ExperimentalMaterials and reagentsC

Experimental
Materials and reagents
Coproporphyrin I, coproporphyrin III, uroporphyrin
I octamethyl ester and uroporphyrin III
octamethyl ester were from Sigma Chemical Co.,
Poole, Dorset, U.K. The methyl esters were hydrolysed
in 25% (w/v) HCI. A mixture of type I 8-, 7-,
6-, 5- and 4-carboxyporphyrins was from Porphyrin
Products, Logan, UT, U.S.A. Type III hepta- and
hexa-carboxyporphyrins, a mixture of type I and
type III pentacarboxyporphyrin, and isocopro- and
de-ethylisocopro-porphyrin were isolated as methyl
esters from the faeces of a patient with PCT by the
method of Elder (1972) and were hydrolysed in 25%
(w/v) HCl.
Ammonium acetate, acetic acid, conc. HCI, and
diethyl ether were AnalaR grade from BDH
Chemicals, Poole, Dorset, U.K.
Acetonitrile was h.p.l.c. grade from Rathburn
Chemicals, Walkerburn, Peebleshire, U.K.
Sample preparation
Urine (100,ul) was injected directly on to the
column without sample pretreatment. For faeces,
0.5 g was triturated with 2 ml of conc. HCl and the
mixture was vortex-mixed wtih 6 ml of diethyl ether.
Water (6 ml) was then added and the mixture was
again vortex-mixed. After centrifugation at 10OOg
for 10min, 100,l of the aq. acid solution was
injected.
H.p.l.c.
A Varian Associates (Walnut Creek, CA, U.S.A.)
model 5000 liquid chromatograph was used. Injection
was via a Rheodyne 7125 injector fitted with
a 100,l loop. A variable-wavelength u.v. detector
(Varian UV-50) set at 404nm or an LS-3 fluorescence
detector (Perkin-Elmer, Beaconsfield, Bucks.,
U.K.) set at an excitation and an emission wavelength
of 404 and 618nm respectively was used for
detection.
The separation was carried out on columns of
dimensions 10cm x 5 mm and 25 cm x 5 mm internal
diameter packed with ODS-Hypersil [5pm spherical
silica chemically bonded with octadecylsilyl groups
(Shandon Southern, Runcorn, Cheshire, U.K.)].

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ทดลองวัสดุและ reagentsCoproporphyrin ฉัน coproporphyrin III, uroporphyrinฉัน octamethyl เอสและ uroporphyrin IIIoctamethyl เอสได้จากซิกเคมี Co.Poole ดอร์เซ็ท สหราชอาณาจักร Methyl esters ถูก hydrolysed25% (w/v) hci ส่วนผสมของชนิด I 8-- 7-6, 5 - และ 4 carboxyporphyrins ได้จาก Porphyrinผลิตภัณฑ์ โล UT สหรัฐอเมริกาพิมพ์ hepta III - และhexa-carboxyporphyrins ส่วนผสมของพิมพ์ฉัน และพิมพ์ III pentacarboxyporphyrin และ isocopro - และethylisocopro-เดอ-porphyrin ถูกแยกเป็น methylesters จาก faeces ของผู้ป่วยกับระบบโดยวิธีของพี่ (1972) และถูก hydrolysed ใน 25%(w/v) HClAcetate แอมโมเนีย กรดอะซิติก conc. hci และอีเทอร์ diethyl ได้เกรด AnalaR จาก BDHเคมีภัณฑ์ Poole ดอร์เซ็ท สหราชอาณาจักรAcetonitrile ถูกเกรด h.p.l.c. จาก Rathburnสารเคมี Walkerburn, Peebleshire สหราชอาณาจักรเตรียมตัวอย่างปัสสาวะ (100, ul) ถูกฉีดโดยตรงกับการคอลัมน์ โดยตัวอย่าง pretreatment สำหรับ faeces0.5 g ถูก triturated กับ ml 2 ของ conc. HCl และส่วนผสมที่ผสม vortex กับ ml 6 ของอีเทอร์ diethylน้ำ (6 ml) แล้วเข้ามา และมีส่วนผสมอีก vortex ผสม หลังจาก centrifugation ที่ 10OOgl aq. กรดโซลูชันได้ใน 10 นาที 100ฉีดH.p.l.c.สมาคมแล้วแต่กำหนด (วอลนัตครีก CA สหรัฐอเมริกา)ใช้รุ่น chromatograph เหลว 5000 ฉีดที่ผ่านหัวฉีดที่ Rheodyne 7125 ที่มีวน l 100 จับจับกระชับตัวแปรความยาวคลื่นชุด (แล้วแต่กำหนด UV 50) 404nm หรือ fluorescence การ LS-3เครื่องตรวจจับ (เพอร์เอลเมอ บีคอนส์ฟิลด์ Bucks.,สหราชอาณาจักร) ตั้งค่าการในการกระตุ้นและความยาวคลื่นปล่อยก๊าซ404 และ 618nm ตามลำดับใช้สำหรับตรวจสอบแยกถูกดำเนินการบนคอลัมน์ขนาด 10 ซม. x 5 มม.และ 25 ซม. x 5 มม.ที่ภายในเส้นผ่าศูนย์กลางที่เต็มไป ด้วย ODS-Hypersil [น. 5 ทรงกลมซิลิกาสารเคมีถูกผูกมัดกับกลุ่ม octadecylsilyl(แชนดอนใต้ Runcorn เชชเชอร์ สหราชอาณาจักร)]

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การทดลอง
วัสดุและสารเคมี
Coproporphyrin ผม coproporphyrin III, uroporphyrin
ฉัน octamethyl เอสเตอร์และ uroporphyrin III
เอสเตอร์ octamethyl มาจาก Sigma Chemical Co. ,
พูล, ดอร์เซ็สหราชอาณาจักรเมทิลเอสเตอร์ที่ถูกย่อยได้
ใน 25% (w / v) HCI ส่วนผสมของชนิดฉัน 8, 7,
6, 5- และ 4 carboxyporphyrins จาก Porphyrin
ผลิตภัณฑ์โลแกน, ยูทาห์สหรัฐอเมริกาประเภทที่สามและ hepta-
ซ่า-carboxyporphyrins ส่วนผสมของประเภท I และ
ชนิด III pentacarboxyporphyrin และ isocopro- และ
ยกเลิกการ ethylisocopro-porphyrin ถูกแยกเป็นเมธิล
เอสเทอจากอุจจาระของผู้ป่วยที่มี PCT โดย
วิธีการของพี่ (1972) และได้รับการย่อยได้ใน 25%
(w / v) HCl.
acetate แอมโมเนียกรดอะซิติกเข้มข้น HCI และ
อีเทอร์เป็นเกรด Analar BDH จาก
สารเคมี, พูล, ดอร์เซ็สหราชอาณาจักร
Acetonitrile เป็นเกรด HPLC จาก Rathburn
เคมีภัณฑ์ Walkerburn, Peebleshire สหราชอาณาจักร
เตรียมตัวอย่าง
ปัสสาวะ (100, UL) ถูกฉีดโดยตรงบน
คอลัมน์โดยไม่ต้องปรับสภาพตัวอย่าง สำหรับอุจจาระ
0.5 กรัมถูก triturated มี 2 มิลลิลิตรเข้มข้น HCl และ
ส่วนผสมเป็น wtih วนผสม 6 มลอีเทอร์.
น้ำ (6 ml) ถูกเพิ่มเข้ามาแล้วและส่วนผสมที่เป็น
น้ำวนผสมอีกครั้ง หลังจากการหมุนเหวี่ยงที่ 10OOg
สำหรับ 10min, 100 ลิตร AQ สารละลายกรดได้รับการ
ฉีด.
HPLC
Varian ร่วม (Walnut Creek, CA, USA)
รุ่น 5000 Chromatograph ของเหลวถูกนำมาใช้ ฉีด
ก็ผ่าน Rheodyne 7125 หัวฉีดติดตั้ง
100 ห่วงลิตร เครื่องตรวจจับรังสียูวีตัวแปรความยาวคลื่น
(Varian UV-50) ตั้งอยู่ที่ 404nm หรือเรืองแสง LS-3 ที่
ตรวจจับ (Perkin-Elmer, ทาวน์เหรียญ.,
สหราชอาณาจักร) ตั้งอยู่ที่การกระตุ้นและการปล่อยความยาวคลื่น
404 และ 618nm ตามลำดับที่ใช้สำหรับ
การตรวจสอบ.
แยกถูกดำเนินการในคอลัมน์ของ
ขนาด 10cm x 5 มิลลิเมตรและ 25 ซม. x 5 มมภายใน
เส้นผ่าศูนย์กลางเต็มไปด้วย ODS-Hypersil [17:00 ทรงกลม
ซิลิกาผูกมัดทางเคมีกับกลุ่ม octadecylsilyl
(ชานตงภาคใต้รันคอร์นเชสเชียร์สหราชอาณาจักร)]

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

coproporphyrin และวัสดุทดลองสารเคมีที่ผม coproporphyrin III , uroporphyrin
ฉัน octamethyl เอสเทอร์และ uroporphyrin 3
octamethyl เอสเทอร์จาก Sigma Chemical Co . ,
พูล , Dorset , สหราชอาณาจักรเมทิลเอสเทอร์ผ่าน
25 % ( w / v ) โดย . ส่วนผสมของประเภทที่ 8 - 7 - ,
6 - 5 - และ 4-carboxyporphyrins จากพอร์ไพริน
ผลิตภัณฑ์ โลแกน , ยูทาห์ - สหรัฐอเมริกา ประเภท III HEPTA และ
carboxyporphyrins เ ,ส่วนผสมของประเภทที่ 1 และประเภทที่ 3
-
pentacarboxyporphyrin และ isocopro เดอ ethylisocopro พอร์ไฟรินแยกเป็นเมทิลเอสเทอร์
จากอุจจาระของผู้ป่วยกับ PCT โดย
วิธี ของพี่ ( 1972 ) และยังพบใน 25 %
( w / v ) HCl .
แอมโมเนียมอะซิเตท , กรดน้ำส้ม , วท. . กรดไฮโดรคลอริก และอีเทอร์เป็น analar เกรด

bdh สารเคมี , พูล , Dorset , สหราชอาณาจักร h.p.l.c.
ไนคือคะแนนจาก rathburn
เคมีภัณฑ์ walkerburn peebleshire , อังกฤษ , ตัวอย่างการเตรียมปัสสาวะ

( 100 , UL ) ถูกฉีดโดยตรงบน
คอลัมน์โดยไม่มีการปรับสภาพตัวอย่าง . เสียเป็น triturated
0.5 กรัม , 2 ml เข้มข้น . HCl และผสมผสมกับ Vortex
6 มิลลิลิตรของอีเทอร์ .
น้ำ ( 5 ml ) แล้วเพิ่มและผสมส่วนผสม
อีกครั้งไหลผสม หลังการปั่นเหวี่ยงที่ 10oog
สำหรับวัน , 100 ,ผมของ AQ . กรดในสารละลาย


เป็นเครื่องฉีด h.p.l.c. Associates ( วอลนัตครีก , แคลิฟอร์เนีย , สหรัฐอเมริกา )
5 ของเหลวโครมาโทกราฟีแบบใช้ ฉีด
คือผ่าน rheodyne 7125 หัวฉีดติดตั้ง
100 , ฉันห่วง ตัวแปรแสง UV เครื่องตรวจจับ
( Varian uv-50 ) ตั้งไว้ที่ 404nm หรือเครื่องตรวจจับการเรืองแสง
เครดิตภายในประเทศ ( เพอร์กินเอลเมอร์ Beaconsfield , เหรียญ , ,
อังกฤษ ) ชุดที่กระตุ้นและปล่อยความยาวคลื่น
404 618nm ตามลำดับและใช้

การตรวจหาข้อมูลในคอลัมน์ของ
ขนาด 10cm x 5 มม. และ 25 ซม. x 5 มม. เส้นผ่าศูนย์กลางภายในบรรจุด้วยขน [
00
ODS ทรงกลมซิลิกาเคมีผูกพันกับ octadecylsilyl กลุ่ม
( Shandon ภาคใต้ , Runcorn , เชสเชียร์ อังกฤษ

) ]