3.4. Multiplex PCR for meat adulter

3.4. Multiplex PCR for meat adulteration
Multiplex PCR facilitates the simultaneous detection of multiple
target genes and has the advantage of reduced cost and testing
time (Sint, Raso, & Traugott, 2012). The impact factors of multiplex
PCR sensitivity are derived from species types, target genes and
amplicon lengths (Ali, Razzak, & Hamid, 2014). For the simultaneous
detection of meat adulteration, a one-step multiplex PCR technique
was developed using the primers previously used for
simplex PCR. A 20% ratio of each meat mixture (MSA) was used
as a target (Supplemental Table 1). First, all primers were used in
the PCR reaction, but no amplicons were produced (data not
shown). Therefore, we optimized the primer sets for PCR. One primer
set, P-f/P-r, GT3-f/GT3-r and OS2-f/OS2-r, was successful for
the detection of pork, goat and ostrich (RT-PCR products: 500,
573 and 112 bp, respectively) in the mixture without cross reactivity
with other species (Fig. 2B, lane 1–6). The other primer set,
B6-f/B6-r and CK2-f/CK2-r, was specific for the detection of beef
and chicken, generating DNA fragments of 654 and 418 bp, respectively
(Fig 2B, lane 7–12). Therefore, multiplex PCR is more
functional and practical compared with simplex and real-time
PCR techniques for the determination of adulteration in meat
(Ali et al., 2014; Hou et al., 2014).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

3.4 การ multiplex PCR สำหรับ adulteration เนื้อMultiplex PCR อำนวยความสะดวกในการตรวจพบพร้อมกันหลายยีนเป้าหมาย และได้ประโยชน์จากต้นทุนที่ลดลงและการทดสอบเวลา (ซินท์ Raso, & Traugott, 2012) ปัจจัยผลกระทบของล็กความไวของ PCR ที่ได้รับมาจากชนิดพันธุ์ ยีนเป้าหมาย และความยาว amplicon (อาลี Razzak, & กร่าง 2014) สำหรับการเกิดตรวจสอบเนื้อ adulteration เทคนิคขั้นตอนเดียว multiplex PCRถูกพัฒนาโดยใช้ไพรเมอร์ที่ใช้ก่อนหน้านี้simplex PCR ใช้อัตรา 20% ของส่วนผสมแต่ละเนื้อ (MSA)เป้าหมายที่เป็น (เพิ่มเติมตาราง 1) ครั้งแรก ใช้ไพรเมอร์ทั้งหมดในผลิตปฏิกิริยา PCR แต่ไม่ amplicons (ข้อมูลไม่แสดง) ดังนั้น เราปรับชุดสีรองพื้นสำหรับ PCR รองพื้นหนึ่งชุด P-f/P-r, GT3-f/GT3-r OS2-f/OS2-r สำเร็จสำหรับการตรวจพบหมู แพะ และนกกระจอกเทศ (RT-PCR ผลิตภัณฑ์: 500573 และ 112 bp ตามลำดับ) ส่วนผสมโดยไม่เกิดปฏิกิริยาข้ามกับพันธุ์อื่น ๆ (Fig. 2B เลน 1-6) รองพื้นอื่น ๆ ตั้งB6-f/B6-r และ CK2-f/CK2-r มีเฉพาะสำหรับการตรวจหาเนื้อไก่ การสร้างชิ้นส่วนดีเอ็นเอของ bp 654 และ 418 ตามลำดับ(ฟิก 2B เลน 7 – 12) ดังนั้น multiplex PCR คือเพิ่มเติมทำงาน และการปฏิบัติเทียบกับ simplex แบบเรียลไทม์เทคนิค PCR ในการกำหนดการ adulteration ในเนื้อ(Ali et al., 2014 Hou et al., 2014)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

3.4 Multiplex PCR สำหรับเนื้อปลอมปน
multiplex PCR
อำนวยความสะดวกในการตรวจสอบพร้อมกันของหลายยีนเป้าหมายและมีความได้เปรียบของค่าใช้จ่ายที่ลดลงและการทดสอบเวลา
(ซิงต์, Raso และ Traugott 2012) ปัจจัยที่ผลกระทบของหลายไว PCR จะได้มาจากประเภทชนิดยีนเป้าหมายและความยาวamplicon (อาลี Razzak & ฮามิด 2014) พร้อมกันสำหรับการตรวจสอบการปลอมปนเนื้อเทคนิค PCR ขั้นตอนหนึ่งในหลายได้รับการพัฒนาโดยใช้ไพรเมอร์ที่ใช้ก่อนหน้านี้สำหรับวิธีPCR เริม อัตราส่วน 20% ของแต่ละส่วนผสมเนื้อ (MSA) ถูกนำมาใช้เป็นเป้าหมาย(เพิ่มเติมตารางที่ 1) ครั้งแรกที่ทุกไพรเมอร์ที่ใช้ในปฏิกิริยา PCR แต่ไม่มี amplicons ถูกผลิต (ข้อมูลไม่แสดง) ดังนั้นเราจึงเพิ่มประสิทธิภาพชุดไพรเมอร์สำหรับ PCR ไพรเมอร์หนึ่งชุด Pf / การประชาสัมพันธ์, GT3-f / GT3-R และ OS2-f / OS2-R, ที่ประสบความสำเร็จสำหรับการตรวจสอบเนื้อหมูแพะและนกกระจอกเทศ(ผลิตภัณฑ์ RT-PCR: 500, 573 และ 112 bp ตามลำดับ) ในส่วนผสมโดยไม่เกิดปฏิกิริยาข้ามกับสายพันธุ์อื่น(รูป. 2B เลน 1-6) ชุดไพรเมอร์อื่น ๆB6-f / B6-R และ CK2-f / CK2-R, เป็นที่เฉพาะเจาะจงสำหรับการตรวจสอบของเนื้อวัวและไก่สร้างดีเอ็นเอของ654 และ 418 bp ตามลำดับ(รูปที่ 2B เลน 7-12) . ดังนั้น multiplex PCR มีมากขึ้นการทำงานและการปฏิบัติเมื่อเทียบกับเริมและเวลาจริงเทคนิคPCR ในการตรวจวัดการปลอมปนในเนื้อ(อาลี et al, 2014;.. Hou et al, 2014)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

3.4 . เทคนิค multiplex PCR มัลติเพล็กซ์สำหรับเนื้อสัตว์ปลอมปน
อำนวยความสะดวกการตรวจจับพร้อมกันหลาย
เป้าหมายยีนและได้ประโยชน์จากการลดต้นทุน และเวลาในการทดสอบ
( ซินล่&โทรก ต์ ริด , , , 2012 ) ผลกระทบปัจจัยของ multiplex PCR จะได้มาจากประเภทไว

ความยาวและชนิดยีนเป้าหมายและ ( อาลี razzak & , ฮามิด ปี 2014 ) สำหรับพร้อมกัน
การตรวจสอบการปลอมปนเนื้อสัตว์ เทคนิค multiplex PCR ขั้นตอนเดียว
ถูกพัฒนาขึ้นโดยใช้ไพรเมอร์ที่ใช้ก่อนหน้านี้สำหรับ
เริม PCR 20 % อัตราส่วนของแต่ละเนื้อผสม ( MSA ) คือใช้
เป็นเป้าหมาย ( ตารางภาคผนวกที่ 1 ) ครั้งแรกของทุกชิ้นดีเอ็นเอที่ใช้ในปฏิกิริยา PCR
แต่ไม่มี amplicons ถูกผลิต ( ข้อมูลไม่
แสดง ) ดังนั้นเราจึงปรับไพรเมอร์ชุด PCR หนึ่งชุด p-f / P-R รองพื้น
, ,และ gt3-f / gt3-r os2-f / os2-r ประสบความสำเร็จสำหรับ
ตรวจหาหมู แพะกับนกกระจอกเทศ ( RT-PCR ผลิตภัณฑ์ : 500
แล้ว 112 คู่เบส ตามลำดับ ) ในส่วนผสมโดยขอประทาน
กับสายพันธุ์อื่น ๆ ( รูปที่ 2B เลน 1 – 6 ) ชุดรองพื้น อื่น ๆ ,
b6-f / b6-r ck2-f / และ ck2-r , ที่เฉพาะเจาะจงสำหรับการตรวจหาเนื้อ
ไก่ , การสร้างดีเอ็นเอของและคุณคู่เบส ตามลำดับ ( รูปที่ 2B
ช่อง 7 ( 12 ) ดังนั้น , multiplex PCR มากกว่า
หน้าที่และการปฏิบัติเมื่อเทียบกับเทคนิค PCR แบบเรียลไทม์และเริม
เพื่อการตัดสินใจของการปลอมปนในอาหาร
( Ali et al . , 2014 ; โฮว et al . , 2010 )