Twenty microgram of total RNA was r

Twenty microgram of total RNA was resolved with electrophoresis on a denaturing 15% polyacrylamide gel containing 7 M urea in 0.5x TBE buffer and electroblotted onto Hybond-N+ membrane (GE Healthcare, Little Chalfont, UK) in 0.5x TBE buffer. Membrane was soaked in 2x SSC for 5 min, crosslinked by UV exposure (70,000 J/cm2) and rinsed
in 0.5x SSC. Radiolabeled Venus DNA probes were constructed by random priming method using α-32P-dCTP (PerkinElmer, Inc., MA, USA) and Rediprime II DNA labelling system (GE
Healthcare). Hybridization was performed at 40°C using Perfect Hyb plus hybridization buffer (Sigma). Membrane was washed two times with 2x SSC, 0.1% SDS for 10min and three times with 0.5x SSC, 0.1% SDS for 15min at 50°C. Radioactive signals were detected using BAS2500 imager (Fujifilm, Tokyo, Japan).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

20 microgram ของอาร์เอ็นเอทั้งหมดได้รับการแก้ไข ด้วย electrophoresis ใน denaturing 15% polyacrylamide เจประกอบด้วย urea 7 M 0.5 x TBE บัฟเฟอร์และ electroblotted บน Hybond-N + เมมเบรน (GE สุขภาพ ชาร์ฟอร์นเซนน้อย สหราชอาณาจักร) ใน 0.5 x TBE บัฟเฟอร์ นำไปแช่ใน 2 x SSC สำหรับ 5 นาที crosslinked โดยรังสี (70000 J/cm2) และ rinsed เมมเบรนใน 0.5 x SSC คลิปปากตะเข้ดีเอ็นเอวีนัส radiolabeled ถูกสร้าง โดยการสุ่มด้วยวิธีการใช้ด้วยกองทัพ-P 32-dCTP (PerkinElmer, Inc., MA, USA) และ Rediprime II ดีเอ็นเอจำกัดระบบ (GEแพทย์) ทำ hybridization ที่ 40° C โดยใช้โก Hyb บวกบัฟเฟอร์ hybridization (ซิกมา) เมมเบรนถูกล้างสองครั้งกับ 2 x SSC, 0.1% SDS 10 นาทีและครั้งที่สามกับ 0.5 x SSC, 0.1% SDS ใน 15 นาทีที่ 50 องศาเซลเซียส สัญญาณกัมมันตรังสีพบใช้ถ่ายภาพ BAS2500 (มาก ๆ โตเกียว ญี่ปุ่น)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ยี่สิบไมโครกรัมของอาร์เอ็นเอรวมได้รับการแก้ไขด้วยอิเล็กบน denaturing polyacrylamide 15% เจลที่มีส่วนผสมของยูเรีย 7 M ในบัฟเฟอร์ 0.5 เท่าและ TBE electroblotted บน Hybond-N + เมมเบรน (GE Healthcare เล็ก ๆ น้อย ๆ Chalfont สหราชอาณาจักร) 0.5 เท่าในบัฟเฟอร์ TBE เมมเบรนที่ถูกแช่ใน SSC 2x 5 นาทีโดยการเชื่อมขวางสัมผัสรังสียูวี (70,000 J / cm2)
และล้างในSSC 0.5 เท่า radiolabeled วีนัสดีเอ็นเอโพรบที่ถูกสร้างขึ้นโดยวิธีการสุ่มโดยใช้รองพื้นα-32P-dCTP (PerkinElmer, Inc, MA, USA) และครั้งที่สอง Rediprime ระบบการติดฉลากดีเอ็นเอ (GE
ดูแลสุขภาพ) การผสมพันธุ์ได้ดำเนินการที่อุณหภูมิ 40 องศาเซลเซียสโดยใช้ที่สมบูรณ์แบบ Hyb บวกบัฟเฟอร์พันธุ์ (ซิกม่า) เมมเบรนถูกล้างครั้งที่สองกับเอสเอส 2x, 0.1% SDS สำหรับ 10 นาทีและครั้งที่สามกับเอสเอส 0.5 เท่า, 0.1% SDS สำหรับ 15 นาทีที่ 50 องศาเซลเซียส สัญญาณของสารกัมมันตรังสีที่ตรวจพบโดยใช้อิมเมจ BAS2500 (Fujifilm, กรุงโตเกียวประเทศญี่ปุ่น)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

20 ไมโครกรัมของอาร์เอ็นเอทั้งหมดได้รับการแก้ไขด้วยวิธีบนี่ 15% polyacrylamide gel ที่มี 7 M ยูเรียในบัฟเฟอร์ ( ทีบี electroblotted ลงและ hybond-n เมมเบรน ( GE Healthcare น้อย , ริดสีดวงทวาร , UK ( ทีบี ) ในบัฟเฟอร์ เยื่อชุ่มใน SSC 2x สำหรับ 5 นาทีเพิ่มขึ้น โดยแสง UV ( 70 , 000 J / cm2 ) และล้าง
ใน ( SSC .radiolabeled ดาวศุกร์ probes ถูกสร้างโดยการปั๊ม DNA โดยใช้แอลฟา 32p dctp ( Perkinelmer , Inc . , MA , USA ) และการติดฉลากดีเอ็นเอ rediprime 2 ระบบ ( GE
Healthcare ) 40 ° C ( แสดงที่สมบูรณ์แบบพร้อมใช้ hyb hybridization buffer ( Sigma ) เมมเบรน ล้าง 2 ครั้ง กับ 2x SSC 0.1% SDS สำหรับวันและสามครั้งด้วย ( SSC 0.1% SDS สำหรับ 15 นาทีที่ 50 องศาสัญญาณที่ตรวจพบกัมมันตรังสีที่ใช้ bas2500 Imager ( Fujifilm , โตเกียว , ญี่ปุ่น )