BOX-PCR typing. BOX-PCR fingerprint

BOX-PCR typing. BOX-PCR fingerprinting was carried out using one primer of sequence 5'-CTA CGG CAA GGC GAC GCT GACG-3'. Amplification was carried out with a 10 × PCR buffer (100 mM Tris-HCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 100 mM KCl, 0.5% Nonidet P40, 0.5% Tween 20) in a total reaction of 50 μl containing 2.5 mM dNTP, 20 mM MgCl2, 100 pmol of primer, 2 μl of genomic template DNA, and 1 unit of Taq DNA polymerase (DNA Gdansk, Poland).BOX-PCR typing was carried out according to Dawson etal. [7] using a PTC-100 Programmable Thermo Controller (MJ Research) according to the following procedure: initial denaturation at 94°C for 5 min followed by 35 cycles of PCR consisting of denaturation at 94°C for 1 min, annealing at 48°C for 2 min, and extension at 72°C for 2 min; in the last cycle, the extension time was 5 min. The PCR product
(10 μl) was analyzed using a 2% agarose gel in the TBE
buffer (5.4 g l–1 Tris, 2.75 g l–1 Boric acid, 0.37 g l–1 EDTA
(pH 8.0)) and photographed under a UV light. The size of
the products was analyzed using a M100–1000 bp ladder
MW size marker (DNA Gdansk, Poland).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

พิมพ์กล่อง PCR ลายพิมพ์กล่อง PCR ดำเนินการใช้รองพื้นหนึ่งของลำดับ 5'-CTA CGG CAA GGC GAC GCT GACG-3 ขยายดำเนินกับบัฟเฟอร์ PCR 10 × (100 มม.ทริ-HCl, 1 มม. DTT, 0.1 mM EDTA, 100 mM KCl, Nonidet P40, 0.5% 0.5% แต่ 20) ในปฏิกิริยาทั้งหมดของ 50 μl มี dNTP 2.5 มม. 20 มม. MgCl2, pmol 100 ของไพรเมอร์ μl 2 ของจีโนมของแม่ดีเอ็นเอ Taq DNA พอลิเมอเรส (DNA กดันสก์ โปแลนด์) 1 หน่วย พิมพ์กล่อง PCR ดำเนินตามดอว์สัน etal [7] ใช้ PTC-100 ตั้งเทอร์โมคอนโทรลเลอร์ (MJ วิจัย) ตามขั้นตอนต่อไปนี้: denaturation เริ่มต้นที่ 94 ° C 5 นาทีตาม ด้วยรอบ 35 ของ PCR ประกอบด้วย denaturation ที่ 94 ° C เป็นเวลา 1 นาที หลอม 48 ° c 2 นาที และส่วนขยายที่ 72 ° C เป็นเวลา 2 นาที ในรอบครั้งสุดท้าย ในช่วงเวลาเป็น 5 นาที ผลิตภัณฑ์ PCR(10 μl) ถูกวิเคราะห์โดยใช้ 2% agarose เจใน TBEบัฟเฟอร์ (ก. 5.4 l-1 ทริ l-1 2.75 g เป็นกรด EDTA l-1 0.37 กรัม(pH 8.0)) และถ่ายภาพภายใต้แสงยูวี ขนาดของผลิตภัณฑ์ถูกวิเคราะห์โดยใช้บันได bp M100 – 1000MW ขนาดเครื่องหมาย (DNA กดันสก์ โปแลนด์)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

พิมพ์ BOX-PCR BOX-PCR พิมพ์ลายนิ้วมือได้ดำเนินการอย่างใดอย่างหนึ่งโดยใช้ไพรเมอร์ของลำดับ 5'-CTA CGG CAA GGC GAC GCT GACG-3 ' ขยายได้ดำเนินการกับ 10 × PCR บัฟเฟอร์ (100 มิลลิเมตร Tris-HCl 1 มิ DTT 0.1 มิลลิ EDTA, 100 มิลลิเมตร KCl, 0.5% P40 Nonidet, 0.5% Tween 20) ในปฏิกิริยารวม 50 ไมโครลิตรที่มีขนาด 2.5 มม dNTP , 20 มิลลิเมตร MgCl2 100 pmol ของไพรเมอร์ 2 ไมโครลิตรของดีเอ็นเอแม่แบบจีโนมและ 1 หน่วย Taq DNA Polymerase (DNA Gdansk, โปแลนด์) .BOX-PCR พิมพ์ได้ดำเนินการตามที่ดอว์สัน Etal [7] โดยใช้ PTC-100 Programmable Thermo Controller (MJ) การวิจัยตามขั้นตอนต่อไปนี้: denaturation เริ่มต้นที่ 94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาทีตามด้วย 35 รอบของ PCR ซึ่งประกอบด้วย denaturation ที่ 94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 นาทีหลอมที่ 48 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 นาทีและส่วนขยายที่ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 นาที; ในรอบที่ผ่านมาขยายระยะเวลาเป็นเวลา 5 นาที ผลิตภัณฑ์ PCR
(10 ไมโครลิตร) คือการวิเคราะห์โดยใช้เจล agarose 2% ใน TBE
บัฟเฟอร์ (5.4 GL-1 Tris, 2.75 GL-1 กรดบอริก, 0.37 GL-1 EDTA
(pH 8.0)) และถ่ายภาพภายใต้แสงยูวี ขนาดของ
ผลิตภัณฑ์ได้รับการวิเคราะห์โดยใช้ M100-1000 BP บันได
เมกะวัตต์เครื่องหมายขนาด (DNA Gdansk, โปแลนด์)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

box-pcr พิมพ์ box-pcr พิมพ์ลายนิ้วมือได้ดําเนินการใช้รองพื้นของลำดับ 5 " - CTA CGG caa ggc แก๊ก GCT gacg-3 " ( ครั้งนี้ด้วย 10 × PCR buffer ( 100 มม. หรือ HCl 1 มม. ส่วน 0.1 mM EDTA 100 mM KCl 0.5% nonidet พี 0.5% Tween 20 ) ในปฏิกิริยารวม 50 μ L ที่มี dntp 2.5 มม. , 20 มม. ชุด 100 pmol ไพรเมอร์ 2 μล. จีโนมดีเอ็นเอแม่แบบ และ 1 หน่วยของแทคดีเอ็นเอพอลิเมอเรส ( DNA Gdansk , โปแลนด์ ) box-pcr พิมพ์ออกมาตามดอว์สันคณะ . [ 7 ] การใช้โปรแกรม ptc-100 เทอร์โมควบคุม ( วิจัย MJ ) ตามขั้นตอนต่อไปนี้ : เริ่มต้นที่ 94 ° C ( 5 นาทีตามด้วย 35 รอบของ PCR ประกอบด้วย 94 ° C ( ที่ 1 นาทีที่ 48 องศา C อบ 2 นาที และนามสกุลที่ 72 ° C เป็นเวลา 2 นาที ; ในรอบสุดท้าย ขยายระยะเวลา 5 นาที โดยผลิตภัณฑ์( 10 μ L ) วิเคราะห์ข้อมูลโดยใช้เจล ( 2 % ใน ทีบีบัฟเฟอร์ ( 5.4 กรัมและ 1 กรัมต่อลิตร , 1 ลิตร 2.75 ( boric acid 0.37 กรัมลิตรและ 1 ตามลำดับ( pH 8.0 ) และถ่ายภาพภายใต้แสงยูวี . ขนาดของผลิตภัณฑ์ถูกวิเคราะห์โดยใช้ M100 – 1 , 000 BP บันไดเครื่องหมายขนาด MW ( DNA Gdansk , โปแลนด์ )