2.2. Bile acid binding procedureThe

2.2. Bile acid binding procedure
The in vitro bile acid binding procedure was a modification of that by Camire, Zhao, and Violette (1993), as previously
reported (Kahlon & Chow, 2000).
The stock bile acid mixture was formulated with glycocholic bile acids providing 75% and taurine-conjugated bile acids 25% of the bile acids based on the composition of the human bile (Carey & Small, 1970; Rossi, Converse, & Hoffman, 1987).
This mixture contained glycocholic acid (9 mmol/l), glycochenocholic acid (9 mmol/l), glycodeoxycholic acid (9 mmol/l),
taurocholic acid (3 mmol/l), taurochenocholic acid (3 mmol/l) and taurodeoxycholic acid (3 mmol/l) in pH 6.3, 0.1 M phosphate buffer.
This stock solution of 36 mmol/l was stored in the 20 C freezer and diluted to the working solution (0.72 lmol/ml) just prior to each assay.
Six replicates of 103–107 mg dry matter of blueberries, plums, prunes, strawberries, cherries, cranberries and
apples, cholestyramine 26 mg and cellulose 24 mg were tested. One substrate blank, one positive blank (2.88 lmol
bile acid mixture per incubation) and six treatment replicates were weighed into 16 · 150 mm glass, screw-capped
tubes.
Samples were digested in 1 ml 0.01 N HCl for 1 h in a 37 C shaker bath.
After this acidic incubation simulating gastric digestion, the sample pH was adjusted to 6.3 with 0.1 ml of 0.1 N NaOH.
To each test sample was added 4 ml of bile acid mixture working solution (0.72 lmol/ml) in a 0.1M phosphate buffer, pH 6.3. A phosphate buffer (4 ml, 0.1M, pH 6.3) was added to the individual substrate blanks.
After the addition of 5 ml of porcine pancreatin (5x, 10 mg/ ml, in a 0.1 Mphosphate buffer, pH 6.3; providing amylase,
protease and lipase for digestion of samples), tubes were incubated for 1 h in a 37 C shaker bath.
Mixtures were transferred to 10 ml centrifuge tubes (Oak Ridge 3118- 0010 Nalgene, Rochester, NY) and centrifuged at 99,000g in a 75-Ti rotor at 39 K for 18 min at 25 C in an ultracentrifuge (model L-60, Beckman, Palo Alto, CA). Supernatant was removed into a second set of labeled tubes.
An additional 5 ml of phosphate buffer was used to rinse out the incubation tube and added to the centrifuge tube, which was vortexed and centrifuged as before.
Supernatant was removed and combined with the previous supernatant tube.
Aliquots of pooled supernatant were frozen at 20 C for bile acids analysis.
Bile acids were analyzed using Trinity Biotech bile acids procedure No. 450 (Trinity Biotech Distribution, St Louis, MO) using a Ciba-Corning Express Plus analyzer (Polestar Labs, Inc., Escondido, CA).
Each sample was analyzed in triplicate. Values were determined from a standard curve obtained by analyzing Trinity Biotech bile acid calibrators (No. 450-11) at 5, 25, 50, 100 and 200 lmol/l.
Individual substrate blanks were subtracted, and bile acid concentrations were corrected based on the mean recoveries of bile acid mixture (positive blank).
The effect of treatment was tested using Lavene’s test for homogeneity, least square means were calculated.
Dunnett’s onetailed test was used for comparison of cholestyramine as well as cellulose against all treatments, and differences among blueberries, plums, prunes, strawberries, cherries, cranberries and apples were tested for significance with Tukey’s test for comparison of all possible pairs of means (SAS Institute, Cary, NC). A value of P 6 0.05 was considered the criterion of significance.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.2. ขั้นตอนผูกกรดน้ำดีขั้นตอนผูกกรดน้ำดีในหลอดทดลองมีการเปลี่ยนแปลงที่ โดย Camire, Zhao อันดับด้วย (1993), ก่อนหน้านี้รายงาน (Kahlon & เชาว์ 2000) ส่วนผสมของกรดน้ำดีหุ้นถูกผสม ด้วยกรดน้ำดี glycocholic 75% และ 25% รวมกัน taurine กรดน้ำดีกรดน้ำดีที่อิงองค์ประกอบของน้ำดีมนุษย์ (แครี่และขนาดเล็ก 1970 Rossi, Converse และฮอฟ แมน 1987) ส่วนผสมนี้อยู่ glycocholic กรด (9 mmol/l), glycochenocholic กรด (9 mmol/l), glycodeoxycholic กรด (9 mmol/l),taurocholic กรด (3 mmol/l), taurochenocholic กรด (3 mmol/l) และกรด taurodeoxycholic (3 mmol/l) ค่า pH 6.3 บัฟเฟอร์ฟอสเฟต 0.1 M โซลูชันนี้หุ้นของ 36 mmol/l ถูกเก็บไว้ในช่องแช่แข็ง 20 C และเจือจางเพื่อการแก้ไขปัญหาทำงาน (0.72 lmol มิลลิลิตร) ก่อนที่จะทดสอบแต่ละ เหมือนกับหกเรื่องแห้ง 103 – 107 มิลลิกรัมของบลูเบอร์รี่ พลัม พรุน สตรอเบอร์รี่ เชอร์รี่ แครนเบอร์รี่ และแอปเปิ้ล cholestyramine 26 มิลลิกรัมและเซลลูโลสทดสอบ 24 มิลลิกรัม หนึ่งพื้นว่างเปล่า ว่างเปล่าบวกหนึ่ง (2.88 lmolส่วนผสมของกรดน้ำดีต่อกกไข่) และหกการรักษาเหมือนกับชั่งน้ำหนักเป็น 16 · แก้ว 150 มม. ปกคลุมสกรูหลอด ตัวอย่างถูกย่อยสลายใน 1 มล. 0.01 N HCl สำหรับ h 1 น้ำปั่น 37 C หลังจากนี้จำกัดการกกไข่เลียนแบบการย่อยในกระเพาะอาหารเป็นกรด มีการปรับปรุงค่า pH ของตัวอย่าง 6.3 ด้วย 0.1 N NaOH 0.1 มล. การทดสอบแต่ละ อย่างถูกเพิ่ม 4 ml ของโซลูชันการทำงานผสมกรดน้ำดี (0.72 lmol มิลลิลิตร) ใน 0.1M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ค่า pH 6.3 ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (4 ml, 0.1M ค่า pH 6.3) ถูกเพิ่มไปยังช่องว่างพื้นผิวแต่ละ หลังจากเพิ่มเติม pancreatin porcine (5 x, 10 มิลลิกรัม/มิลลิลิตร ในบัฟเฟอร์ Mphosphate 0.1 ค่า pH 6.3 ให้ amylase, 5 มล.รติเอสและเอนไซม์ไลเปสสำหรับย่อยของตัวอย่าง), ได้รับการกกหลอดสำหรับ h 1 น้ำปั่น 37 C ส่วนผสมโอน 10 มล.หลอดหมุนเหวี่ยง (Nalgene Oak Ridge 3118-0010 เชสเตอร์ NY) และเหวี่ยงที่ 99,000 กรัมใบพัด 75 Ti ที่ 39 K นาที 18 ที่ 25 C ในการ ultracentrifuge (รุ่น L-60, Beckman คาร์ลอส CA) Supernatant ถูกเอาออกในชุดสองชื่อหลอด เพิ่มเติม 5 มล.ของฟอสเฟตบัฟเฟอร์ถูกใช้เพื่อล้างออกบ่มหลอด และเพิ่มหลอดหมุนเหวี่ยง vortexed ทั้งเหวี่ยงก่อน Supernatant ออก และรวมกับหลอด supernatant ก่อนหน้า Aliquots ของ pooled supernatant ถูกแช่แข็งที่ 20 C สำหรับการวิเคราะห์กรดน้ำดี กรดน้ำดีถูกวิเคราะห์โดยใช้เทคโนโลยีชีวภาพทรินิตี้น้ำดีกรดกระบวนการหมายเลข 450 (ทรินิตี้กระจายเทคโนโลยีชีวภาพ St Louis, MO) ใช้วิเคราะห์ Ciba Corning Express Plus (Polestar Labs, Inc. เอสคอนดิโด CA) แต่ละอย่างถูกวิเคราะห์ลข้อ กำหนดค่าจากกราฟมาตรฐานที่ได้รับ โดยการวิเคราะห์อินเตอร์กรดน้ำดีที่ทรินิตี้เทคโนโลยีชีวภาพ (หมายเลข 450-11) ที่ 5, 25, 50, 100 และ 200 lmol/l Individual substrate blanks were subtracted, and bile acid concentrations were corrected based on the mean recoveries of bile acid mixture (positive blank). The effect of treatment was tested using Lavene’s test for homogeneity, least square means were calculated. Dunnett’s onetailed test was used for comparison of cholestyramine as well as cellulose against all treatments, and differences among blueberries, plums, prunes, strawberries, cherries, cranberries and apples were tested for significance with Tukey’s test for comparison of all possible pairs of means (SAS Institute, Cary, NC). A value of P 6 0.05 was considered the criterion of significance.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.2 กรดน้ำดีขั้นตอนที่มีผลผูกพัน
ในหลอดทดลองกรดน้ำดีขั้นตอนการผูกเป็นการปรับเปลี่ยนของว่าโดย Camire, Zhao และไวโอเล็ต (1993) ขณะที่ก่อนหน้านี้
มีรายงาน (Kahlon & Chow, 2000).
ผสมกรดหุ้นน้ำดีเป็นสูตรที่มีกรดน้ำดี glycocholic ให้ 75% และทอรี-ผันกรดน้ำดี 25% ของกรดน้ำดีขึ้นอยู่กับองค์ประกอบของน้ำดีของมนุษย์ (แครี่และขนาดเล็ก 1970; รอสซี, Converse, และฮอฟแมน, 1987).
ส่วนผสมนี้มีกรด glycocholic (9 มิลลิโมล / ลิตร) กรด glycochenocholic (9 มิลลิโมล / ลิตร) กรด glycodeoxycholic (9 มิลลิโมล / ลิตร)
กรด taurocholic (3 มิลลิโมล / ลิตร) กรด taurochenocholic (3 มิลลิโมล / ลิตร) และกรด taurodeoxycholic (3 มิลลิโมล / ลิตร) ในค่า pH 6.3, 0.1 M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์.
นี้แก้ปัญหาสต็อกของ 36 มิลลิโมล / ลิตรถูกเก็บไว้ใน? 20? C ตู้แช่แข็งและเจือจางเพื่อแก้ปัญหาการทำงาน (0.72 lmol / ml) แต่ก่อนที่จะทดสอบแต่ละ.
หกซ้ำของวัตถุแห้ง 103-107 มิลลิกรัมของบลูเบอร์รี่ พลัม, พรุน, สตรอเบอร์รี่, เชอร์รี่, แครนเบอร์รี่และ
แอปเปิ้ล cholestyramine 26 มิลลิกรัมและ 24 มิลลิกรัมเซลลูโลสได้รับการทดสอบ หนึ่งในสารตั้งต้นว่างบวกหนึ่งที่ว่างเปล่า (2.88 lmol
กรดน้ำดีผสมต่อการบ่ม) และหกรักษาซ้ำชั่งเป็น 16 · 150 มิลลิเมตรแก้วสกรูที่ปกคลุมด้วย
หลอด.
ตัวอย่างถูกย่อยใน 1 มิลลิลิตร 0.01 N HCl เป็นเวลา 1 ชั่วโมงใน 37? อาบน้ำปั่น C.
หลังจากการบ่มเป็นกรดนี้จำลองการย่อยอาหารในกระเพาะอาหาร, ค่า pH ตัวอย่างการปรับ 6.3 กับ 0.1 มล. 0.1 N NaOH.
ต้องการตัวอย่างการทดสอบแต่ละถูกเพิ่มเข้ามา 4 มิลลิลิตรผสมกรดน้ำดีแก้ปัญหา (0.72 lmol / ml) ทำงานใน 0.1 ฟอสเฟตบัฟเฟอร์เอ็มพีเอช 6.3 บัฟเฟอร์ฟอสเฟต (4 มิลลิลิตร 0.1M ค่า pH 6.3) ถูกเพิ่มลงในช่องว่างพื้นผิวของแต่ละบุคคล.
หลังจากที่นอกเหนือจาก 5 มิลลิลิตร Pancreatin สุกร (5x 10 mg / ml ใน Mphosphate บัฟเฟอร์ 0.1, ค่า pH 6.3 ที่ให้อะไมเลส,
โปรติเอสและเอนไซม์ไลเปสสำหรับการย่อยอาหารของกลุ่มตัวอย่าง) หลอดถูกบ่มเป็นเวลา 1 ชั่วโมงใน 37? C อาบน้ำปั่น.
ผสมถูกย้ายไป 10 มล. หลอดหมุนเหวี่ยง (Oak Ridge 3118- 0010 Nalgene โรเชสเตอร์, นิวยอร์ก) และหมุนเหวี่ยงที่ 99,000g ใน 75 Ti ใบพัด 39 K สำหรับ 18 นาทีที่ 25 องศาเซลเซียสใน ultracentrifuge (L-60 รุ่นเบคค์, พาโลอัลโต) สารละลายจะถูกลบออกเป็นชุดที่สองของหลอดที่มีป้ายกำกับ.
เพิ่มอีก 5 มิลลิลิตรฟอสเฟตบัฟเฟอร์ถูกใช้ในการชะล้างออกหลอดฟักตัวและเพิ่มไปยังหลอด centrifuge ซึ่งได้รับการหมุนวนและปั่นเป็นมาก่อน.
สารละลายจะถูกลบออกและรวมกับสารละลายก่อนหน้านี้ หลอด.
aliquots ของสารละลาย pooled ถูกแช่แข็งที่? 20? C สำหรับการวิเคราะห์กรดน้ำดี.
กรดน้ำดีถูกนำมาวิเคราะห์โดยใช้ทรินิตี้ไบโอเทคขั้นตอนกรดน้ำดีครั้งที่ 450 (การกระจายทรินิตี้ไบโอเทค, St Louis, มิสซูรี) โดยใช้การวิเคราะห์ Ciba คอร์นนิงด่วนพลัส ( โพลสตา Labs, Inc Escondido, CA).
แต่ละตัวอย่างการวิเคราะห์ในเพิ่มขึ้นสามเท่า ค่าได้รับการพิจารณาจากโค้งมาตรฐานที่ได้จากการวิเคราะห์ทรินิตี้ไบโอเทคกรดน้ำดีเทียบ (ฉบับที่ 450-11) ที่ 5, 25, 50, 100 และ 200 lmol / L.
ช่องว่างพื้นผิวส่วนบุคคลที่ถูกหักออกและความเข้มข้นของกรดน้ำดีได้รับการแก้ไขขึ้นอยู่กับ กลับคืนเฉลี่ยของกรดน้ำดีส่วนผสม (ว่างบวก).
ผลของการรักษาที่ได้รับการทดสอบการใช้การทดสอบ Lavene สำหรับความเป็นเนื้อเดียวกันอย่างน้อยตารางวิธีการคำนวณ.
ทดสอบ onetailed Dunnett ถูกใช้สำหรับการเปรียบเทียบ cholestyramine เช่นเดียวกับเซลลูโลสกับการรักษาทั้งหมดและความแตกต่างระหว่าง บลูเบอร์รี่, พลัม, พรุน, สตรอเบอร์รี่, เชอร์รี่, แครนเบอร์รี่และแอปเปิ้ได้มีการทดสอบความสำคัญกับการทดสอบของ Tukey สำหรับการเปรียบเทียบคู่ไปได้ทั้งหมดของวิธี (SAS Institute, แครี, NC) ค่า P 6 0.05 ได้รับการพิจารณาเกณฑ์อย่างมีนัยสำคัญ