MATERIALS AND METHODSCell culture,

MATERIALS AND METHODS
Cell culture, differentiation and treatment
P19 embryonal carcinoma cells (CRL-1825, ATCC;
Manassas, VA, USA) were obtained and cultured in
glucose- or galactose (glucose-free)-containing media at 37ºC in a 5% CO2 atmosphere. High glucose Dulbecco’s
modified Eagle’s medium (DMEM, D5648; Sigma, St.
Quentin Fallavier, France) was supplemented with 10%
FBS (10270–106, Gibco; Paisley, UK), 1.8 g/l sodium
bicarbonate (S5761, Sigma), 110 mg/l sodium pyruvate
(P5280, Sigma) and antibiotic/antimycotic solution (A5955,
Sigma). Galactose (glucose-free)-containing medium was
prepared using DMEM without glucose (D5030, Sigma)
supplemented with 10% FBS, 1.8 g/l sodium bicarbonate,
110 mg/l sodium pyruvate, 1.8 g/l galactose (G5388,
Sigma), 0.584 g/l L-glutamine (G3126, Sigma) and
antibiotic/antimycotic solution. P19 cancer cells, growing
in high glucose DMEM or in galactose (glucose free)-
containing DMEM, were maintained in monolayer and
passaged every 2–3 days at a 1:20 to 1:30 dilution.
In order to induce cell differentiation, P19 CSCs
were seeded at a density of 5.2 × 103 cells/cm2 and 1 μM
of retinoic acid (R2625, Sigma) was added for 96 hours.
Melatonin (M5250, Sigma) was always freshly
dissolved in ethanol and dichloroacetate (347795, Sigma)
in water. If not indicated otherwise, twenty-four hours
after seeding, P19 CSCs and dCCs grown in both culture
media were exposed to 0.1 mM and 1 mM melatonin alone
or in combination with 10 mM dichloroacetate (347795,
Sigma) during 72 hours. Controls were always treated
with an equal amount of vehicle (less than 0.95% ethanol).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัสดุและวิธีการเพาะเลี้ยงเซลล์ การสร้างความแตกต่าง และการรักษาP19 embryonal carcinoma เซลล์ (CRL-1825, ATCCมานาสซาส VA สหรัฐอเมริกา) ถูกรับ และในอ่างกลูโคสหรือกลูโคสฟรี) กาแล็กโทส-ประกอบด้วยสื่อที่ 37ºC ในบรรยากาศ 5% CO2 สูงกลูโคสดุลเบกโกของแก้ไขอินทรีกลาง (DMEM, D5648 ซิกมา เซนต์เควนติน Fallavier ฝรั่งเศส) ถูกเสริม ด้วย 10%FBS (10270-106, Gibco Paisley สหราชอาณาจักร), โซเดียม 1.8 g/lไบคาร์บอเนต (S5761 ซิก), pyruvate โซเดียม 110 mg/l(P5280 ซิก) และแก้ปัญหายา ปฏิชีวนะ/antimycotic (A5955ซิกมา) กาแล็กโทสน้ำตาลกลูโคสฟรี) -ประกอบด้วยขนาดกลางมีใช้ DMEM ไม่ มีกลูโคส (D5030 ซิก)เสริม ด้วย 10% FBS, 1.8 g/l โซเดียมไบคาร์บอเนต-110 mg/l โซเดียม pyruvate กาแล็กโทส 1.8 g/l (G5388ซิกมา), 0.584 g/l L-glutamine (G3126 ซิก) และแก้ปัญหายา ปฏิชีวนะ/antimycotic เซลล์มะเร็ง P19 เติบโตกลูโคสสูง DMEM หรือกาแล็กโทส (กลูโคสฟรี) -ประกอบด้วย DMEM ได้รับการรักษาใน monolayer และpassaged ทุก 2-3 วันที่เจือจาง 1:20 ถึง 1:30เพื่อก่อให้เกิดการเปลี่ยนสภาพของเซลล์ P19 CSCsมี seeded ที่ความหนาแน่นของ 5.2 × 103 เซลล์/cm2 และ 1 μMของ retinoic กรด (R2625 ซิก) ถูกเพิ่ม 96 ชั่วโมงเมลาโทนิน (M5250 ซิก) ถูกเสมอสดละลายในเอทานอลและ dichloroacetate (347795 ซิก)ในน้ำ หากไม่ระบุเป็นอย่างอื่น ยี่สิบสี่ชั่วโมงหลังจากปลูก P19 CSCs และ dCCs ปลูกในทั้งสองวัฒนธรรมสื่อสัมผัสได้เมลาโทนิน 0.1 มม.และ 1 มม.เพียงอย่างเดียวหรือใช้ร่วมกับ dichloroacetate 10 มม. (347795ซิกมา) ระหว่าง 72 ชั่วโมง ควบคุมได้เสมอรับการรักษาด้วยจำนวนที่เท่ากันของยานพาหนะ (น้อยกว่า 0.95% เอทานอล)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัสดุและวิธีการ
เพาะเลี้ยงเซลล์แตกต่างและการรักษา
P19 embryonal เซลล์มะเร็ง (CRL-1825, ATCC;
ซาส, VA, USA) ได้รับและเพาะเลี้ยงใน
glucose- หรือกาแลคโต (กลูโคสฟรี) -containing สื่อที่37ºCใน CO2 5% บรรยากาศ น้ำตาลสูงของ Dulbecco
ดัดแปลงกลางของนกอินทรี (DMEM, D5648; ซิกเซนต์
เคว็นติ Fallavier ฝรั่งเศส) ได้รับการเสริมด้วย 10%
FBS (10270-106, Gibco; Paisley สหราชอาณาจักร), 1.8 g / l โซเดียม
ไบคาร์บอเนต (S5761 ซิก) 110 mg / l ไพรูโซเดียม
(P5280 ซิก) และยาปฏิชีวนะ / แก้ปัญหาฆ่าเชื้อรา (A5955,
Sigma) กาแลคโต (กลูโคสฟรี) -containing กลางได้รับการ
จัดทำขึ้นโดยไม่ต้องใช้ DMEM กลูโคส (D5030 ซิก)
เสริมด้วย FBS 10% 1.8 g / l โซเดียมไบคาร์บอเนต
110 mg / l ไพรูโซเดียม 1.8 g / l กาแลคโต (G5388,
Sigma) , 0.584 กรัม / ลิตร L-glutamine (G3126, Sigma) และ
ยาปฏิชีวนะ / แก้ปัญหาฆ่าเชื้อรา P19 เซลล์มะเร็งเจริญเติบโต
ในน้ำตาลสูงหรือ DMEM ในกาแลคโต (กลูโคสฟรี) -
มี DMEM ถูกเก็บรักษาไว้ใน monolayer และ
. passaged ทุก 2-3 วัน 1:20-01:30 เจือจาง
เพื่อที่จะทำให้เกิดความแตกต่างของเซลล์ P19 CSCS
เมล็ดที่มีความหนาแน่น 5.2 × 103 เซลล์ / cm2 และ 1 ไมครอน
ของกรด retinoic (R2625 ซิก) ถูกเพิ่มเข้ามาสำหรับ 96 ชั่วโมง.
เมลาโทนิ (M5250 ซิก) ก็มักจะสด
ละลายในเอทานอลและ dichloroacetate (347,795 ซิก)
ใน น้ำ ถ้าไม่ได้ระบุเป็นอย่างอื่นยี่สิบสี่ชั่วโมง
หลังจากเพาะ P19 CSCS และ dCCs เติบโตทั้งในวัฒนธรรม
สื่อได้สัมผัสกับ 0.1 มิลลิและเมลาโทนิมิลลิ 1 เพียงอย่างเดียว
หรือใช้ร่วมกับ 10 มิลลิ dichloroacetate (347,795,
Sigma) ในช่วง 72 ชั่วโมง การควบคุมการได้รับการรักษามักจะ
มีจำนวนเท่ากันของยานพาหนะ (น้อยกว่า 0.95% เอทานอล)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัสดุและวิธีการเพาะเลี้ยงเซลล์และการรักษา
,
p19 ไบรโ ัล คาร์ซิโนมาเซลล์ ( crl-1825 , ATCC ;
Manassas , VA , USA ) ที่ได้รับ และเพาะเลี้ยงกลูโคส - กาแล็กโทส ( กลูโคส
หรือฟรี ) - ประกอบด้วยสื่อที่ 37 องศาเซลเซียส ในบรรยากาศºคาร์บอนไดออกไซด์ 5 เปอร์เซ็นต์ กลูโคสสูงของดัลเบโค่
แก้ไขนกอินทรีขนาดกลาง ( dmem d5648 ; , Sigma , เซนต์


fallavier , ฝรั่งเศส ) เสริมด้วย FBS 10 %
( เทพารักษ์– 106 , gibco ;ลายน้ำ , อังกฤษ ) , 1.8 G / L โซเดียมไบคาร์บอเนต ( s5761
, Sigma ) 110 mg / L โซเดียมไพรูเวท
( p5280 , Sigma ) และการแก้ไข ( a5955
/ antimycotic , Sigma ) กาแลกโตส ( น้ำตาล ) ที่มีขนาดกลางคือ
เตรียมไว้ใช้ dmem ไม่มีกลูโคส ( d5030 , Sigma )
เสริม 10% FBS 1.8 G / L โซเดียมไบคาร์บอเนต ,
110 mg / L โซเดียมไพรูเวท 1.8 g / l (
g5388 กาแลคโตส , Sigma ) 0.584 กรัม / ลิตร ( g3126 Glutamine ,Sigma )
/ antimycotic ยาปฏิชีวนะและโซลูชั่น p19 เซลล์มะเร็งเติบโต
ใน dmem น้ำตาลสูงหรือแกแลคโตส ( น้ำตาลฟรี ) -
ที่มี dmem ถูกเก็บรักษาไว้ใน passaged ทุกอย่างและ
2 – 3 วัน ที่ 1 : 20 ถึงตีหนึ่งครึ่งเจือจาง เพื่อทำให้เกิดการเปลี่ยนสภาพของเซลล์
,
p19 cscs ถูก seeded ที่ความหนาแน่นของ 5.2 × 103 เซลล์ / ตร. ซม. 1 μ M
ของ retinoic acid ( r2625 , Sigma ) คือการเพิ่ม
96 ชั่วโมงเมลาโทนิน ( m5250 , Sigma ) มักจะละลายในเอทานอลและ dichloroacetate สด

( 347795 , Sigma ) ในน้ำ ถ้าไม่ระบุมิฉะนั้น ยี่สิบสี่ชั่วโมง
น้ำหนักและ p19 cscs dccs เติบโตในวัฒนธรรม
สื่อได้รับ 0.1 มิลลิเมตร และ 1 มม. เมลาโทนินคนเดียว
หรือร่วมกับ 10 มม. ( 347795
dichloroacetate , Sigma ) ในช่วง 72 ชั่วโมง การควบคุมมักจะทำกับ
มีจํานวนเท่าของยานพาหนะ ( น้อยกว่า 0.95 % เอทานอล )