a-Amylase from wheat (Triticum aest

a-Amylase from wheat (Triticum aestivum) seeds: Its purification,
biochemical attributes and active site studies

Glycosylated a-amylase from germinated wheat seeds (Triticum aestivum) has been purified to apparent
electrophoretic homogeneity with a final specific activity of 1372 U/mg. The enzyme preparation when
analysed on SDS–PAGE, displayed a single protein band with Mr 33 kDa; Superdex 200 column showed
Mr of 32 kDa and MS/MS analysis further provided support for these values. The enzyme displayed its
optimum catalytic activity at pH 5.0 and 68 C with an activation energy of 6.66 kcal/mol and Q10 1.42.
The primary substrate for this hydrolase appears to be starch with Km 1.56 mg/mL, Vmax 1666.67 U/mg
and kcat 485 s 1 and hence is suitable for application in starch based industries. Thermal inactivation
of a-amylase at 67 C resulted in first-order kinetics with rate constant (k) 0.0086 min 1 and t1/2
80 min. The enzyme was susceptible to EDTA (10 mM) with irreversible loss of hydrolytic power. In
the presence of 1.0 mM SDS, the enzyme lost only 14% and 23% activity in 24 and 48 h, respectively.
Chemical modification studies showed that the enzyme contains histidine and carboxylic residues at
its active site for its catalytic activity and possibly conserved areas.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

a-อะไมเลสจากเมล็ดข้าวสาลี (Triticum aestivum): การทำให้บริสุทธิ์แอตทริบิวต์ทางชีวเคมีและการศึกษาใช้งานเว็บไซต์ได้รับบริสุทธิ์ Glycosylated เป็นอะไมเลสจากเมล็ดเปลือกงอกข้าวสาลี (Triticum aestivum) ให้ชัดเจนเนื้อเดียวกัน electrophoretic พร้อมกับกิจกรรมสุดท้ายของ 1372 U/mg การเตรียมเอนไซม์เมื่อวิเคราะห์ใน SDS – หน้า แสดงวงดนตรีโปรตีนเดี่ยวกับ 33 นาย kDa พบคอลัมน์ superdex 200นาย kDa และ MS/MS วิเคราะห์เพิ่มเติม 32 ให้การสนับสนุนสำหรับค่าเหล่านี้ เอนไซม์ที่แสดงความกิจกรรมตัวเร่งปฏิกิริยาที่เหมาะสมที่ pH 5.0 และ 68 C มีค่าพลังงานกิโลแคลอรี/โมลและ Q10 1.42 6.66พื้นผิวหลักสำหรับ hydrolase นี้ปรากฏขึ้นเพื่อ ให้แป้งกับกม. 1.56 mg/mL, Vmax 1666.67 U/mgและ kcat 485 s 1 และดังนั้นจึง เหมาะสำหรับประยุกต์ใช้ในอุตสาหกรรมแป้งที่ขึ้น เลิกความร้อนของ a-อะไมเลสที่ 67 C ผลในจลนพลศาสตร์ลำดับแรกกับค่าคงอัตรา (k) 0.0086 นาที 1 และ t1/280 นาที เอนไซม์นี้ถูกควบคู่กับ EDTA (10 mM) กับไม่สูญเสียพลังงานความคงทน ในการปรากฏตัวของ 1.0 มิลลิเมตร SDS เอนไซม์นี้หายไปเพียง 14% และ 23% กิจกรรมใน 24 และ 48 ชม. ตามลำดับศึกษาการเปลี่ยนแปลงทางเคมีที่แสดงให้เห็นว่า เอนไซม์ที่ประกอบด้วย histidine และตกค้าง carboxylic ที่ไซต์ใช้งานปัจจัยกิจกรรมและพื้นที่อนุรักษ์อาจจะ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

A-อะไมเลสจากข้าวสาลี (Triticum aestivum) เมล็ด: ของตนให้บริสุทธิ์,
คุณลักษณะทางชีวเคมีและการศึกษาการใช้งานเว็บไซต์Glycosylated A-อะไมเลสจากเมล็ดข้าวสาลีงอก (Triticum aestivum) ได้รับการทำให้บริสุทธิ์ที่จะเห็นได้ชัดสม่ำเสมอของอิเลคกับกิจกรรมที่เฉพาะเจาะจงสุดท้ายของ 1372 U / mg การเตรียมเอนไซม์เมื่อวิเคราะห์ในระบบ SDS-หน้าแสดงวงดนตรีโปรตีนเดียวกับนาย 33 กิโลดาลตัน; Superdex 200 คอลัมน์แสดงให้เห็นว่านาย 32 กิโลดาลตันและการวิเคราะห์ MS / MS มีให้เพิ่มเติมการสนับสนุนสำหรับค่าเหล่านี้ เอนไซม์ที่ปรากฏของการเร่งปฏิกิริยาที่ดีที่สุดที่ pH 5.0 และ 68 C มีพลังงานกระตุ้นของ 6.66 kcal / mol และ Q10 1.42. สารตั้งต้นหลักสำหรับ hydrolase นี้ดูเหมือนจะเป็นแป้งกับ Km 1.56 mg / ml, Vmax 1,666.67 U / mg และ kcat 485 s 1 และด้วยเหตุนี้เหมาะสำหรับการประยุกต์ใช้ในอุตสาหกรรมแป้งตาม พลังความร้อนของอะไมเลสที่ 67 องศาเซลเซียสส่งผลให้จลนศาสตร์ลำดับแรกที่มีอัตราคงที่ (k) 0.0086 นาทีที่ 1 และ T1 / 2 80 นาที เอนไซม์ที่เป็นความเสี่ยงที่จะ EDTA (10 มิลลิเมตร) กลับไม่ได้กับการสูญเสียของพลังงานที่ย่อยสลาย ในการปรากฏตัวของ 1.0 มิลลิ SDS ที่เอนไซม์ที่หายไปกิจกรรมเพียง 14% และ 23% ในปี 24 และ 48 ชั่วโมงตามลำดับ. การศึกษาการเปลี่ยนแปลงทางเคมีพบว่าเอนไซม์มีฮิสติดีนและสารตกค้างคาร์บอกซิที่ใช้งานเว็บไซต์สำหรับการเร่งปฏิกิริยาและอาจเป็นพื้นที่ที่ป่าสงวน .