutions. A methanolic solution of each standard was prepared at 0.5 mg/ml and analysed by HPLC, using the same method as described above.

Glucose, xylose, arabinose and acetic acid were determined directly by the same HPLC, using a refractive index detector and a Supelcogel column (model H59304-U, Sigma Aldrich Corp., Bellefonte, PA, USA). Samples were neutralized and filtered through 0.45 μm membranes (Sartorius Stedim Biotech GmbH, Goettingen, Germany). Separation was achieved using, as mobile phase, 0.005 M H2SO4 at a flow rate of 0.5 ml/min at 50 °C. An aqueous solution of each standard (0.5 mg/ml) was used to evaluate single monosaccharide compounds.

Total phenolic compound (TP) concentrations were measured using the Folin–Ciocalteu assay ( Swain & Hillis, 1959). Briefly, 4.8 ml of deionized water, 0.2 ml of sample, and 0.5 ml of Folin–Ciocalteu reagent were transferred to a 25 ml volumetric flask. The contents were mixed and 1 ml of a 20% sodium carbonate solution was added, followed by the addition of deionized water to reach a final volume of 10 ml. Solutions were mixed and left at room temperature in the dark for 1 h. Sample aliquots were used for the determination of total phenols concentration using a UV–Vis spectrophotometer (Perkin Elmer, Wellesley, MA, USA) at a wavelength of 725 nm. TP was standardized against caffeic acid and expressed as micrograms of caffeic acid equivalents per gram of dried pomace (mgCAE/gDP). The method response was described with the linear equation (Eq. (1)) using standard methanolic solutions of caffeic acid (10–1000 μg/ml) with a R2 of 0.9962.

equation(1)
ABS725=0.002TP-0.004
Turn MathJax on

Caffeic acid was chosen as the standard in this work due to its wide use as reference compound when working with olive oil ( Aliakbarian et al., 2008, Mulinacci et al., 2001 and Ranalli et al., 2001).
The concentration of o-diphenols (OD) in the methanolic extract, also expressed as mgCAE/gDP, was determined by the molybdate method (Gutfinger, 1981). The procedure consisted of dilution of 0.2 ml of extract to 1.0 ml with deionized water, addition of 1.0 ml of 0.1 M phosphate buffer (pH = 6.5) and 2.0 ml of 5% Na2MoO4·2H2O solution. The contents were mixed and the absorbance was measured after 15 min at 350 nm against a blank reagent using the same spectrophotometer as above. The calibration curve (R2 = 0.9990) was made with standard methanolic solutions of caffeic acid in the range 10–250 μg/ml:

equation(2)
ABS350=0.004OD+0.001
Turn MathJax on

The yield of total flavonoids (TF) in the methanolic extract, expressed as micrograms of catechin equivalents per gram of dried pomace (mgCE/gDP), was determined using the colorimetric method described by Jemai, Bouaziz, and Sayadi (2009), although some modifications were done. 0.25 ml of diluted extracts was mixed with 1.25 ml of deionized water. At zero time, 0.075 ml of 5% sodium nitrite solution was added and was allowed to react for 5 min. Then a 0.15 ml of 10% aluminium chloride was added. At 6 min, 0.5 ml of 1 M sodium hydroxide was added to the mixture. Immediately, the solution was diluted to the final volume of 3 ml, using deionized water. The absorbance of the mixture was determined at 510 nm, using the same spectrophotometer as above. The calibration curve was made with standard methanolic solutions of catechin in the range 0.01–0.50 mg/ml resulting in the linear equation (3) (R2 = 0.9908):

equation(3)
ABS510=0.002TF+0.012
Turn MathJax on

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

รหัสผสมฟีนอฟรีทำ ด้วยประสิทธิภาพสูงของเหลว chromatography (รุ่น 1100, HPLC Agilent ดัลลัส CA, USA), ใช้เป็นเครื่องตรวจจับ UV (ที่ 280 nm) และคอลัมน์กลับเฟส C18 (รุ่น 201TP54, Vydac, Hesperia, CA, USA) ด้วยคอลัมน์ C18 ยาม (Alltech สมาคม Inc. บางนาตราด IL สหรัฐอเมริกา) ตัวอย่างถูกกรองผ่านเยื่อหุ้ม μm 0.20 (บริษัทซาร์โทเรียส Stedim เทคโนโลยีชีวภาพ GmbH, Goettingen เยอรมนี) แยกสำเร็จ ใช้การไล่ระดับหรือสารทำละลายสองเส้น: เป็น (1.0% กรดอะซิติกในน้ำ v/v) ตัวทำละลายและตัวทำละลาย B (เมทานอล 50%, 50% acetonitrile, v/v) ไล่เส้นรันที่ 30 ° C มีอัตราการไหล 1 มิลลิลิตร/นาทีจาก 5% เป็น 30% B ในนาที 25 จาก 30% เป็น 40% B ใน 10 นาที จาก 40% เป็น 48% B ใน 5 นาที จาก 48% เป็น 70% B ใน 10 นาที จาก 70% เป็น 100% B ใน 5 นาที isocratic คิดที่ 100% B ใน 5 นาที ตามความเงื่อนไขเริ่มต้น (10 นาที) และคอลัมน์ equilibration (12 นาที) ปริมาณฉีดได้ 100 μl การประเมินของแต่ละฟีนอผสม แสดงเป็น milligrams ของผสมต่อ 100 กรัมของ pomace แห้ง (มิลลิกรัม/100DP), เป็นไปตามการเปรียบเทียบลำดับสูงสุดและความเข้ม ด้วยโซลูชั่นมาตรฐาน โซลูชั่น methanolic ของแต่ละมาตรฐานเตรียมไว้ที่ 0.5 mg/ml และ analysed โดย HPLC ใช้วิธีการเดียวกันตามที่อธิบายไว้ข้างต้นกลูโคส xylose, arabinose และกรดอะซิติกถูกกำหนดโดยตรง โดย HPLC เดียวกัน ใช้จับดรรชนีและคอลัมน์ Supelcogel (รุ่น H59304-U ซิก Aldrich Corp., Bellefonte, PA สหรัฐอเมริกา) ตัวอย่างที่ neutralized และกรองผ่านเยื่อหุ้ม μm 0.45 (บริษัทซาร์โทเรียส Stedim เทคโนโลยีชีวภาพ GmbH, Goettingen เยอรมนี) แยกสำเร็จใช้ เป็นระยะเคลื่อน 0.005 M กำมะถันที่อัตราการไหล 0.5 ml/นาที ที่ 50 องศาเซลเซียส การละลายของแต่ละมาตรฐาน (0.5 mg/ml) ถูกใช้เพื่อประเมินสารเดี่ยว monosaccharideความเข้มข้นของสารประกอบฟีนอรวม (TP) ถูกวัดโดยใช้ทดสอบ Folin-Ciocalteu (Swain และรับ 1959) สั้น ๆ 4.8 ml น้ำ deionized, 0.2 มล.ของตัวอย่าง และ 0.5 ml ของรีเอเจนต์ Folin-Ciocalteu ถูกโอนย้ายไปเป็น 25 ml volumetric หนาว การรวบรวมเนื้อหา และ ml 1 ของ 20% โซเดียมคาร์บอเนตโซลูชัน เพิ่ม ตาม ด้วยการเพิ่มน้ำ deionized ถึงเล่มสุดท้ายของ 10 ml. โซลูชั่นถูกผสม และซ้ายที่อุณหภูมิห้องในมืดสำหรับ aliquots 1 h. ตัวอย่างที่ใช้สำหรับการกำหนดความเข้มข้น phenols รวมใช้เป็น UV – Vis เครื่องทดสอบกรดด่าง (เพอร์เอลเมอ เวลเลสเลย์ MA สหรัฐอเมริกา) ที่ความยาวคลื่นของ 725 nm TP มาตรฐานกับกรด caffeic และแสดงเป็น micrograms เทียบเท่ากรด caffeic ต่อกรัมของ pomace แห้ง (mgCAE/gDP) การตอบสนองวิธีถูกอธิบาย ด้วยสมการเชิงเส้น (Eq. (1)) ด้วยโซลูชั่น methanolic มาตรฐานของกรด caffeic (μg 10 – 1000 ml) R2 ของ 0.9962equation(1)ABS725 = 0.002TP-0.004เปิด MathJaxกรด caffeic ถูกเลือกเป็นมาตรฐานในการทำงานนี้เนื่องจากใช้เป็นอ้างอิงบริเวณกว้างเมื่อทำงานกับน้ำมันมะกอก (Aliakbarian et al., 2008, Mulinacci และ al., 2001 และ Ranalli และ al., 2001)ความเข้มข้นของ o-diphenols (OD) ในสารสกัด methanolic นอกจากนี้ยัง แสดงเป็น mgCAE/gDP ถูกกำหนด โดยวิธี molybdate (Gutfinger, 1981) ประกอบด้วยขั้นตอนการเจือจางของ 0.2 ml ของสารสกัดเพื่อ 1.0 ml ด้วยน้ำ deionized แห่งมล 1.0 0.1 M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH = 6.5) และ 2.0 มิลลิลิตรของ 5% Na2MoO4·2H2O เนื้อหาถูกผสม และมีวัด absorbance ที่หลังจาก 15 นาทีที่ 350 nm กับรีเอเจนต์ว่างโดยใช้เครื่องทดสอบกรดด่างเหมือนกันกับข้างบน เส้นโค้งการปรับเทียบ (R2 = 0.9990) ทำ ด้วยโซลูชั่น methanolic มาตรฐานของกรด caffeic ในช่วง 10-250 μg/ml:equation(2)ABS350 = 0.004OD + 0.001เปิด MathJaxผลตอบแทนของ flavonoids รวม (TF) ในสารสกัด methanolic แสดงเป็น micrograms เทียบเท่าสารสกัดจากต่อกรัมของ pomace แห้ง (mgCE/gDP), กำหนดใช้วิธีการเทียบเคียงโดย Jemai, Bouaziz และ Sayadi (2009), แม้ว่าการปรับเปลี่ยนบางอย่างทำ 0.25 ml สารสกัดจากแตกออกเป็นผสมกับ 1.25 ml น้ำ deionized ศูนย์เวลา 0.075 มิลลิลิตรของ 5% โซเดียมไนไตรต์เข้ามา และได้รับอนุญาตให้ตอบสนองใน 5 นาที Ml 0.15 ของ 10% อะลูมิเนียมคลอไรด์ถูกเพิ่มด้วย ที่ 6 นาที 0.5 ml ม. 1 โซเดียมไฮดรอกไซด์ได้เพิ่มส่วนผสม ทันที การแก้ปัญหาถูกผสมกับเสียงสุดท้ายของ 3 ml ใช้น้ำ deionized กำหนด absorbance ของผสมที่ 510 nm การใช้เครื่องทดสอบกรดด่างเหมือนกันกับข้างบน ทำโค้งเทียบกับโซลูชั่น methanolic มาตรฐานของสารสกัดจากในในช่วง 0.01-0.50 mg/ml ได้ในสมการเชิงเส้น (3) (R2 = 0.9908):equation(3)ABS510 = 0.002TF + 0.012เปิด MathJax

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การระบุสารประกอบฟีนอลฟรีได้ดำเนินการโดยประสิทธิภาพสูงของเหลว chromatography (รุ่น 1100 HPLC Agilent พาโลอัลโต, CA, USA) โดยใช้เครื่องตรวจจับยูวี (ที่ 280 นาโนเมตร) และ C18 คอลัมน์ย้อนกลับเฟส (รูปแบบ 201TP54, Vydac, Hesperia, CA, USA) กับคอลัมน์ C18 ยาม (ออลเทค Associates, Inc, เดียร์ฟิลด์, อิลลินอยส์, สหรัฐอเมริกา) ตัวอย่างถูกกรองผ่านเยื่อ 0.20 ไมครอน (Sartorius Stedim ไบโอเทค GmbH, Goettingen, เยอรมนี) แยกก็ประสบความสำเร็จโดยใช้ทางลาดเชิงเส้นของตัวทำละลายที่สอง: ตัวทำละลาย (1.0% กรดอะซิติกในน้ำ v / v) และตัวทำละลาย B (เมทานอล 50%, 50% acetonitrile, v / v) ลาดเชิงเส้นได้รับการทำงานที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสมีอัตราการไหลของ 1 มล. / นาทีจาก 5% เป็น 30% B ใน 25 นาทีจาก 30% เป็น 40% B ในเวลา 10 นาทีจาก 40% ถึง 48% B ใน 5 นาที จาก 48% ถึง 70% B ในเวลา 10 นาทีจาก 70% ถึง 100% B ใน 5 นาที isocratic ที่ 100% B เป็นเวลา 5 นาทีตามด้วยการกลับไปที่เงื่อนไขเริ่มต้น (10 นาที) และสมดุลคอลัมน์ (12 นาที) ปริมาณการฉีด 100 ไมโครลิตร การประเมินผลของแต่ละสารประกอบฟีนอลที่แสดงเป็นมิลลิกรัมของสารต่อ 100 กรัมกากแห้ง (mg / 100DP) อยู่บนพื้นฐานของการเปรียบเทียบลำดับสูงสุดและความรุนแรงกับการแก้ปัญหามาตรฐาน วิธีการแก้ปัญหาเมทานอลของแต่ละมาตรฐานถูกจัดทำขึ้นที่ 0.5 mg / ml และวิเคราะห์โดยวิธี HPLC โดยใช้วิธีการเดียวกับที่อธิบายข้างต้น. กลูโคสไซโลส, อราบิโนและกรดอะซิติกได้รับการพิจารณาโดยตรง HPLC เดียวกันโดยใช้เครื่องตรวจจับดัชนีหักเหและ Supelcogel คอลัมน์ (รูปแบบ H59304-U ซิกดิชคอร์ป, เบลลาฟอน, PA, สหรัฐอเมริกา) ตัวอย่างเป็นกลางและกรองผ่านเยื่อ 0.45 ไมครอน (Sartorius Stedim ไบโอเทค GmbH, Goettingen, เยอรมนี) แยกก็ประสบความสำเร็จโดยใช้เป็นเฟสเคลื่อนที่, 0.005 M H2SO4 ในอัตราการไหล 0.5 มล. / นาทีที่ 50 องศาเซลเซียส สารละลายของแต่ละมาตรฐาน (0.5 mg / ml) ถูกนำมาใช้ในการประเมินสารโมโนแซ็กคาไรด์เดียว. รวมสารประกอบฟีนอล (TP) ความเข้มข้นที่ถูกวัดโดยใช้การทดสอบ Folin-Ciocalteu (ลูกทุ่งและ Hillis, 1959) สั้น ๆ , 4.8 ml ของน้ำปราศจากไอออน 0.2 มิลลิลิตรตัวอย่างและ 0.5 มลสาร Folin-Ciocalteu ถูกย้ายไป 25 มล. ขวดปริมาตร เนื้อหาถูกผสมและ 1 มิลลิลิตรของการแก้ปัญหาโซเดียมคาร์บอเนต 20% ที่เพิ่มขึ้นตามมาด้วยการเติมน้ำกลั่นปราศจากไอออนที่จะไปถึงปริมาณสุดท้ายของ 10 มล. โซลูชั่นถูกผสมและทิ้งไว้ที่อุณหภูมิห้องในที่มืดเป็นเวลา 1 ชั่วโมง aliquots ตัวอย่างถูกนำมาใช้สำหรับการกำหนดของฟีนอลรวมความเข้มข้นของการใช้ spectrophotometer UV-Vis (เพอร์กินเอลเมอเลสลีย์, MA, USA) ที่ความยาวคลื่น 725 นาโนเมตร TP เป็นมาตรฐานกับกรด caffeic และแสดงความเป็นไมโครกรัมเทียบเท่ากรด caffeic ต่อกรัมของกากแห้ง (mgCAE / GDP) การตอบสนองต่อวิธีการที่ได้รับการอธิบายด้วยสมการเชิงเส้น (สม. (1)) โดยใช้เมทานอลโซลูชั่นมาตรฐานของกรด caffeic (10-1000 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร) กับ R2 ของ 0.9962. สมการ (1) ABS725 = 0.004 0.002TP-เปิดMathJax บนกรด caffeic ได้รับเลือกให้เป็นมาตรฐานในการทำงานนี้เกิดจากการใช้อย่างกว้างขวางในฐานะที่เป็นสารประกอบอ้างอิงเมื่อทำงานกับน้ำมันมะกอก (Aliakbarian et al., 2008 Mulinacci et al., 2001 และ Ranalli et al., 2001). ความเข้มข้นของ o -diphenols (OD) ในสารสกัดจากเมทานอลแสดงความเป็น mgCAE / GDP ถูกกำหนดโดยวิธีการโมลิบนี้ (Gutfinger, 1981) ขั้นตอนประกอบด้วยการลดสัดส่วนของ 0.2 มล. ของสารสกัดจาก 1.0 มล. ด้วยน้ำปราศจากไอออนนอกเหนือจาก 1.0 มล. 0.1 M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH = 6.5) และ 2.0 มิลลิลิตร 5% Na2MoO4 · 2H2O การแก้ปัญหา เนื้อหาถูกผสมและการดูดกลืนแสงที่ถูกวัดหลังจาก 15 นาทีที่ 350 นาโนเมตรกับสารว่างเปล่าโดยใช้ spectrophotometer เช่นเดียวกับข้างต้น เส้นโค้งการสอบเทียบ (R2 = 0.9990) ถูกสร้างขึ้นมาด้วยโซลูชั่นมาตรฐานเมทานอลของกรด caffeic ในช่วง 10-250 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร: สมการ (2) ABS350 0.004OD = 0.001 + เปิด MathJax ในผลผลิตของflavonoids รวม (TF) ใน สารสกัดจากเมทานอลแสดงเป็นไมโครกรัมเทียบเท่า catechin ต่อกรัมของกากแห้ง (mgCE / GDP) ถูกกำหนดโดยใช้วิธีการสีที่อธิบายไว้โดย Jemai, Bouaziz และ Sayadi (2009) แม้ว่าการปรับเปลี่ยนบางคนทำ 0.25 มล. ของสารสกัดเจือจางผสมกับ 1.25 ml ของน้ำปราศจากไอออน ที่ศูนย์เวลา 0.075 มิลลิลิตรของสารละลายโซเดียมไนไตรท์ 5% ถูกเพิ่มเข้ามาและได้รับอนุญาตที่จะตอบสนองเป็นเวลา 5 นาที แล้ว 0.15 มล. ของอลูมิเนียมคลอไรด์ 10% ถูกเพิ่มเข้ามา 6 นาที, 0.5 มล. 1 M โซเดียมไฮดรอกไซถูกบันทึกอยู่ในส่วนผสม ทันทีที่การแก้ปัญหาที่ได้รับการปรับลดปริมาณสุดท้ายของ 3 มล. โดยใช้น้ำปราศจากไอออน การดูดกลืนแสงของส่วนผสมที่ได้รับการกำหนดที่ 510 นาโนเมตรโดยใช้ spectrophotometer เช่นเดียวกับข้างต้น เส้นโค้งการสอบเทียบที่ถูกสร้างขึ้นด้วยโซลูชั่นมาตรฐานของเมทานอล catechin อยู่ในช่วง 0.01-0.50 mg / ml ผลในสมการเชิงเส้น (3) (R2 = 0.9908): สมการ (3) ABS510 0.002TF = 0.012 + เปิด MathJax บน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ฟรี สารประกอบฟีนอลิก การกระทำโดยวิธีโครมาโทกราฟีของเหลวสมรรถนะสูง ( HPLC 1100 รุ่น , Agilent , พาโลอัลโต , แคลิฟอร์เนีย , สหรัฐอเมริกา ) , การใช้เครื่องตรวจจับรังสียูวีที่ 280 nm ) และ c18 กลับเฟส ( รุ่น 201tp54 vydac , คอลัมน์ , Hesperia , CA , USA ) กับ c18 ยามคอลัมน์ ( เพราะ Associates , Inc . , เดียร์ฟิลด์ , อิลลินอยส์ , สหรัฐอเมริกา ตัวอย่างถูกกรองผ่านเมมเบรน ( 0.20 μ M Sartorius stedim ชีวภาพ GmbH ,เกิททิงเกน , เยอรมนี ) แยกเป็น ได้รับ ใช้ลาดเชิงเส้น 2 ตัวทำละลายตัวทำละลาย ( 1% กรดอะซิติกในน้ำ v / v ) และตัวทำละลาย B ( 50% ต่อ 50% ไน v / v ) ลาดเชิงเส้นใช้ 30 °องศาเซลเซียสด้วยอัตราการไหล 1 มิลลิลิตรต่อนาที จาก 5 % เป็น 30 % B ใน 25 นาที จาก 30% เป็น 40% B ใน 10 นาที จาก 40% ถึง 48 % B ในนาที 5 จาก 48 % , 70 % B จาก 70% ใน 10 นาที 100% B ใน 5 นาทีIsocratic 100 % B 5 นาที ตามด้วยกลับไปเงื่อนไขเบื้องต้น ( 10 นาที ) และ equilibration คอลัมน์ ( 12 นาที ) ปริมาณ 100 ลิตร ฉีดμการประเมินของแต่ละสารประกอบฟีนอลิก , แสดงเป็นมิลลิกรัมต่อ 100 กรัมผสมกากแห้ง ( mg / 100dp ) ขึ้นอยู่กับการเปรียบเทียบลำดับความเข้มสูงสุด และด้วยโซลูชั่นมาตรฐานสารละลายเมทานอลของแต่ละมาตรฐานถูกเตรียมไว้ที่ 0.5 mg / ml และวิเคราะห์โดย HPLC โดยใช้วิธีเดียวกันตามที่อธิบายไว้ข้างต้น .

น้ำตาล ไซโลส น้ำตาล กรดถูกกำหนดโดยตรง โดย HPLC เดียวกันโดยใช้เครื่องตรวจจับค่าดัชนีหักเหและ supelcogel คอลัมน์ ( แบบ h59304-u ซิกม่า Aldrich , bellefonte , PA . สหรัฐอเมริกา ) จำนวนที่เป็นกลางและกรองผ่าน 045 μ M เมมเบรน ( Sartorius stedim ชีวภาพ GmbH , เกิททิงเกน , เยอรมนี ) ก็ทำได้โดยการแยกเป็นเฟสเคลื่อนที่ , 0.005 m กรดซัลฟิวริกที่อัตราการ ไหลของ 0.5 มล. / นาทีที่ 50 ° C เป็นสารละลายของแต่ละมาตรฐาน ( 0.5 mg / ml ) ใช้เพื่อประเมินสารประกอบน้ำตาลโมเลกุลเดี่ยวเดี่ยว

รวมสารประกอบฟีนอลิก ( TP ) โดยมีวัดที่ใช้ folin – ciocalteu assay ( สเวน& Hillis 1959 )สั้น ๆ , 4.8 มล. คล้ายเนื้อเยื่อประสานน้ำ 0.2 มิลลิลิตร ของตัวอย่าง และ 0.5 มิลลิลิตร folin – ciocalteu รีเอเจนต์ถูกโอนไปยัง 25 มล. ปริมาตรขวด เนื้อหา 1 มิลลิลิตร ผสม 20 % โซเดียมคาร์บอเนตโซลูชั่นเพิ่ม ตามด้วยนอกเหนือจากคล้ายเนื้อเยื่อประสานน้ำถึงเล่มสุดท้ายของโซลูชั่น 10 มล. ผสมทิ้งไว้ที่อุณหภูมิห้องในที่มืดนาน 1 ชั่วโมงตัวอย่างเฉยๆ ถูกใช้สำหรับวิเคราะห์ปริมาณความเข้มข้นของฟีนอลโดยใช้ UV Spectrophotometer ( เพอร์กินเอลเมอร์ ( วิสเวลเลสลีย์ , MA , USA , ) ที่ความยาวคลื่น 725 nm . TP เป็นมาตรฐานกับกรด Caffeic กรด Caffeic และแสดงเป็นไมโครกรัมต่อ กรัม ส่วนกากแห้ง ( mgcae / GDP ) วิธีการตอบสนองที่ถูกอธิบายด้วยสมการ ( อีคิว( 1 ) ใช้มาตรฐานโซลูชั่นของเมทานอลกรด Caffeic ( 10 - 1 , 000 μ g / ml ) กับ R2 ของ 0.9962 สมการ ( 1 )


abs725 = 0.002tp-0.004


เปิด mathjax บนกรด Caffeic ได้รับเลือกให้เป็นมาตรฐานในงานนี้ เนื่องจาก ความ กว้าง ใช้เป็นข้อมูลอ้างอิงประกอบเมื่อทำงานกับมะกอก น้ำมัน ( aliakbarian et al . , 2008 , mulinacci et al . , 2001 และ ranalli et al . , 2001 ) .
ความเข้มข้นของ o-diphenols ( OD ) สารสกัดเมทานอล ซึ่งเป็น mgcae / GDP , ถูกกำหนดโดยวิธี gutfinger โมลิบเดต , 1981 ) ขั้นตอนประกอบด้วยการเจือจางของ 0.2 มิลลิลิตรสกัด 1.0 มิลลิลิตร กับน้ำคล้ายเนื้อเยื่อประสานเพิ่ม 1.0 มล. 0.1 M phosphate buffer pH = 6.5 ) และ 2.0 มิลลิลิตร 5% na2moo4 2H2O-dx ด้วยโซลูชั่นเนื้อหาถูกผสมและค่าวัดหลังจาก 15 นาทีที่ 350 nm กับสารเคมีเปล่าใช้วัสดุเดียวกับข้างต้น มีรูปโค้ง ( R2 = 0.9990 ) ถูกสร้างด้วยมาตรฐานโซลูชั่นของเมทานอลกรด Caffeic ในช่วง 10 - 250 μ g / ml :

สมการ ( 2 ) abs350 = =

0.004od เปิด mathjax บน

ผลผลิตของฟลาโวนอยด์ ( TF ) ในเมทานอลสกัด ,แสดงเป็นไมโครกรัมต่อกรัมกากแห้ง ส่วนคาเทชิน ( mgce / GDP ) , ถูกกำหนดโดยใช้วิธีการที่อธิบายโดย jemai bouaziz Colorimetric , และ sayadi ( 2009 ) แม้ว่าการปรับเปลี่ยนบางอย่างเกิดขึ้น 0.25 มล. เจือจางสารสกัดผสมกับ 1.25 มล. คล้ายเนื้อเยื่อประสานน้ำ ที่ศูนย์เวลา 0.075 mL 5% สารละลายโซเดียมไนไตรท์เพิ่มและได้รับอนุญาตให้ตอบสนองสำหรับ 5 นาทีแล้ว 015 ml 10 % อะลูมิเนียมคลอไรด์ถูกเพิ่มเข้ามา 6 นาที , 0.5 มิลลิลิตรของสารละลายโซเดียมไฮดรอกไซด์ 1 M เพิ่มส่วนผสม ทันที , สารละลายเจือจางกับเล่มสุดท้ายของ 3 ml ใช้คล้ายเนื้อเยื่อประสานน้ำ นผสมของกำหนดที่ 510 nm ใช้วัสดุเดียวกับข้างต้น การสอบเทียบมาตรฐานโซลูชั่นโค้งทำจากเมทานอลของ Catechin ในช่วง 0.01 – 050 mg / ml ผลในสมการ ( 3 ) ( R2 = 0.9908 ) :


abs510 สมการ ( 3 ) = 0.002tf 0.012

เปิด mathjax บน