Red HE-3B dye (C.I. name: reactive

Red HE-3B dye (C.I. name: reactive red 120) and Yellow HE-4R dye (C.I. name: reactive yellow 84) were from Vilmax S.A.(Buenos Aires, Argentina). Both dyes were immobilized onSepharose 4B (Sigma–Aldrich, St. Louis, MO, USA) as pre-viously reported [16,18]. These matrices are named hereafterS-R and S-Y, respectively. The dye density in S-R and S-Y was
determined by the hydrolytic procedure reported by Ruckenstein
and Zeng [19].
Adsorption isotherms were performed with commercial
bLf from Glanbia Nutritionals (Fitchburg, WI, USA). To study
the interactions, 50 mg matrices (S-R and S-Y) were soaked
with 1 mL of bLf solutions (0.063–10 mg/mL) in adsorption
buffer (20 mM sodium phosphate buffer, pH 7.0) for 16 h
at 25C. The concentration of commercial bLf in the supernatants
was determined spectrophotometrically at 280 nm
considering an absorption coefficient of 1.51 mL/mg·cm [20].
The equilibrium concentration of bLf bound to the matrix per
unit of total amount of matrix was calculated by difference between
the concentration of bLf at the beginning of the experiment
and that remaining in the soluble phase after adsorption.
Maximum capacities (Qmax) and dissociation constants
(Kd) were calculated as described by Chase and analyzed according
to the Langmuir model [21]. Five elution solutions
were tested: 2 M NaCl, pH 7.0; 0.5 M NaSCN (sodium thiocyanate),
pH 7.0; 25% ethylene glycol, pH 7.0; 25% ethylene
glycol + 0.5 M NaSCN, pH 7.0; and 25% ethylene glycol + 2
M NaCl, pH 7.0.
Bovine whey was donated by Cooperativa Tambera
Gualeguaychu (Gualeguaych ´ u, Entre R ´ ´ıos, Argentina). The
removal of residual fat from whey was carried out by thermocalcic
precipitation according to Maubois et al. [22]. For the
purification of bLf, 25 mg matrices (S-R and S-Y) previously
equilibrated with 20 mM sodium phosphate buffer, pH 7.0,
were soaked with 1 mL of defatted whey and incubated for
16 h with gentle stirring at 25C. The matrices were washed
four times with 0.5 M NaCl in 20 mM sodium phosphate
buffer, pH 7.0, for 1 h each, and the elution was performed
using 0.5 mL of 25% ethylene glycol + 2 M NaCl for 12 h
at 25C. The process was repeated for three cycles without
regeneration of the matrices. Each step was monitored by
measurement of bLf concentrations with the Bovine Lactoferrin
ELISA Quantification kit (Bethyl Laboratories, USA)
and 15% SDS-PAGE with Coomassie Blue staining [23].
Whey, supernatants, and eluates were concentrated four
times by centrifugal filtration (Amicon Ultrafree MC with
MWCO 10000, Millipore, MA, USA) before SDS-PAGE.
TTotal protein was determined by the Bradford method [24].
All experiments were carried out in triplicate and results are
expressed as the average ± SD.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ย้อมสีแดงเขา 3B (ชื่อซีไอกรุ๊ป: ปฏิกิริยาแดง 120) และย้อมสีเหลืองเขา-4R (ชื่อซีไอกรุ๊ป: 84 ปฏิกิริยาสีเหลือง) จาก Vilmax S.A.(Buenos Aires, Argentina) ทั้งสองสีถูก onSepharose ถูกตรึงกับที่ 4B (Sigma-Aldrich เซนต์หลุยส์ MO สหรัฐอเมริกา) เป็น pre-viously [16,18] รายงาน เมทริกซ์นี้มีชื่อ hereafterS-R และ S-Y ตามลำดับ มีความหนาแน่นของสีย้อมใน S-R และ S Yกำหนด โดยการความคงทนที่รายงาน โดย Ruckensteinและเซง [19]ดำเนินการดูดซับ isotherms กับพาณิชย์bLf จากโภชนาการ Glanbia (แมดิสัน อิน สหรัฐอเมริกา) ในการศึกษาการโต้ตอบ เมทริกซ์ 50 มิลลิกรัม (S-R และ S Y) ถูกแช่กับ 1 มิลลิลิตรของโซลูชั่น bLf (0.063 – 10 mg/mL) ในการดูดซับบัฟเฟอร์ (20 มม.โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.0) สำหรับ 16 ชมที่ 25 c ความเข้มข้นของ bLf พาณิชย์ในการ supernatantsกำหนด spectrophotometrically ที่ 280 nmพิจารณาค่าสัมประสิทธิ์การดูดซึมของ 1.51 mL/mg·cm [20]ความเข้มข้นสมดุลของ bLf ผูกไว้กับเมตริกซ์ต่อหน่วยจำนวนเงินรวมของเมทริกซ์คำนวณจากความแตกต่างระหว่างความเข้มข้นของ bLf ที่จุดเริ่มต้นของการทดสอบและที่เหลือในขั้นตอนการละลายน้ำหลังจากดูดซับความจุสูงสุด (Qmax) และค่าคงที่ dissociation(Kd) ได้คำนวณตามที่อธิบายไว้ โดยไล่ล่า และวิเคราะห์ตามการจำลอง Langmuir [21] โซลูชั่นชะห้าทดสอบ: 2 M NaCl, pH 7.0 0.5 M NaSCN (โซเดียม thiocyanate),pH 7.0 25% เอทิลีนไกลคอล ค่า pH 7.0 เอทิลีน 25%ไกลคอล + 0.5 M NaSCN, pH 7.0 และ 25% เอทิลีนไกลคอล + 2M NaCl, pH 7.0หางนมวัวได้รับบริจาคจาก Cooperativa TamberaGualeguaychu (Gualeguaych แบ็ค u, R สำหรับบุรุษแบ็ค ´ıos อาร์เจนตินา) การกำจัดไขมันตกค้างจากเวย์ได้ดำเนินการ โดย thermocalcicฝนตาม Maubois et al. [22] สำหรับการทำให้บริสุทธิ์ของ bLf เมทริกซ์ 25 มก. (S-R และ S Y) ก่อนหน้านี้equilibrated กับ 20 มม.โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.0แช่กับ 1 มล.โปรตีนสกัดน้ำมัน และได้รับการกกh 16 กับกวนเบา ๆ ที่ 25 c เมทริกซ์ถูกล้างสี่เท่ากับ 0.5 M NaCl ในโซเดียมฟอสเฟต 20 มม.บัฟเฟอร์ ค่า pH 7.0 ละ 1 ชั่วโมง และชะการดำเนินการใช้ 0.5 mL 2 M NaCl + 25% เอทิลีนไกลคอลสำหรับ 12 ชมที่ 25 c กระบวนการซ้ำรอบที่สามโดยไม่ฟื้นฟูของเมทริกซ์การ แต่ละขั้นตอนถูกตรวจสอบโดยการวัดความเข้มข้น bLf มี Lactoferrin วัวนับ ELISA kit (ห้องปฏิบัติการ Bethyl สหรัฐอเมริกา)และ 15% SDS-หน้า ด้วย Coomassie Blue ย้อม [23]เวย์ supernatants และ eluates มีความเข้มข้น 4เวลาเหวี่ยงการกรอง (Amicon Ultrafree MC ด้วยMWCO 10000 มิลลิพอร์ MA, USA) ก่อน SDS-หน้าTTotal โปรตีนถูกกำหนด โดยวิธีแบรดฟอร์ด [24]ทดลองทั้งหมดดำเนินลข้อ และผลเป็นแสดงเป็น±เฉลี่ยแอพเดียว

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

แดง HE-3B ย้อม (ชื่อ CI: ปฏิกิริยาสีแดง 120) และสีเหลือง HE-4R ย้อม (ชื่อ CI: ปฏิกิริยาสีเหลือง 84) มาจาก Vilmax SA (บัวโนสไอเรสอาร์เจนตินา) สีย้อมทั้งสองถูกตรึง onSepharose 4B (Sigma-Aldrich, เซนต์หลุยส์, MO, USA) ขณะที่ก่อน viously รายงาน [16,18] การฝึกอบรมเหล่านี้มีชื่อ hereafterS-R และ SY ตามลำดับ ความหนาแน่นของสีย้อมในอาร์และ SY ถูก
กำหนดโดยขั้นตอนการย่อยสลายรายงานโดย Ruckenstein
และเซง [19].
ไอโซเทอมการดูดซับได้ดำเนินการค้า
BLF จาก Glanbia Nutritionals (ฟิตช์, WI, USA) เพื่อศึกษา
ปฏิสัมพันธ์ 50 การฝึกอบรมมก. (อาร์และ SY) แช่
1 มิลลิลิตรของการแก้ปัญหา BLF (0.063-10 mg / ml) ในการดูดซับ
บัฟเฟอร์ (20 มิลลิเมตรบัฟเฟอร์โซเดียมฟอสเฟตค่า pH 7.0) สำหรับ 16 ชั่วโมง
ที่ 25C ความเข้มข้นของการค้า BLF ใน supernatants
ถูกกำหนด spectrophotometrically ที่ 280 นาโนเมตร
เมื่อพิจารณาจากค่าสัมประสิทธิ์การดูดซึมของ 1.51 มิลลิลิตร / มิลลิกรัม·ซม. [20].
ความเข้มข้นสมดุลของ BLF ผูกไว้กับเมทริกซ์ต่อ
หน่วยของจำนวนของเมทริกซ์ที่คำนวณได้จากความแตกต่างระหว่าง
ความเข้มข้นของ BLF ที่จุดเริ่มต้นของการทดลอง
และที่เหลืออยู่ในขั้นตอนการละลายน้ำหลังจากการดูดซับ.
ความจุสูงสุด (คิวแม็กซ์) และค่าคงที่แยกออกจากกัน
(Kd) จะถูกคำนวณตามที่อธิบายและวิเคราะห์ไล่ตาม
ไปแบบ Langmuir [21] ห้าโซลูชั่นชะ
ได้รับการทดสอบ: 2 มโซเดียมคลอไรด์มีค่า pH 7.0 0.5 M NaSCN (โซเดียม thiocyanate)
ค่า pH 7.0 25% Ethylene Glycol ค่า pH 7.0 25% เอทิลีน
ไกลคอล + 0.5 M NaSCN ค่า pH 7.0 และ 25% Ethylene Glycol + 2
M NaCl ค่า pH 7.0.
เวย์โครับบริจาคมาจาก Cooperativa Tambera
Gualeguaychu (Gualeguaych 'U, Entre R' 'ıos, อาร์เจนตินา)
กำจัดไขมันที่เหลือจากเวย์ได้ดำเนินการโดย thermocalcic
ตกตะกอนตาม Maubois et al, [22] สำหรับ
การทำให้บริสุทธิ์ของ BLF 25 มิลลิกรัมเมทริกซ์ (อาร์และ SY) ก่อนหน้านี้
equilibrated กับ 20 มิลลิเมตรบัฟเฟอร์โซเดียมฟอสเฟตค่า pH 7.0
ที่ถูกแช่ด้วย 1 มิลลิลิตรของเวย์สกัดและบ่มเป็นเวลา
16 ชั่วโมงกับกวนอ่อนโยนที่ 25C เมทริกซ์ถูกล้าง
ครั้งที่สี่กับ 0.5 M NaCl ใน 20 มิลลิเมตรโซเดียมฟอสเฟต
บัฟเฟอร์ค่า pH 7.0 เป็นเวลา 1 ชั่วโมงในแต่ละครั้งและชะได้ดำเนินการ
โดยใช้ 0.5 มิลลิลิตร 25% Ethylene Glycol + 2 M โซเดียมคลอไรด์ 12 ชั่วโมง
ที่ 25C กระบวนการนี้จะซ้ำสามรอบโดยไม่ต้อง
งอกของการฝึกอบรม แต่ละขั้นตอนได้รับการตรวจสอบโดย
การวัดความเข้มข้นของ BLF กับวัว Lactoferrin
ชุด ELISA ปริมาณ (Bethyl ห้องปฏิบัติการ, สหรัฐอเมริกา)
และ 15% SDS-PAGE ด้วย Coomassie สีฟ้าย้อมสี [23].
เวย์ supernatants และ eluates มีความเข้มข้นสี่
ครั้งโดยการกรองแรงเหวี่ยง ( Amicon Ultrafree MC มี
MWCO 10000 ร์ค, MA, USA) ก่อน SDS-PAGE.
TTotal โปรตีนถูกกำหนดโดยแบรดฟอวิธี [24].
ทุกการทดลองดำเนินการในเพิ่มขึ้นสามเท่าและผลที่จะได้
แสดงเป็นค่าเฉลี่ย± SD ออก