“We report a simple, fast, and inex

“We report a simple, fast, and inexpensive technique for Acanthamoeba DNA extraction with Chelex resin (MB Chelex-100 resin; Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA), a commercially available polystyrene-divinylbenzene iminodiacetate material that has been used extensively in DNA extraction for forensic and microbiological purposes (3, 5, 6).Our protocol consisted of addition of 200 μl of Chelex solution (10% [wt/vol]) in 0.1% Triton X-100 and 10 mM Tris buffer (pH 8.0) to cyst suspensions (approximately 104 cysts/ml in balanced salt solution). The material was vortexed for 10 s, centrifuged at 10,000 × g for 10 s, and then heated at 95°C for 20 min and finally centrifuged at 10,000 × g for 20 s. The supernatant was used as the substrate for a PCR (4 μl). The following Acanthamoeba genus-specific primers were used: forward primer 5′-TCTCACAAGCT

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

“เรารายงานเทคนิคที่ง่าย รวดเร็ว และราคาไม่แพงสำหรับการสกัด DNA Acanthamoeba ด้วยเรซิน Chelex (เรซิน MB Chelex-100; Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA) ซึ่งเป็นวัสดุ polystyrene-divinylbenzene iminodiacetate ที่มีจำหน่ายในท้องตลาดซึ่งมีการใช้กันอย่างแพร่หลายใน DNA การสกัดเพื่อวัตถุประสงค์ทางนิติเวชและจุลชีววิทยา (3, 5, 6) เกณฑ์วิธีของเราประกอบด้วยการเติมสารละลาย Chelex 200 ไมโครลิตร (10% [น้ำหนัก/ปริมาตร]) ใน Triton X-100 0.1% และบัฟเฟอร์ Tris 10 มิลลิโมลาร์ (pH 8.0) ถึงสารแขวนลอยของซีสต์ (ประมาณ 104 ซีสต์/มล. ในสารละลายเกลือที่สมดุล) วัสดุถูกหมุนเหวี่ยงเป็นเวลา 10 วินาที ปั่นแยกที่ 10,000 × g เป็นเวลา 10 วินาที จากนั้นให้ความร้อนที่ 95°C เป็นเวลา 20 นาที และสุดท้ายปั่นแยกที่ 10,000 × g เป็นเวลา 20 วินาที ส่วนลอยเหนือตะกอนถูกใช้เป็นสารตั้งต้นสำหรับ PCR (4 ไมโครลิตร) มีการใช้ไพรเมอร์เฉพาะสกุล Acanthamoeba ต่อไปนี้: ไพรเมอร์ส่งต่อ 5′-TCTCACAAGCT

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

"เรารายงานเทคโนโลยีที่ง่ายรวดเร็วและราคาไม่แพงสำหรับการสกัดดีเอ็นเอของ Acanthoaminoba ด้วยเรซิน Chelex (MB Chelex-100 Resin; Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA) ซึ่งเป็นวัสดุโพลีสไตรีน divinylphenylaminodiacetate ที่วางจำหน่ายในท้องตลาดและมีการใช้กันอย่างแพร่หลายในการสกัดดีเอ็นเอเพื่อวัตถุประสงค์ทางนิติวิทยาศาสตร์และจุลชีววิทยา (3,5,6) โปรแกรมของเราประกอบด้วยการเพิ่มสารละลาย Chelex ขนาด 200 ไมโครลิตร (10% [wt/vol]) และ Tris Buffer ขนาด 10 มิลลิเมตร (pH 8.0) ลงในสารแขวนลอยซีสต์ (ประมาณ 104 ซีสต์/มิลลิลิตรในสารละลายเกลือที่สมดุล) เลื่อนวัสดุ 10 วินาทีและหมุนเหวี่ยงที่ 10,000 × g เป็นเวลา 10 วินาทีจากนั้นให้ความร้อนที่ 95 ° C เป็นเวลา 20 นาทีและในที่สุดก็หมุนเหวี่ยงที่ 10,000 × g เป็นเวลา 20 วินาที ของเหลวชั้นบนถูกใช้เป็นสารตั้งต้นสำหรับ PCR (4μl) ใช้ตัวนำที่เฉพาะเจาะจงของสกุล Acanthamiba ต่อไปนี้: ตัวดึงไปข้างหน้า 5'-TCTCACAAGCT

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

"เรารายงานว่าเรซินMB chelex-100; bio-rad laboratories,Hercules,CA )วัสดุพอลิสไตรีน-ไดเอทิลีนอะมิโนไดอะซิเตตที่มีจําหน่ายในตลาดซึ่งใช้กันอย่างแพร่หลายในการสกัดดีเอ็นเอเพื่อวัตถุประสงค์ทางนิติวิทยาศาสตร์และจุลินทรีย์( 3,5,6 ) โปรแกรมของเราประกอบด้วยสารละลายChelex 200μl ( 10 % [น้ําหนัก/ปริมาตร] )ที่0.1 % Triton x-100และ10 mM Tris buffer ( pH8. 0 )ลงในสารแขวนลอย(ประมาณ104แคปซูล/มิลลิลิตรในสารละลายเกลือสมดุล) วัสดุถูกหมุนวนเป็นเวลา10วินาทีและหมุนเหวี่ยงเป็นเวลา10,000กก.จากนั้นให้ความร้อนที่อุณหภูมิ95องศาเซลเซียสเป็นเวลา20นาทีและสุดท้ายหมุนเหวี่ยงเป็นเวลา20วินาทีที่10,000กก. สารละลายที่ใช้เป็นสารตั้งต้นสําหรับPCR ( 4μl ) ใช้ไพรเมอร์ที่เฉพาะเจาะจงต่อไปนี้:ไพรเมอร์5 '-TCTCACAAGCT