MethodsMaterials and microorganismC

Methods
Materials and microorganism
Coniferyl aldehyde (≥98%), ferulic acid (≥99%), vanillin
(≥99%), 4-hydroxybenzoic acid (≥99%), coniferyl alcohol
(≥98%), vanillyl alcohol (≥98%), and vanillic acid (≥97%)
(Figure 1) were purchased from Sigma-Aldrich (Steinheim,
Germany). Gluconacetobacter xylinus ATCC 23770 was
obtained from the American Type Culture Collection
(Manassas, VA, USA).
Preparation of stock solution of phenolic compounds
The influence of the phenolic compounds was evaluated
with different concentrations ranging from 0.5 to 2 mM
for coniferyl aldehyde and ferulic acid, and from 0.5 to
10 mM for vanillin and 4-hydroxybenzoic acid. The stock
solution was prepared using Milli-Q water (Millipore,
Billerica, MA) and the pH was then adjusted to 5.0 with
aqueous solutions of sulfuric acid or sodium hydroxide.
The concentration of the stock solution was six times
higher than the maximum concentration of the phenolic
compound in the medium. The stock solutions with
coniferyl aldehyde and vanillin were stirred overnight in the
dark to achieve complete dissolution. For 4-hydroxybenzoic
acid and ferulic acid, a solution of sodium hydroxide was
used to adjust the pH of the solution to 5.0, which would
help the dissolution of these two compounds. After
complete dissolution, an aqueous solution of sulfuric acid
was used to adjust the pH to 5.0.
Cultivation of G. xylinus
Liquid seed medium contained 3.0 g/L yeast extract
(Merck, Germany), 5.0 g/L tryptone (BD, France), 25 g/L
glucose (Fisher Scientific, UK) and Milli-Q water. The pH
of all media was adjusted to 5.0. Culture medium was
prepared by dissolving 0.75 g glucose, 0.15 g tryptone and
0.09 g yeast extract in 23.2 mL Milli-Q water.
A liquid culture for inoculum was prepared by transferring
a bacterial colony grown on agar seed medium (liquid
seed medium with 18 g/L agar) into 100 mL of the liquid
seed medium, which was then incubated at 30°C with agitation.
A cell suspension of 1.8 mL of the inoculum culture
was introduced into a 100 mL Erlenmeyer flask containing
23.2 mL of the culture medium. The culture was then
incubated at 30°C with agitation for one day. Then, 5 mL of
a sterile-filtered (0.2 μm syringe-driven Millex-GN filter
unit from Millipore) aqueous stock solution containing the
model compound were added to the culture medium. A
reference culture without inhibitor was prepared by adding
5 mL autoclaved Milli-Q water instead of the inhibitor
solution. A control culture with inhibitor but without
bacterial inoculum was prepared as well. The 100-mL
Erlenmeyer flasks containing 30 mL of culture medium
were then incubated statically at 30°C for 7 days. Samples
(2 mL) were withdrawn aseptically from each flask every
day during the cultivation.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วิธีการวัสดุและจุลินทรีย์แอลดีไฮด์ Coniferyl (≥98%), กรด ferulic (≥99%) วานิลลิน(≥99%), 4-hydroxybenzoic กรด (≥99%) แอลกอฮอล์ coniferyl(≥98%), vanillyl แอลกอฮอล์ (≥98%), และกรด vanillic (≥97%)(รูปที่ 1) ซื้อจากซิก-Aldrich (Steinheimเยอรมนี) Gluconacetobacter xylinus ATCC 23770 ถูกได้จากการรวบรวมวัฒนธรรมชนิดอเมริกัน(มานาสซาส VA สหรัฐอเมริกา)เตรียมของหุ้นม่อฮ่อมอิทธิพลของสารฟีนอถูกประเมินมีความเข้มข้นแตกต่างกันตั้งแต่ 0.5 ถึง 2 มม.coniferyl แอลดีไฮด์และกรด ferulic และ 0.5 ไป10 มม.สำหรับกรดวานิลลินและ 4-hydroxybenzoic หุ้นโซลูชันที่เตรียมโดยใช้น้ำ Q (มากBillerica, MA) และ pH ถูกปรับไป 5.0 ด้วยโซลูชั่นอควีของกรดกำมะถันโซเดียมไฮดรอกไซด์ความเข้มข้นของการแก้ปัญหาสินค้าคงคลังได้ 6 ครั้งสูงกว่าความเข้มข้นสูงสุดของการฟีนอในการผสม โซลูชั่นหุ้นด้วยแอลดีไฮด์ coniferyl และวานิลลินได้กวนข้ามคืนในการมืดยุบทำให้เกิด สำหรับ 4-hydroxybenzoicกรดและกรด ferulic โซลูชั่นของโซเดียมไฮดรอกไซด์ได้ใช้ปรับ pH ของโซลูชันการ 5.0 ซึ่งจะช่วยการยุบของสารประกอบเหล่านี้สอง หลังจากยุบเสร็จสมบูรณ์ การละลายของกรดกำมะถันถูกใช้เพื่อปรับ pH 5.0ปลูก xylinus กรัมเมล็ดของเหลวปานกลางประกอบด้วยสารสกัดจากยีสต์ 3.0 g/LTryptone (เมอร์ค เยอรมนี), 5.0 g/L (BD ฝรั่งเศส), 25 g/Lน้ำตาลกลูโคส (Fisher วิทยาศาสตร์ UK) และน้ำ Q PHสื่อทั้งหมดถูกปรับให้ 5.0 ถูกสื่อวัฒนธรรมโดยยุบกลูโคส 0.75 g, tryptone 0.15 g และ0.09 g ยีสต์สกัดในมล 23.2 Q น้ำวัฒนธรรมสภาพคล่องสำหรับ inoculum ถูกเตรียม ด้วยการโอนย้ายโคโลนีแบคทีเรียที่มีปลูกใน agar เมล็ดปานกลาง (ของเหลวเมล็ดกลางกับ agar 18 g/L ใน 100 mL ของของเหลวปานกลางเมล็ด ซึ่งเป็น incubated แล้วที่ 30° C มีอาการกังวลต่อ1.8 mL ของวัฒนธรรม inoculum ระงับเซลล์ถูกนำเข้าสู่การ 100 มล Erlenmeyer หนาวประกอบด้วยมล 23.2 ของสื่อวัฒนธรรม วัฒนธรรมถูกแล้วincubated ที่ 30° C มีอาการกังวลต่อหนึ่งวัน แล้ว 5 mL ของใส่กรอง (0.2 μm ขับเคลื่อนเข็ม Millex GN ตัวหน่วยจากมาก) ละลายหุ้นที่ประกอบด้วยการมีเพิ่มรุ่นผสมปานกลางวัฒนธรรม Aอ้างอิงวัฒนธรรมไม่ มีผลที่เตรียม โดยการเพิ่ม5 mL autoclaved Q น้ำแทนผลการการแก้ปัญหา วัฒนธรรมควบคุม มีผล แต่ไม่มีเตรียม inoculum แบคทีเรียเช่น มล. 100นำ Erlenmeyer ประกอบด้วย 30 mL ของสื่อวัฒนธรรมได้แล้ว incubated ฟิกแบบคงที่ 30° C 7 วัน ตัวอย่าง(2 mL) ถูกถอน aseptically จากหนาวละทุกวันในระหว่างการเพาะปลูก

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วิธีการ
วัสดุและจุลินทรีย์
coniferyl ลดีไฮด์ (≥98%), กรด ferulic (≥99%), วานิล
(≥99%), 4-hydroxybenzoic กรด (≥99%), coniferyl เครื่องดื่มแอลกอฮอล์
(≥98%), vanillyl เครื่องดื่มแอลกอฮอล์ (≥98 %) และกรด vanillic (≥97%)
(รูปที่ 1) ที่ซื้อมาจาก บริษัท Sigma-Aldrich (Steinheim,
เยอรมนี) Gluconacetobacter xylinus ATCC 23770 ได้
รับจากอเมริกันประเภทวัฒนธรรมเก็บ
(นาสซาส, VA, USA)
เตรียมของการแก้ปัญหาสต็อกของฟีนอลสาร
อิทธิพลของสารประกอบฟีนอลที่ได้รับการประเมิน
ที่มีความเข้มข้นแตกต่างกันตั้งแต่ 0.5-2 มิลลิ
สำหรับก้น coniferyl และกรด ferulic และจาก 0.5 ถึง
10 มมวานิลและ 4-hydroxybenzoic กรด หุ้น
โซลูชั่นที่ได้รับการจัดทำขึ้นโดยใช้พัน-Q น้ำ (ค
บิลเลริกา, MA) และพีเอชมีการปรับไปแล้ว 5.0 กับ
สารละลายกรดซัลฟูริกหรือโซเดียมไฮดรอกไซ
เข้มข้นของสารละลายหุ้นเป็นหกครั้ง
สูงกว่าความเข้มข้นสูงสุดของ ฟีนอล
สารในระยะกลาง การแก้ปัญหาสต็อกที่มี
ก้น coniferyl และวานิลถูกขยับค้างคืนใน
ที่มืดเพื่อให้บรรลุการสลายตัวสมบูรณ์ 4-hydroxybenzoic
กรดและกรด ferulic, การแก้ปัญหาของโซเดียมไฮดรอกไซถูก
นำมาใช้ในการปรับค่า pH ของการแก้ปัญหาถึง 5.0 ซึ่งจะ
ช่วยให้การสลายตัวของสารทั้งสอง หลังจาก
การสลายตัวสมบูรณ์สารละลายของกรดกำมะถัน
ถูกใช้ในการปรับค่า pH เป็น 5.0
การเพาะปลูกของ G. xylinus
กลางเมล็ดมีสภาพคล่อง 3.0 กรัม / ลิตรสารสกัดจากยีสต์
(เมอร์ค, เยอรมนี), 5.0 กรัม / ลิตรทริปโตน (BD, ฝรั่งเศส) 25 กรัม / ลิตร
กลูโคส (Fisher Scientific สหราชอาณาจักร) และพัน-Q น้ำ ค่า pH
ของทุกสื่อมีการปรับถึง 5.0 อาหารเลี้ยงเชื้อได้รับการ
จัดทำขึ้นโดยการละลาย 0.75 กรัมกลูโคส 0.15 กรัมทริปโตนและ
0.09 กรัมสารสกัดจากยีสต์ใน 23.2 มิลลิลิตรพัน-Q น้ำ
อาหารเหลวสำหรับเชื้อได้รับการจัดทำขึ้นโดยการโอน
เป็นอาณานิคมของแบคทีเรียที่ปลูกในกลางเมล็ดวุ้น (ของเหลว
กลางเมล็ดมี 18 กรัม / ลิตรวุ้น) เป็น 100 มิลลิลิตรของของเหลว
ขนาดกลางเมล็ดซึ่งถูกบ่มแล้วที่ 30 ° C กับกวน
เซลล์แขวนลอย 1.8 มิลลิลิตรของวัฒนธรรมเชื้อ
ถูกนำเข้ามาในขวด 100 มลรูปกรวยที่มี
23.2 มิลลิลิตรของกลางวัฒนธรรม วัฒนธรรมที่ได้รับแล้ว
บ่มที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสมีความปั่นป่วนสำหรับหนึ่งวัน จากนั้น 5 มิลลิลิตร
(0.2 ไมโครเมตรเข็มฉีดยาที่ขับเคลื่อนด้วยตัวกรอง Millex-GN หมันกรอง
จากหน่วยค) การแก้ปัญหาสต็อกน้ำที่มี
สารรูปแบบถูกเพิ่มเข้าไปในอาหารเลี้ยงเชื้อ
วัฒนธรรมการอ้างอิงโดยไม่ต้องยับยั้งได้รับการจัดทำขึ้นโดยการเพิ่ม
5 มิลลิลิตรนึ่งฆ่าเชื้อน้ำพัน-Q แทนการยับยั้ง
การแก้ปัญหา วัฒนธรรมการควบคุมด้วย แต่ไม่ยับยั้ง
เชื้อแบคทีเรียที่ได้รับการจัดเตรียมไว้เป็นอย่างดี 100 มิลลิลิตร
ขวดรูปกรวยที่มีขนาด 30 ml ของกลางวัฒนธรรม
ถูกบ่มแล้วแบบคงที่ที่ 30 ° C เป็นเวลา 7 วัน ตัวอย่าง
(2 มิลลิลิตร) ถูกถอนออกจากกันในขวดทดลองขวดทุก
วันในช่วงการเพาะปลูก

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วิธีการวัสดุและจุลินทรีย์

โคนิเฟอริลแอลดีไฮด์ ( ≥ 98% ) , กรด ferulic ( ≥ 99% ) ยาสีฟัน
( ≥ 99% ) 4-hydroxybenzoic acid ( ≥ 99% ) โคนิเฟอริลแอลกอฮอล์
( ≥ 98% ) , vanillyl แอลกอฮอล์ ( ≥ 98% ) , vanillic acid ( ≥ 97% )
( รูปที่ 1 ) ซื้อจาก ซิกม่า Aldrich ( steinheim
, เยอรมนี ) gluconacetobacter xylinus ATCC 23770 คือ
ที่ได้จากชนิดของอเมริกันวัฒนธรรมของสะสม
( Manassas , VA , USA ) .
การเตรียม Stock สารละลายของสารประกอบฟีนอล
อิทธิพลของสารประกอบฟีนอลิกที่ประเมิน
ที่มีความเข้มข้นแตกต่างกันตั้งแต่ 0.5 ถึง 2 มม.
สำหรับ aldehydes โคนิเฟอริลและกรด ferulic , และ 0.5 mm
10 วานิลลิน 4-hydroxybenzoic และกรด หุ้น
สารละลายเตรียมไว้ใช้ milli-q น้ำ ( มิลลิ ,
โตเกียวมา ) และปรับ pH 5.0 กับ
สารละลายของกรด หรือ โซเดียม ไฮดรอกไซด์ ความเข้มข้นของโซลูชั่นหุ้น

หกครั้งสูงกว่าความเข้มข้นสูงสุดของสารประกอบฟีนอลิก
ในระดับปานกลาง หุ้นโซลูชั่นกับวานิลถูกกวนและ aldehydes โคนิเฟอริล

มืดเพื่อให้บรรลุค้างคืนในการละลายที่สมบูรณ์ สำหรับกรด 4-hydroxybenzoic
และกรด ferulic , สารละลายของโซเดียมไฮดรอกไซด์เป็น
ใช้ในการปรับ pH ของสารละลาย 5.0 ซึ่งจะ
ช่วยการละลายของทั้งสองสาร หลังจาก
ยุบสมบูรณ์ , สารละลายกรดซัลฟูริก
ใช้ปรับ pH 5.0 กรัม xylinus

เพาะเมล็ดขนาดกลางบรรจุของเหลว 3.0 กรัม / ลิตร
ยีสต์สกัด ( Merck , เยอรมัน ) , 5.0 กรัม / ลิตร ทริพโทน ( BD , ฝรั่งเศส ) , 25 กรัม / ลิตร
กลูโคส ( ฟิชเชอร์ทางวิทยาศาสตร์ milli-q , UK ) และน้ำ pH
สื่อทั้งหมดคือปรับ 5.0 . อาหารเลี้ยงเชื้อคือ
เตรียมโดยละลายกลูโคส 0.75 กรัม 0.15 กรัม และสารสกัดจากยีสต์ทริพโทน
0.09 กรัมในน้ำ milli-q 23.2 มิลลิลิตร .
วัฒนธรรมเหลวที่เตรียมโดยการถ่ายทอดเชื้อแบคทีเรียโต
อาณานิคมบนอาหารวุ้น ( กลางเมล็ดเมล็ดของเหลว
18 กรัม / ลิตรเป็นวุ้น ) 100 ml ของเมล็ดปานกลาง เหลว
ซึ่งก็บ่มที่อุณหภูมิ 30 องศา C
ด้วยการกวนเซลล์แขวนลอยของ 1.8 มิลลิลิตร เพาะเชื้อ
ใช้เป็น 100 มล. ขวด
23.2 มิลลิลิตร เออร์เลนเมเยอร์ ( วัฒนธรรม ) วัฒนธรรมและบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศา C
ด้วยการกวนสำหรับ 1 วัน จากนั้น 5 ml
ทำความสะอาดกรอง ( 0.2 μ M ฉีดยาขับหน่วยกรองจาก GN
millex มิลลิ ) สารละลายโซลูชั่นหุ้นที่มีรูปแบบผสม
ถูกวัฒนธรรมสื่อ
เป็นวัฒนธรรมการอ้างอิงโดยไม่ยับยั้ง เตรียมเพิ่ม
5 ml milli-q สังเคราะห์น้ำแทนที่จะใช้
โซลูชั่น วัฒนธรรมควบคุมยับยั้ง แต่ไม่มี
แบคทีเรียเชื้อที่เตรียมไว้เป็นอย่างดี 100 ml ขวดบรรจุ 30 มล. เออร์เลนเมเยอร์

อาหารเลี้ยงเชื้อแล้วบ่มด้วยอุณหภูมิ 30 องศา C เป็นเวลา 7 วัน ตัวอย่าง
( 2 มล. ) ถูกถอน aseptically จากแต่ละขวดทุก
วันในช่วงการเพาะปลูก