Total RNA was isolated from 100 mg

Total RNA was isolated from 100 mg fresh-weight samples by
using Trizol reagent (Invitrogen, Gaithersburg, MD, USA) according
to the manufacturer’s instruction. DNA-free total RNA (2 mg) from
different treatments was used for cDNA synthesis in a 20-mL reaction volume containing 2.5 U of AMV reverse transcriptase XL
(TaKaRa, Dalian, China) and 1 mM oligo(dT) primer.
Real-time RT-PCR reactions were performed with a Mastercycler
 ep realplex real-time PCR system (Eppendorf, Hamburg,
Germany) using SYBR Premix Ex Taq (TaKaRa, Dalian, China). The
cDNA was amplified with the following primers: for SlActin
(accession number BT012695), forward 50-CCACGAGACTACATACAA-
30 and reverse 50-TACCACCACTGAGCACAA-30; for SlDES1
(accession number XM_004248001), forward 50-AAATAACTGGCAATGGGGTT-
30 and reverse 50-TGGTCTGTTGGCGAGTCTAA-
30; for SlCDKA;1 (accession number Y17225), forward 50-
CACTTGCCTGTCGCCTCCTC-30 and reverse 50-
ACCCCCTCGTCTTCCTGCTC-30; for SlCYCA2;1 (accession number
AJ243452), forward 50-CATTAACAAGGGTATGCGAA-30 and reverse
50-GTCAGGTAAAGAGTGTCCGG-30; for SlKRP2 (accession number
AJ441250), forward 50-CTTCACAAACCACCCACCCC-30 and reverse
50-TTTCGTCCACCTCCCTCACC-30 . Relative expression levels were
presented as values relative to the control samples at the indicated
time points, after normalization to SlActin transcript levels.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

อาร์เอ็นเอทั้งหมดถูกแยกต่างหากจากตัวอย่างสดน้ำหนัก 100 มิลลิกรัมโดยใช้ Trizol ตามรีเอเจนต์ (Invitrogen, Gaithersburg, MD สหรัฐอเมริกา)ให้คำแนะนำของผู้ผลิต (2 mg) อาร์เอ็นเอดีเอ็นเอฟรีรวมจากใช้รักษาแตกต่างกันสำหรับการสังเคราะห์ cDNA ปริมาณ 20 มล.ปฏิกิริยาที่ประกอบด้วย transcriptase กลับ U AMV 2.5 XL(TaKaRa ต้าเหลียน จีน) และรองพื้น oligo(dT) 1 mMดำเนินปฏิกิริยา RT-PCR แบบเรียลไทม์กับ Mastercyclerep realplex แบบ real-time PCR ระบบ (Eppendorf ฮัมบูร์กเยอรมนี) ใช้ SYBR Premix Ex Taq (TaKaRa ต้าเหลียน จีน) ที่cDNA ถูกขยาย ด้วยไพรเมอร์ที่ต่อไปนี้: สำหรับ SlActin(ทะเบียนหมายเลข BT012695), ส่งต่อ 50-CCACGAGACTACATACAA -30 และกลับ 50-TACCACCACTGAGCACAA-30 สำหรับ SlDES1(ทะเบียนหมายเลข XM_004248001), ส่งต่อ 50-AAATAACTGGCAATGGGGTT -30 และกลับ 50-TGGTCTGTTGGCGAGTCTAA -30 สำหรับ SlCDKA; 1 (เลขทะเบียน Y17225), ส่ง 50-CACTTGCCTGTCGCCTCCTC-30 และกลับ 50-ACCCCCTCGTCTTCCTGCTC-30 สำหรับ SlCYCA2; 1 (เลขทะเบียนส่งต่อ 50-CATTAACAAGGGTATGCGAA-30 AJ243452), และกลับ50-GTCAGGTAAAGAGTGTCCGG-30 สำหรับ SlKRP2 (เลขทะเบียนส่งต่อ 50-CTTCACAAACCACCCACCCC-30 AJ441250), และกลับ50-TTTCGTCCACCTCCCTCACC-30 ระดับสัมพัทธ์นิพจน์ได้แสดงเป็นเทียบกับตัวอย่างควบคุมในการระบุค่าเวลาจุด หลังจากฟื้นฟูระดับเสียงบรรยาย SlActin

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

รวมอาร์เอ็นเอที่แยกได้จากกลุ่มตัวอย่าง 100 มิลลิกรัมสดน้ำหนักโดยการ
ใช้สาร Trizol (Invitrogen, Gaithersburg, MD, USA) ตาม
คำแนะนำของผู้ผลิต ดีเอ็นเออาร์เอ็นเอฟรีทั้งหมด (2 มก.) จาก
การรักษาที่แตกต่างกันถูกนำมาใช้ในการสังเคราะห์ยีนในปริมาณปฏิกิริยา 20 มิลลิลิตรมี 2.5 U ของ AMV reverse transcriptase XL
(TaKaRa, ต้าเหลียน, จีน) และ 1 มิลลิ Oligo (dT) ไพรเม.
หลวง เวลาปฏิกิริยา RT-PCR ได้ดำเนินการกับ Mastercycler
? EP realplex แบบ real-time PCR ระบบ (Eppendorf, ฮัมบูร์ก,
เยอรมนี) ใช้ SYBR? พรีมิกซ์ Ex Taq? (TaKaRa, ต้าเหลียน, จีน)
cDNA ถูกขยายด้วยไพรเมอร์ต่อไปนี้: สำหรับ SlActin
(ภาคยานุวัติจำนวน BT012695) ไปข้างหน้า 50 CCACGAGACTACATACAA-
30 และย้อนกลับ 50 TACCACCACTGAGCACAA-30; สำหรับ SlDES1
(ภาคยานุวัติจำนวน XM_004248001) ไปข้างหน้า 50 AAATAACTGGCAATGGGGTT-
30 และย้อนกลับ 50 TGGTCTGTTGGCGAGTCTAA-
30; สำหรับ SlCDKA 1 (ภาคยานุวัติจำนวน Y17225) ไปข้างหน้า 50
CACTTGCCTGTCGCCTCCTC-30 และย้อนกลับ 50
ACCCCCTCGTCTTCCTGCTC-30; สำหรับ SlCYCA2 1 (ภาคยานุวัติจำนวน
AJ243452) ไปข้างหน้า 50 CATTAACAAGGGTATGCGAA-30 และย้อนกลับ
50 GTCAGGTAAAGAGTGTCCGG-30; สำหรับ SlKRP2 (ภาคยานุวัติจำนวน
AJ441250) ไปข้างหน้า 50 CTTCACAAACCACCCACCCC-30 และย้อนกลับ
50 TTTCGTCCACCTCCCTCACC-30 ระดับการแสดงออกของญาติที่ถูก
นำเสนอเป็นค่าเมื่อเทียบกับตัวอย่างควบคุมที่ระบุ
จุดเวลาหลังจากการฟื้นฟูในระดับหลักฐาน SlActin

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

อาร์เอ็นเอทั้งหมดถูกแยกจาก 100 มิลลิกรัมต่อน้ำหนักสดตัวอย่างโดย
ใช้ trizol Reagent ( Invitrogen Gaithersburg , แมรี่แลนด์ , สหรัฐอเมริกา ) ตาม
คำแนะนำของผู้ผลิต ดีเอ็นเออาร์เอ็นเอทั้งหมดฟรี ( 2 มก. ) จาก
วิทยาการต่าง ๆใช้ในการสังเคราะห์ดีเอ็นเอในปฏิกิริยาปริมาณ 20 ml บรรจุ 2.5 U of และ reverse transcriptase XL
( Takara , Dalian , จีน ) และ 1 มิลลิเมตร โอลิโก ( DT )
รองพื้นเวลาจริงปฏิกิริยา RT-PCR แสดงกับ mastercycler
 EP realplex ระบบเรียลไทม์พีซีอาร์ ( เพนดอร์ฟ , ฮัมบูร์ก , เยอรมนี  SYBR
) ใช้รวม อดีตได้ดี  ( Takara , Dalian , จีน )
cDNA ถูกขยายด้วยวิธีต่อไปนี้ : slactin
( เปลี่ยนเบอร์ bt012695 ) ส่งต่อ 50-ccacgagactacatacaa -
30 และย้อนกลับ 50-taccaccactgagcacaa-30 ; sldes1
( เข้าเบอร์ xm_004248001 )ส่งต่อ 50-aaataactggcaatggggtt -
-
50-tggtctgttggcgagtctaa 30 กลับ 30 ; slcdka ; 1 ( เข้าเบอร์ y17225 ) ส่งต่อ 50 - 50 -

cacttgcctgtcgcctcctc-30 และกลับ accccctcgtcttcctgctc-30 ; slcyca2 ; 1 ( หมายเลขภาคยานุวัติ
aj243452 ) ไปข้างหน้าและย้อนกลับ 50-cattaacaagggtatgcgaa-30
50-gtcaggtaaagagtgtccgg-30 ; slkrp2 ( หมายเลขภาคยานุวัติ
aj441250 )ไปข้างหน้าและย้อนกลับ 50-cttcacaaaccacccacccc-30
50-tttcgtccacctccctcacc-30 . ระดับการแสดงออกญาติถูก
แสดงเป็นค่าเทียบกับตัวอย่างควบคุมที่พบ
เวลาจุด หลังจากการฟื้นฟูเพื่อ slactin ผลการเรียนระดับ