Analytical MethodsDetermination of

Analytical Methods
Determination of EDTA in feed and premix formulations by HPLC-DAD
Francesco Chiumiento ⇑
, Antonio D’Aloise, Francesca Marchegiani, Valeria Melai
Istituto Zooprofilattico Sperimentale dell’Abruzzo e del Molise, Reparto Bromatologia e Residui - Campo Boario 1, 64100 Teramo, Abruzzo, Italy
article info
Article history:
Received 24 July 2014
Received in revised form 25 November 2014
Accepted 29 November 2014
Available online 6 December 2014
Keywords:
Feed safety
2002/657/EC validation
EDTA complexes
Ion-pair chromatography
abstract
A simple analytical method for the quantitative determination of ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)
in feed and premix formulations was developed and validated. The method involves an extraction with an
acidic ferric chloride solution, to quantitatively convert EDTA species in the samples into the Fe(III)–EDTA
complex, and its subsequent detection by Ion-Pair-Reversed Phase-High Performance Liquid Chromatography-Diode
Array Detection (IP-RP-HPLC-DAD). A robust validation procedure was performed according
to the Decision 2002/657/EC at concentrations ranging from 25 to 100 mg kg1 on sample. Good recoveries
(85.6–92.8%) were obtained; repeatability of the method was in the range of 1.3–8.0%, with an intermediate
precision ranging from 6.0% to 8.6%, both of them expressed as relative standard deviation (RSD).
No interfering species hindered the straightforward detection of EDTA. Hence, the proposed method can
be adopted for an effective and rapid routine analysis of products for livestock.
2014 Elsevier Ltd. All rights reserved.
1. Introduction
Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) has a widespread use
in several laboratory and industrial applications: it is a colorless
solid aminopolycarboxylic acid, slightly soluble in water (500 mg
L1
, 25 C, 1 atm), and it is usually produced in form of several
salts, frequently disodium EDTA and calcium disodium EDTA. Its
importance is due to the ability to act as a ‘‘six-toothed’’ ligand
for a wide number of metals, i.e., EDTA sequesters cations, whose
reactivity decrease after binding.
EDTA is used as a chelating agent in various fields: in the pharmaceutical
and metal industries, it prevents the catalytic action of
metals. In the detergents industry, EDTA is used to reduce water
hardness by binding Ca(II) and Mg(II) which do not precipitate
anymore as carbonates, that may hinder an efficient action of
detergent products. In the food industry, EDTA is added as a stabilizer,
i.e., in order to prevent oxidative discoloration, while in soft
drinks containing ascorbic acid and sodium benzoate, EDTA mitigates
the formation of benzene (a carcinogen) (Food, 2006;
Nowack & VanBriesen, 2005). Within the European Union (EU),
the use of EDTA as a food additive is regulated by the Regulation
1333/2008/EC, which allows its presence only in few food categories;
conversely, the EU legislation does not approve EDTA use as a
feed additive for livestock. In the course of animal husbandry, ‘feed
materials’ shall mean various products of vegetable or animal origin,
products derived from the industrial processing thereof, and
organic or inorganic substances, whether or not containing additives,
intended for use in oral animal feeding either directly as such
or, after processing, in the preparation of compound feed.
A compound feed is a blend from various raw materials and
additives, whose main ingredients are usually corn, sorghum, oats,
barley, etc. Compound feed may also include premixes, composed
of micro-ingredients such as vitamins, minerals, chemical preservatives,
antibiotics, fermentation products with substances used
as carriers, which together assure the intake of the recommended
levels of essential nutrients to the animal. In that context, feed
safety has gained increasing attention in the scientific community,
in order to adapt to ethical issues, and to ensure the supply of
healthy food of animal origin suitable for human consumption. In
the feed industry, EDTA and its derivatives are believed to prevent
bacterial intestina1 diseases of pigs, while also increasing the
effects of antibiotics against such illnesses; moreover, it seems to
be fully harmless to the animal organism (Hutas, 2013).
EDTA faces also veal quality issues, as documented in literature
(Pommier, Lapierre, Passillé, & Gariépy, 1995): one of the considered
parameters for quality evaluation is the color of the meat,
since it is argued that veal from milk-fed calves (white) has a more
refined taste than a cheaper veal from grain-fed calves (red). A feasible
way to produce the more valuable white veal is to limit the
availability of iron in the diet, in order to reduce pigment accumulation
in muscle, and the use of chelating agents such as Ca-EDTA
has been reported to result in a lighter muscle color. As already
mentioned, within the EU EDTA presence in feed has to be
regarded as the result of a fraudulent action; meanwhile, in the
US it is intended for use in an amount not to exceed 240 mg L1
http://dx.doi.org/10.1016/j.foodchem.2014.11.159
0308-8146/ 2014 Elsevier Ltd. All rights reserved.
⇑ Corresponding author. Tel.: [phone].
E-mail address: [e-mail] (F. Chiumiento).
Food Chemistry 175 (2015) 452–456
Contents lists available at ScienceDirect
Food Chemistry
journal homepage: www.elsevier.com/locate/foodchem
in the finished product. At best of our knowledge, no validated
methods for EDTA determination in feed and premix formulations
are present in the literature, even if several approaches were
implemented for different matrices: RP-HPLC (Kemmei, Kodama,
Yamamoto, Inoue, & Hayakawa, 2013; Perez-Ruiz, MartinezLozano,
& Garcia-Martinez, 2008; Sillanpaa & Sihvonen, 1997),
gas-chromatography (Retho & Diep, 1989), ion-chromatography
(Krokidis, Megoulas, & Koupparis, 2005), capillary electrophoresis
(Laamanen, Mali, & Matilainen, 2005), and liquid chromatography–tandem
mass spectrometry (Quintana & Reemtsma, 2007).
The study presented in this manuscript provides a validated
method for an effective, rapid and simple routine determination
of EDTA in feed and premix formulations, via a procedure based
on Ion-Pair-Reversed Phase-High Performance Liquid Chromatography
and Diode Array Detection (IP-RP-HPLC-DAD). The method
exploits the well-known ability of EDTA to form the most thermodynamically
stable complexes with Fe(III) ions (Sillanpää,
Kokkonen, & Sihvonen, 1995): moreover, chelation is needed
because free EDTA does not strongly absorb in the UV–Vis region.
In the chosen experimental conditions, no interferences due to
other metal ions are present: an excess of Fe(III) ions (ferric chloride
solution) is added to the samples, in order to achieve quantitative
conversion of the several possible EDTA species into the
Fe(III)-complex.
Sample extraction must be performed in acidic conditions
(pH 3) for avoiding Fe(III) precipitation as ferric hydroxide
(Sillanpää et al., 1995). Indeed, pH for iron complexes formation
is crucial for chelation efficiency (Zheng, Watson, Tettey, &
Clements, 2008): there is a hyperbolic relationship between the
pH and the log K that give us information about the minimum
pH required to obtain a satisfactory chelation. For EDTA, this minimum
pH values for Fe(III) is below 2.0, while for Fe(II) it is higher
(>5.0) (De Luca, Dantas, & Esplugas, 2014).
After FeCl3 addition, samples solutions were kept in the dark in
order to prevent photochemical degradation of the Fe(III)-complex,
and to promote its formation sample solutions were heated at
70 C±2 C for 30 min.
The last step is necessary because although the Fe(III) complex
is thermodynamically favored over all other metal complexes,
some of them are more kinetically favored (Nowack, Kari, Hilger,
& Sigg, 1996); therefore, it seemed advisable to heat the samples
to accelerate the equilibration (Quintana & Reemtsma, 2007).
Finally, the EDTA ferric complex was spectrophotometrically determined
at its kmax, setting DAD at 254 nm (Cagnasso, López,
Rodríguez, & Valencia, 2007; Yamaguchi, Rajput, Ohzeki, &
Kambara, 1983). As regards to method validation, this is nowadays
a priority for laboratories which are responsible for carrying out
official controls of foodstuffs, and the fitness for purpose of analytical
methods applied for such routine testing is assessed through
the determination of overall method performance parameters
(Cozar-Bernal, Rabasco, & Gonzalez-Rodriguez, 2013). Many
important decisions are based on the results of quantitative analyses:
they are used, for example, to check foods against specifications
or statutory limits, thus involving legal concerns (Ellison &
Williams, 2012). As in our case, it is now a formal (frequently legislative)
requirement for laboratories to introduce quality assurance
measures, to ensure that they are capable of providing good
quality data. Such measures include, indeed, the use of validated
methods, internal quality control procedures, proficiency testing
and accreditation (International Organization for Standardization/
International Electrotechnical Commission 17025, 2005), especially
demanding when dealing with the determination of unauthorized
substances, as can be EDTA in feed and premix
formulation within the EU. Hence, in order to comply with these
requirements, the present work describes a procedure for method
validation using the following parameters: linearity, repeatability
and intermediate precision, accuracy, specificity, detection (LOD)
and quantitation (LOQ) limits, and measurement uncertainty.
2. Materials and methods
2.1. Chemicals and standards preparation
All chemicals were of analytical reagent grade: ethylenediaminetetraacetic
acid disodium salt di-hydrate, ferric chloride
hexa-hydrate, tetrabutylammonium hydroxide solution 1 M, glacial
acetic acid, ammonium acetate, and methanol were purchased
from Sigma–Aldrich. All aqueous solutions were prepared with
high-purity water (resistivity 18.2 M cm1
) obtai

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วิธีวิเคราะห์ความมุ่งมั่นของ EDTA ในสูตรอาหารและ premix โดย HPLC-พ่อฟรานเชสโค Chiumiento ⇑, Antonio D'Aloise ฟรานเซสซา Marchegiani, Valeria MelaiIstituto Zooprofilattico Sperimentale dell'Abruzzo อีเดล Molise, e Reparto Bromatologia Residui - บรรดา Boario 1, 64100 Teramo ในอาบรุซโซ อิตาลีข้อมูลบทความบทความประวัติ:ได้รับ 24 2014 กรกฎาคมรับแบบฟอร์มที่ปรับปรุง 25 2014 พฤศจิกายนยอมรับ 29 2014 พฤศจิกายนมีออนไลน์ 6 2557 ธันวาคมคำสำคัญ:อาหารความปลอดภัยตรวจสอบ 2002/657/ECคอมเพล็กซ์ EDTAไอออนคู่ chromatographyบทคัดย่อวิธีวิเคราะห์อย่างง่ายสำหรับการกำหนดเชิงปริมาณของกรด ethylenediaminetetraacetic (EDTA)ในอาหารและ premix สูตรถูกพัฒนา และผ่านการตรวจสอบ วิธีการเกี่ยวข้องกับการสกัดด้วยการโซลูชั่นคคลอไรด์กรด quantitatively แปลงชนิด EDTA ในตัวอย่างเป็น Fe (III) – EDTAซับซ้อน และการตรวจสอบต่อมาโดย Ion-Pair-Reversed ระยะสูงประสิทธิภาพของเหลว Chromatography-ไดโอดตรวจแถว (IP-RP-HPLC-DAD) ขั้นตอนการตรวจสอบประสิทธิภาพมีดำเนินการตามการตัดสินใจ 2002/657/EC ที่ความเข้มข้นตั้งแต่ 25 ถึง 100 มิลลิกรัม kg1 บนตัวอย่าง Recoveries ดี(85.6 – 92.8%) ไม่รับ ทำซ้ำในวิธีการอยู่ในช่วง 1.3 – 8.0% กับกลางความแม่นยำตั้งแต่ 6.0% 8.6% ทั้งสองอย่างแสดงเป็นค่าเบี่ยงเบนมาตรฐานสัมพัทธ์ (RSD)ชนิดไม่รบกวนผู้ที่ขัดขวางการตรวจพบที่ตรงไปตรงมาของ EDTA ด้วยเหตุนี้ วิธีการนำเสนอสามารถสามารถนำมาใช้อย่างรวดเร็ว และมีประสิทธิภาพประจำวิเคราะห์ผลิตภัณฑ์สำหรับปศุสัตว์ 2014 Elsevier จำกัด สงวนลิขสิทธิ์ทั้งหมด1. บทนำกรด Ethylenediaminetetraacetic (EDTA) มีใช้อย่างแพร่หลายในห้องปฏิบัติการและอุตสาหกรรมที่ใช้งาน: จะมีสีซีดaminopolycarboxylic แข็งกรด เล็กน้อยที่ละลายในน้ำ (500 มิลลิกรัมL1, 25 C, 1 atm), และมักจะผลิตในรูปแบบต่าง ๆsalts มักหัว EDTA และ EDTA แคลเซียมหัว ของมีความสำคัญเนื่องจากความสามารถในการทำหน้าที่เป็นลิแกนด์ที่ '' toothed หกนิ้วสำหรับตัวเลขความกว้างของโลหะ เช่น EDTA sequesters เป็นของหายาก มีลดการเกิดปฏิกิริยาหลังจากผูกใช้ EDTA เป็นตัวแทน chelating ในเขตข้อมูลต่าง ๆ: ในตัวยาและอุตสาหกรรมโลหะ ป้องกันไม่ให้การดำเนินการตัวเร่งปฏิกิริยาโลหะการ ในอุตสาหกรรมผงซักฟอก EDTA ใช้ลดน้ำความแข็ง ด้วยการผูก Ca(II) และ Mg(II) ซึ่ง precipitateอีกต่อไปเป็น carbonates ที่อาจขัดขวางการดำเนินการอย่างมีประสิทธิภาพผลิตภัณฑ์ผงซักฟอก ในอุตสาหกรรมอาหาร เพิ่ม EDTA เป็นคำโคลงเช่น เพื่อป้องกันกระ oxidative ในขณะที่ในน้ำเครื่องดื่มที่ประกอบด้วยกรดแอสคอร์บิคและโซเดียม benzoate, EDTA mitigatesการก่อตัวของเบนซีน (เป็นสารก่อมะเร็ง) (อาหาร 2006Nowack & VanBriesen, 2005) ภายในสหภาพยุโรป (EU),การใช้ EDTA เป็นอาหารที่สามารถจะถูกกำหนด โดยข้อบังคับ1333/2008/EC ซึ่งช่วยให้สถานะของตนในบางประเภทอาหารในทางกลับกัน กฎหมาย EU ไม่อนุมัติใช้ EDTA เป็นตัวอาหารเสริมสำหรับปศุสัตว์ ในหลักสูตรสัตวบาล, ' ตัวดึงข้อมูลของวัสดุหมายความว่า ผลิตภัณฑ์ต่าง ๆ ของสัตว์ หรือผักผลิตภัณฑ์ที่ได้จากอุตสาหกรรมแปรรูปดังกล่าว และสารอินทรีย์ หรืออนินทรีย์ ไม่ประกอบด้วยสารสำหรับใช้ในช่องปากสัตว์ให้อาหารอย่างใดอย่างหนึ่งโดยตรงเช่นหรือ หลังจากประมวลผล สารประกอบในอาหารอาหารผสมเป็นการผสมผสานจากวัตถุดิบต่าง ๆ และสาร ที่มีส่วนผสมหลักมักข้าวโพด ข้าวฟ่าง ข้าวโอ๊ตข้าวบาร์เลย์ ฯลฯ อาหารผสมอาจรวมถึง premixes ประกอบด้วยไมโครวัตถุดิบเช่นวิตามิน แร่ธาตุ สารกัน บูดสารเคมียาปฏิชีวนะ ผลิตภัณฑ์หมักกับสารที่ใช้เป็นสายการบิน ซึ่งมั่นใจว่าการบริโภคของที่แนะนำกันระดับของสารอาหารที่จำเป็นไปยังสัตว์ ในบริบทที่ อาหารปลอดภัยได้รับความสนใจเพิ่มขึ้นในชุมชนทางวิทยาศาสตร์เพื่อปรับให้เข้ากับปัญหาจริยธรรม และให้จัดหาอาหารเพื่อสุขภาพของสัตว์เหมาะสำหรับมนุษย์บริโภค ในเชื่อว่าป้องกันไม่ให้อุตสาหกรรมอาหาร EDTA และอนุพันธ์intestina1 แบคทีเรียโรคสุกร ในขณะที่ยัง เพิ่มการผลของยาต่อโรคดังกล่าว นอกจากนี้ ดูเหมือนได้อยู่อาศัยอย่างสัตว์สิ่งมีชีวิต (Hutas, 2013)EDTA หันหน้ายังเนื้อคุณภาพปัญหา ตามบันทึกในเอกสารประกอบการ(Pommier, Lapierre, Passillé, & Gariépy, 1995): หนึ่งในการพิจารณาพารามิเตอร์สำหรับการประเมินคุณภาพเป็นสีเนื้อเนื่องจากมันจะโต้เถียงว่า ลูกวัวจากวัวที่เลี้ยงนม (สีขาว) มีมากขึ้นรสชาติที่บริสุทธิ์กว่าลูกวัวถูกกว่าจากข้าวเลี้ยงวัว (แดง) ความเป็นไปได้วิธีการผลิตลูกวัวสีขาวที่มีคุณค่ามากคือการ จำกัดการพร้อมใช้งานของเหล็กในอาหาร การลดการสะสมของเม็ดสีในกล้ามเนื้อ และการใช้ chelating ตัวแทนเช่น Ca EDTAมีการรายงานผลในสีกล้ามเนื้อเบา เป็นแล้วกล่าว ภายในอยู่ใน EU EDTA ในอาหารได้เป็นถือเป็นผลของการกระทำที่หลอกลวง ในขณะเดียวกัน ในการสหรัฐมีวัตถุประสงค์สำหรับใช้เป็นไม่เกิน 240 มิลลิกรัม L1http://dx.doi.org/10.1016/j.foodchem.2014.11.1590308-8146 / 2014 Elsevier จำกัด สงวนลิขสิทธิ์ทั้งหมดผู้⇑ Corresponding โทรศัพท์: + 39 3389226505ที่อยู่อีเมล: (F. Chiumiento) ใน [e-mail]อาหารเคมี 175 (2015) 452-456เนื้อหารายการ ScienceDirectเคมีอาหารหน้าแรกของสมุดรายวัน: www.elsevier.com/locate/foodchemในผลิตภัณฑ์สำเร็จรูป ในส่วนของความรู้ของเรา ตรวจสอบความถูกไม่วิธีการกำหนด EDTA ในสูตรอาหารและ premixมีอยู่ในวรรณคดี แม้ว่ามีหลายวิธีสำหรับเมทริกซ์ที่แตกต่างกัน: RP-HPLC (Kemmei โกดะมะยามาโมโตะ โนะอุเอะ & Hayakawa, 2013 เปเรซ-Ruiz, MartinezLozanoและการ์เซียมาติเน่ 2008 Sillanpaa & Sihvonen, 1997),-chromatography ก๊าซ (Retho & ซเวียบ 1989), ไอออน chromatography(Krokidis, Megoulas, & Koupparis, 2005), เส้นเลือดฝอย electrophoresis(Laamanen มาลี & Matilainen, 2005), และเหลว chromatography – ตัวตามกันไปโตรเมทรี (Quintana & Reemtsma, 2007)การศึกษาที่นำเสนอในฉบับนี้มีการตรวจวิธีการกำหนดงานประจำมีประสิทธิภาพ รวดเร็ว และง่ายของ EDTA ในอาหารและ premix สูตร ผ่านขั้นตอนตามบน Chromatography เหลวประสิทธิภาพสูงระยะไอออนคู่กลับและไดโอดอาร์เรย์ตรวจ (IP-RP-HPLC-DAD) วิธีการนำความสามารถรู้จักของ EDTA ฟอร์มมากที่สุด thermodynamicallyสิ่งอำนวยความสะดวกมั่นคง ด้วยกัน Fe(III) (SillanpääKokkonen, & Sihvonen, 1995): นอกจากนี้ ต้องการ chelationเนื่องจาก EDTA ฟรีไม่ขอดูดซับในภูมิภาค UV – Visท่านทดลองสภาพ interferences ไม่เนื่องมีประจุอื่น ๆ โลหะ: มากเกิน Fe(III) ประจุ (คคลอไรด์โซลูชั่น) เพิ่มตัวอย่าง การประสบความสำเร็จเชิงปริมาณแปลงพันธุ์ EDTA สามารถหลายในการFe (III) -ซับซ้อนสกัดตัวอย่างที่ต้องทำในสภาวะกรด(pH 3) สำหรับการหลีกเลี่ยงฝน Fe(III) เป็นไฮดรอกไซด์เฟอร์(Sillanpää และ al., 1995) แน่นอน ค่า pH สำหรับเหล็กก่อสิ่งอำนวยความสะดวกเป็นสิ่งสำคัญสำหรับประสิทธิภาพ chelation (เจิ้ง Watson, Tettey, &Clements, 2008): มีความสัมพันธ์ระหว่างไฮเพอร์โบลิการpH และล็อก K ที่ให้ข้อมูลเกี่ยวกับขั้นต่ำต้องรับ chelation พอ pH สำหรับ EDTA ขั้นต่ำนี้ค่า pH สำหรับ Fe(III) นี้ 2.0 ในขณะที่สำหรับ Fe(II) สูง(> 5.0) (เดอลูกา Dantas, & Esplugas, 2014)หลังจากนี้ FeCl3 โซลูชั่นตัวอย่างถูกเก็บไว้ในมืดในสั่งให้สลายตัว photochemical ของ Fe (III) -คอมเพล็กซ์และเพื่อส่งเสริมการก่อตัวอย่างโซลูชั่นถูกความร้อนที่70 C±2 C สำหรับ 30 นาทีขั้นตอนสุดท้ายที่จำเป็นเนื่องจากแม้ว่าคอมเพล็กซ์ Fe(III)เป็น thermodynamically ที่ชื่นชอบทั้งหมดคอมเพล็กซ์โลหะอื่น ๆบางส่วนของพวกเขาเป็น kinetically ปลอด (Nowack ผงกระหรี่ Hilgerและ Sigg, 1996); ดังนั้น เหมือนแนะนำให้ความร้อนตัวอย่างเพื่อเร่ง equilibration (Quintana & Reemtsma, 2007)สุดท้าย คอมเพล็กซ์เฟอร์ EDTA spectrophotometrically กำหนดที่ของ kmax ตั้งพ่อที่ 254 nm (Cagnasso, LópezRodríguez, & Valencia, 2007 Yamaguchi อย่างไร Rajput, Ohzeki, &Kambara, 1983) ขอแสดงความนับถือเพื่อตรวจสอบวิธี นี้เป็นปัจจุบันสำคัญที่สุดสำหรับห้องปฏิบัติการซึ่งรับผิดชอบการดำเนินการควบคุมอาหาร และออกกำลังกายสำหรับวัตถุประสงค์ของการวิเคราะห์ทางวิธีใช้สำหรับทดสอบเป็นประจำเช่นมีประเมินผ่านกำหนดพารามิเตอร์ประสิทธิภาพวิธีการโดยรวม(Cozar เบอร์นัล Rabasco และ Gonzalez-ร็อดริเก ซ 2013) หลายตัดสินใจที่สำคัญขึ้นอยู่กับผลลัพธ์ของการวิเคราะห์เชิงปริมาณ:พวกเขาใช้ ตัวอย่าง การตรวจสอบอาหารกับข้อมูลจำเพาะหรือข้อ จำกัดตามกฎหมาย จึง เกี่ยวข้องกับความกังวลทางกฎหมาย (เอลลิสันและวิลเลียมส์ 2012) ในกรณีของเรา เป็นเป็นทางการ (สภาบ่อย)ข้อกำหนดสำหรับห้องปฏิบัติการเพื่อแนะนำการประกันคุณภาพมาตรการ เพื่อให้แน่ใจว่า จะสามารถให้ดีข้อมูลคุณภาพ มาตรการดังกล่าวรวม แน่นอน การใช้ตรวจสอบวิธีการ ขั้นตอนการควบคุมคุณภาพภายใน การทดสอบความชำนาญและการรับรอง (องค์การระหว่างประเทศว่าด้วยการมาตรฐาน /นานาชาติด้ารเสริม 17025, 2005), โดยเฉพาะอย่างยิ่งเรียกร้องเมื่อทำ ด้วยความตั้งใจจะไม่ได้รับอนุญาตสาร มี EDTA ในอาหารและ premixกำหนดภายใน EU ดังนั้น การปฏิบัติเหล่านี้ความต้องการ งานนำเสนออธิบายขั้นตอนสำหรับวิธีตรวจสอบโดยใช้พารามิเตอร์ต่อไปนี้: แบบดอกไม้ ทำซ้ำในและกลางความแม่นยำ ความถูกต้อง specificity ตรวจสอบ (ลอด)และข้อจำกัดของการวิเคราะห์หาปริมาณ (LOQ) และวัด2. วัสดุและวิธีการ2.1 เตรียมเคมีและมาตรฐานสารเคมีทั้งหมดได้เกรดรีเอเจนต์วิเคราะห์: ethylenediaminetetraaceticหัวกรดเกลือ di-ผับ/เลาจน์ คคลอไรด์hexa-ผับ/เลาจน์ โซลูชันไฮดรอกไซด์ tetrabutylammonium 1 M น้ำแข็งซื้อน้ำกรด แอมโมเนีย acetate และเมทานอลจากซิก-Aldrich อควีโซลูชันทั้งหมดได้พร้อมน้ำบริสุทธิ์สูง (ความต้านทาน 18.2 M cm1) obtai

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วิธีการวิเคราะห์การกำหนด EDTA ในอาหารและสูตรพรีมิกซ์โดย HPLC-DAD ราน Chiumiento ⇑อันโตนิโอD'Aloise, ฟรานเชส Marchegiani, Valeria Melai Istituto Zooprofilattico Sperimentale dell'Abruzzo อีเดลโมลีเซ, นำแสดงโดยอี Bromatologia Residui - Campo Boario 1, 64100 Teramo, อาบรุซโซ, อิตาลีข้อมูลบทความประวัติศาสตร์บทความที่ได้รับ24 กรกฎาคม 2014 ที่ได้รับในรูปแบบปรับปรุง 25 พฤศจิกายน 2014 ได้รับการยอมรับ 29 พฤศจิกายน 2014 พร้อมให้บริการออนไลน์ 6 ธันวาคม 2014 คำสำคัญ: ฟีดความปลอดภัย2002/657 / EC ตรวจสอบคอมเพล็กซ์EDTA โคไอออนคู่นามธรรมวิธีการวิเคราะห์ที่ง่ายสำหรับการกำหนดปริมาณของกรด Ethylenediaminetetraacetic (EDTA) ในอาหารและสูตรพรีมิกซ์ได้รับการพัฒนาและตรวจสอบ วิธีการที่เกี่ยวข้องกับการสกัดด้วยนักการแก้ปัญหาที่เป็นกรดเฟอริกคลอไรด์เพื่อแปลงปริมาณชนิด EDTA ในตัวอย่างลงในเฟ (III) -EDTA ซับซ้อนและการตรวจสอบในภายหลังโดยไอออนจับคู่กลับเฟส High Performance Liquid Chromatography-ไดโอดตรวจจับอาร์เรย์(IP-RP-HPLC-DAD) การตรวจสอบขั้นตอนที่แข็งแกร่งที่ได้ดำเนินการตามการตัดสินใจ 2002/657 / EC ที่ความเข้มข้นตั้งแต่ 25-100 มิลลิกรัม KG1 ตัวอย่าง กลับคืนดี(85.6-92.8%) ได้รับ; การทำซ้ำของวิธีการที่อยู่ในช่วงของ 1.3-8.0% โดยเป็นสื่อกลางความแม่นยำตั้งแต่6.0% ถึง 8.6% ทั้งของพวกเขาแสดงเป็นส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานสัมพัทธ์ (RSD). ไม่มีสายพันธุ์รบกวนขัดขวางการตรวจสอบตรงไปตรงมาของ EDTA ดังนั้นวิธีการที่นำเสนอสามารถจะนำมาใช้สำหรับการวิเคราะห์ประจำที่มีประสิทธิภาพและรวดเร็วของผลิตภัณฑ์สำหรับปศุสัตว์. 2014 เอลส์ จำกัด สงวนลิขสิทธิ์. 1 บทนำกรด Ethylenediaminetetraacetic (EDTA) มีการใช้อย่างแพร่หลายในห้องปฏิบัติการหลายแห่งและประยุกต์ใช้ในอุตสาหกรรม: มันเป็นไม่มีสีกรด aminopolycarboxylic ของแข็งเล็กน้อยละลายในน้ำ (500 มก. L1, 25 C, 1 บรรยากาศ) และมันมักจะผลิตในรูปแบบของหลาย เกลือ, Disodium EDTA บ่อยและแคลเซียม disodium EDTA มันสำคัญเป็นเพราะความสามารถในการทำหน้าที่เป็น '' หกฟัน '' แกนด์สำหรับจำนวนกว้างของโลหะเช่นEDTA sequesters ไพเพอร์ที่มีการเกิดปฏิกิริยาลดลงหลังจากที่มีผลผูกพัน. EDTA ถูกนำมาใช้เป็นสารคีเลตในด้านต่างๆใน ยาและอุตสาหกรรมโลหะจะป้องกันไม่ให้การดำเนินการเร่งปฏิกิริยาของโลหะ ในอุตสาหกรรมผงซักฟอก, EDTA ใช้เพื่อลดน้ำแข็งโดยมีผลผูกพันCa (II) และแมกนีเซียม (II) ซึ่งไม่ได้เกิดการตกตะกอนอีกต่อไปเป็นคาร์บอเนตที่อาจเป็นอุปสรรคต่อการดำเนินการที่มีประสิทธิภาพของผลิตภัณฑ์ผงซักฟอก ในอุตสาหกรรมอาหาร, EDTA จะถูกเพิ่มเป็นโคลงที่กล่าวคือเพื่อป้องกันการเปลี่ยนสีออกซิเดชันในขณะที่อ่อนนุ่มเครื่องดื่มที่มีส่วนผสมของวิตามินซีและโซเดียมเบนโซเอ, EDTA ลดการก่อตัวของเบนซีน(สารก่อมะเร็ง) (อาหาร 2006 Nowack และ VanBriesen 2005) ในสหภาพยุโรป (EU), การใช้ EDTA เป็นสารเติมแต่งอาหารที่ถูกควบคุมโดยกฎระเบียบ1333/2008 / EC ซึ่งจะช่วยให้การแสดงตนเพียงในประเภทอาหารไม่กี่; ตรงกันข้ามการออกกฎหมายของสหภาพยุโรปไม่ได้อนุมัติการใช้ EDTA เป็นอาหารสารเติมแต่งสำหรับปศุสัตว์ ในหลักสูตรของการเลี้ยงสัตว์ 'ฟีดวัสดุ' หมายถึงผลิตภัณฑ์ต่างๆจากพืชหรือสัตว์ผลิตภัณฑ์ที่ได้จากการประมวลผลอุตสาหกรรมมันและสารอินทรีย์หรืออนินทรีหรือไม่ที่มีสารเติมแต่งไว้สำหรับใช้ในอาหารสัตว์ในช่องปากโดยตรงเป็นเช่นนี้หรือหลังจากการประมวลผลในการเตรียมสารประกอบฟีด. ฟีดสารประกอบคือการผสมผสานจากวัตถุดิบต่างๆและสารเติมแต่งที่มีส่วนผสมหลักมักจะมีข้าวโพดข้าวฟ่างข้าวโอ๊ตข้าวบาร์เลย์ฯลฯ สารประกอบฟีดยังอาจรวมถึง premixes ประกอบด้วยส่วนผสมของไมโครเช่นวิตามิน, เกลือแร่, สารกันบูดสารเคมียาปฏิชีวนะผลิตภัณฑ์หมักกับสารที่ใช้เป็นสายการบินซึ่งร่วมกันมั่นใจว่าปริมาณของแนะนำที่ระดับของสารอาหารที่จำเป็นให้กับสัตว์ ในบริบทที่ฟีดความปลอดภัยได้รับความสนใจเพิ่มขึ้นในชุมชนวิทยาศาสตร์เพื่อปรับให้เข้ากับประเด็นด้านจริยธรรมและเพื่อให้มั่นใจว่าอุปทานของอาหารเพื่อสุขภาพที่ได้จากสัตว์ที่เหมาะสมสำหรับการบริโภคของมนุษย์ ในอุตสาหกรรมอาหาร, EDTA และอนุพันธ์เชื่อว่าจะป้องกันไม่ให้โรคintestina1 แบคทีเรียของสุกรในขณะที่ยังเพิ่มผลกระทบของการใช้ยาปฏิชีวนะกับการเจ็บป่วยดังกล่าว นอกจากนี้ยังดูเหมือนว่าจะได้รับอย่างเต็มที่ไม่เป็นอันตรายต่อสิ่งมีชีวิตสัตว์ (Hutas 2013). EDTA ใบหน้ายังปัญหาคุณภาพเนื้อลูกวัวที่บันทึกไว้ในวรรณคดี(Pommier, เอฟ, PassilléและGariépy, 1995): หนึ่งในการพิจารณาค่าพารามิเตอร์สำหรับการประเมินผลที่มีคุณภาพเป็นสีของเนื้อเพราะมันเป็นที่ถกเถียงกันอยู่ว่าลูกวัวจากนมลูกโคที่เลี้ยง (สีขาว) มีมากขึ้นรสชาติกลั่นกว่าเนื้อลูกวัวที่ถูกกว่าจากน่องเม็ดเลี้ยง(สีแดง) ความเป็นไปได้ทางที่จะผลิตเนื้อลูกวัวสีขาวที่มีคุณค่ามากขึ้นคือการ จำกัด พร้อมของเหล็กในอาหารเพื่อที่จะลดการสะสมของเม็ดสีในกล้ามเนื้อและการใช้สารคีเลตเช่น Ca-EDTA ได้รับรายงานจะส่งผลให้กล้ามเนื้อเบา สี. ในฐานะที่แล้วกล่าวถึงการปรากฏตัวภายใน EDTA ในอาหารของสหภาพยุโรปจะต้องมีการยกย่องว่าเป็นผลมาจากการกระทำที่หลอกลวงนั้น ขณะที่ในสหรัฐได้มีไว้สำหรับการใช้งานในจำนวนไม่เกิน 240 มก. L1 http://dx.doi.org/10.1016/j.foodchem.2014.11.159 0308-8146 / 2014 เอลส์ จำกัด สงวนลิขสิทธิ์ผู้เขียนที่สอดคล้องกัน⇑ Tel .: [phone]. อีเมล์: [e-mail] (เอฟ Chiumiento). เคมีอาหาร 175 (2015) 452-456 รายการเนื้อหาที่มีอยู่ใน ScienceDirect เคมีอาหารวารสารหน้าแรก: www.elsevier.com/ ค้นหา / foodchem ในผลิตภัณฑ์สำเร็จรูป ที่ดีที่สุดของความรู้ของเราไม่มีการตรวจสอบวิธีการสำหรับการกำหนด EDTA ในอาหารและสูตรพรีมิกซ์ที่มีอยู่ในวรรณคดีแม้ว่าหลายวิธีที่ถูกนำมาใช้สำหรับการฝึกอบรมที่แตกต่างกัน: RP-HPLC (Kemmei, ดั่งยามาโมโตะอิโนอุเอะและเช็ก, 2013; Perez-รุยซ์ MartinezLozano, และการ์เซียมาร์ติเน 2008; Sillanpääและ Sihvonen, 1997), ก๊าซโค (Retho และ Diep, 1989), ไอออนโค(Krokidis, Megoulas และ Koupparis 2005), อิเล็กฝอย(Laamanen, มาลีและ Matilainen, 2005) และของเหลวโคควบคู่มวลสาร (กินและ Reemtsma 2007). การศึกษาที่นำเสนอในต้นฉบับนี้ให้ตรวจสอบวิธีการที่มีประสิทธิภาพการกำหนดกิจวัตรประจำวันอย่างรวดเร็วและเรียบง่ายของEDTA ในอาหารและสูตรพรีมิกซ์, ผ่านขั้นตอนตามในไอออนจับคู่กลับเฟสHigh-Performance Liquid Chromatography 'และไดโอดอาร์เรย์การตรวจสอบ(IP-RP-HPLC-DAD) วิธีการใช้ประโยชน์จากความสามารถในการรู้จักกันดีของ EDTA ในรูปแบบมากที่สุด thermodynamically คอมเพล็กซ์มั่นคงกับเฟ (III) ไอออน (Sillanpää, Kokkonen และ Sihvonen, 1995): ยิ่งขับเป็นสิ่งจำเป็นเพราะEDTA ฟรีไม่ได้อย่างยิ่งในการดูดซับรังสียูวี . Vis ภูมิภาคในเงื่อนไขการทดลองที่เลือกรบกวนไม่มีเนื่องจากการไอออนโลหะอื่นๆ ที่มีอยู่: ส่วนเกินของเฟ (III) ไอออน (คลอสารละลาย) จะถูกเพิ่มในกลุ่มตัวอย่างในการสั่งซื้อเพื่อให้บรรลุปริมาณการแปลงชนิด EDTA เป็นไปได้หลาย ลงในเฟ(III) -complex. สกัดตัวอย่างจะต้องดำเนินการในสภาพที่เป็นกรด(pH 3) เพื่อหลีกเลี่ยงเฟ (III) การเร่งรัดเป็นไฮดรอกไซเฟอริก(Sillanpää et al., 1995) อันที่จริงค่า pH สำหรับคอมเพล็กซ์เหล็กก่อตัวเป็นสิ่งสำคัญสำหรับประสิทธิภาพขับ(เจิ้งเหอวัตสัน Tettey และเคลเมนท์2008): มีความสัมพันธ์ที่เกินความจริงระหว่างพีเอชเคล็อกที่ให้ข้อมูลเกี่ยวกับขั้นต่ำค่าpH ที่ต้องการที่จะได้รับที่น่าพอใจ ขับ สำหรับ EDTA นี้ขั้นต่ำค่าพีเอชเฟ(III) ต่ำกว่า 2.0 ในขณะที่สำหรับเฟ (II) มันเป็นที่สูงขึ้น(> 5.0) (De Luca, Dantas และ Esplugas 2014). หลังจากเติม FeCl3 โซลูชั่นตัวอย่างที่ถูกเก็บไว้ใน ในที่มืดเพื่อป้องกันการเสื่อมสภาพแสงของเฟ(III) -complex, และเพื่อส่งเสริมการแก้ปัญหาตัวอย่างก่อตัวของมันถูกความร้อนที่70 องศาเซลเซียส± 2 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาที. ขั้นตอนสุดท้ายเป็นสิ่งจำเป็นเพราะแม้ว่าเฟ (III) ที่ซับซ้อนเป็นได้รับการสนับสนุนมากกว่า thermodynamically เชิงซ้อนโลหะอื่น ๆบางส่วนของพวกเขาเป็นที่ชื่นชอบมากขึ้น kinetically (Nowack รี, Hilger, และ Sigg, 1996); จึงดูเหมือนว่ามันจะแนะนำให้ความร้อนตัวอย่างในการเร่งกา