2. Materials and Methods2.1. Collec

2. Materials and Methods
2.1. Collection of Plant Material. The fresh leaves of R. nasutus
were collected from Tirumala Hills, Tirupati, Chittoor
districts of Andhra Pradesh from July to October 2009. The
plant specimen was verified to be the correct species by Dr.
Madhava Setty, a botanist from the Department of Botany, S.
V. University, Tirupati, India.
2.2. Preparation of the Extract. Fresh leaves of R. nasutus
(500 g) were shade-dried and milled into fine powder using
a mechanical grinder (TTK Prestige, Chennai, India). The
powdered plant material was macerated and shaken in
methanol using a bath shaker (Thermo Scientific, Mumbai,
India) for 48 h. The extract was then filtered with filter paper
(Whatman no. 1) and evaporated to dryness under a vacuum
with reduced pressure using a rotary evaporator at 40∘
C. The
concentrate was then placed on aluminum foil before freeze
drying. The residual extract was dissolved in 1 mL of sterile
water before use.
2.3. Chemicals. Streptozotocin (STZ) was purchased from
Sigma (USA). All other chemicals and reagents used in
this study were of analytical grade. Glibenclamide (Sugatrol,
Hyderabad, India) was purchased from a local drug store.
2.4. Experimental Design. Adult male Wistar rats weighing
between 150 and 180 g were obtained from Sri Venkateswara
Enterprises, Bangalore, India. They were individually housed
in clean, sterile polypropylene cages under standard conditions
(12 h light/dark cycles) with free access to standard
chow (Hindustan Lever Ltd., Bangalore, India) and water
ad libitum. Before the commencement of experiments, the
animals were allowed to acclimatize to laboratory conditions
for one week. The animal experiments were designed
and performed in accordance with the ethical standards
approved by the local Ministry of Social Justices and
Empowerment, Government of India, and the Institutional
Animal Ethics Committee Guidelines (Resolution no.
05/(i)/a/CPCSEA/IAEC/SVU/MDN-PVR/dt.13.09.2010).
2.5. Induction of Experimental Diabetes. Diabetes was
induced by a single intraperitoneal injection of a freshly
prepared STZ solution (Sigma, no. 242-646-8) (50 mg/kg
in citrate buffer 0.01 M, pH 4.5) to overnight-fasted rats.
Diabetes was confirmed by the presence of polydipsia and
polyurea as well as by measuring the nonfasting plasma
glucose levels 48 h after STZ injection. Only animals that
were confirmed to have blood glucose levels greater than
250 mg/dL were included in the study. All the animals were
allowed free access to tap water and pellet chow in accordance
with the guidelines of the Institute Animal Ethics committee.
The rats were divided into five groups of six animals each
as follows.
Group I: normal rats (controls—animals receiving
only buffer).
Group II: R. nasutus-treated normal rats (200 mg/
kg/day) [13, 23].
Group III: diabetic rats (untreated).
Group IV: R. nasutus-treated diabetic rats (200 mg/
kg/day).
Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine 3
Group V: Glibenclamide-treated diabetic rats (50 mg/
kg/day).
2.6. Acute Toxicity Test. R. nasutus (50–250 mg/kg body
weight) was orally administered to rats for acute toxicity studies.
Each group was observed individually for signs of toxicity
and behavioral changes such as hyperactivity, grooming, convulsions,
sedation, or hypothermia.These observations began
1 h after dosing and were continued at least once daily for 14
days. The mortality rate was also calculated.
2.7. Biochemical Measurements. At the end of the study (30
days), after an overnight fasting, the animals were sacrificed
by cervical dislocation following anesthesia using isoflurane.
The liver tissue was excised and washed with ice-cold saline
and was immediately immersed in liquid nitrogen and stored
at −80∘
C for further biochemical analysis.Then, the measurements
of liver enzyme activity and biochemical assays were
performed.
AST and ALT activities were assayed using the method of
Reitman and Frankel [28].The total carbohydrate content was
estimated based on the method established by Carroll et al.
[29]. Glycogen content was determined as described by
Saifter et al. [30]. The protein content was estimated by the
method of Lowry et al. [31] with slight modifications. All
enzymatic assays in this study were performed using crude
liver homogenate.
2.8. Statistical Analysis. The results were expressed as the
mean ± SD (

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการ2.1. รวบรวมวัสดุโรงงาน ใบสดของ R. พันชั่งถูกรวบรวมไว้จาก ภูเขา Tirumala, Chittoor ทิรูปาติเขตของรัฐอานธรประเทศตั้งแต่เดือนกรกฎาคมถึง 2552 ตุลาคม ที่ตัวอย่างพืชถูกตรวจสอบเป็น สายพันธุ์ที่ถูกต้อง โดย DrMadhava Setty, botanist จากภาควิชาพฤกษศาสตร์ S.V. มหาวิทยาลัย ติรูปัติ อินเดีย2.2 การเตรียมสารสกัด ใบสดของ R. พันชั่ง(500 กรัม) สีแห้ง และปลายเป็นผงดีใช้เป็นเครื่องบด (TTK เพรสทีจ เจนไน อินเดีย) ที่โรงงานผงวัสดุ macerated และเขย่าในเมทานอลโดยใช้เชคเกอร์น้ำ (วิทยาศาสตร์เทอร์โม มุมไบอินเดีย) สำหรับ 48 h สารสกัดได้กรอง ด้วยกระดาษกรองแล้ว(Whatman หมายเลข 1) และหายไปในความแห้งกร้านภายใต้สุญญากาศกับลดความดันที่ใช้ evaporator โรตารี่ที่ 40∘C. การข้นจากนั้นได้ถูกวางบนอลูมิเนียมฟอยล์ก่อนหยุดแห้ง สารสกัดจากส่วนที่เหลือถูกละลายใน 1 mL ของกอซน้ำก่อนใช้2.3. เคมี ร้าน streptozotocin (STZ) จากซิก (สหรัฐอเมริกา) สารเคมีและ reagents ใช้อื่น ๆ ทั้งหมดการศึกษานี้ได้วิเคราะห์เกรด Glibenclamide (Sugatrolไฮเดอราบัด อินเดีย) ที่ซื้อจากร้านขายยาในท้องถิ่น2.4 การทดลองออกแบบ ผู้ใหญ่ชาย Wistar หนูชั่งระหว่าง 150 และ 180 g ได้รับมาจากครอบคลุมบนศรีวิสาหกิจ บังกาลอร์ อินเดีย พวกเขาได้แต่ละห้องพักในการทำความสะอาด ฆ่าเชื้อกรงที่ polypropylene ภายใต้เงื่อนไขมาตรฐาน(วงจรไฟ/ดำ 12 h) ถึงมาตรฐานฟรีเชา (ฮินดัสแตนคาน จำกัด บังกาลอร์ อินเดีย) และน้ำad libitum ก่อนเริ่มการทดลอง การสัตว์ที่สามารถ acclimatize เงื่อนไขปฏิบัติในหนึ่งสัปดาห์ มีการออกแบบการทดลองสัตว์และดำเนินการตามมาตรฐานทางจริยธรรมอนุมัติตามท้องถิ่นกระทรวงของสังคม Justices และอำนาจ รัฐบาลอินเดีย และที่สถาบันแนวทางของคณะกรรมการจริยธรรมสัตว์ (ความละเอียดไม่05/(i)/a/CPCSEA/IAEC/SVU/MDN-PVR/dt.13.09.2010)2.5 การเหนี่ยวนำของโรคเบาหวานทดลอง โรคเบาหวานได้เกิดจากการฉีด intraperitoneal เดียวของสดใหม่เตรียม STZ โซลูชัน (ซิก หมายเลข 242-646-8) (50 mg/kgในซิเตรตบัฟเฟอร์ 0.01 M, pH 4.5) ให้หนูอดแอร์พอร์ตโอเวอร์ไนท์โรคเบาหวานได้รับการยืนยัน โดยสถานะของ polydipsia และเช่นกันเนื่อง ด้วยวัดพลา nonfasting polyurea ริดที่น้ำตาลในระดับ 48 h หลังจากฉีด STZ สัตว์เฉพาะที่ได้ยืนยันให้ระดับน้ำตาลในเลือดมากกว่า250 mg/dL ได้รวมอยู่ในการศึกษา มีสัตว์ทั้งหมดได้ฟรีน้ำประปาและรับประทานเม็ดในมีคำแนะนำของคณะกรรมการจรรยาบรรณสถาบันสัตว์หนูถูกแบ่งออกเป็น 5 กลุ่มหกสัตว์ดังนี้กลุ่ม i:หนูปกติ (ควบคุมโดยสัตว์ที่ได้รับเพียงบัฟเฟอร์)กลุ่ม II: R. พันชั่งถือว่าปกติหนู (200 มิลลิกรัม /กิโลกรัม/วัน) [13, 23]กลุ่มที่ III: (ไม่ถูกรักษา) หนูการเป็นโรคเบาหวานกลุ่ม IV: R. พันชั่งรักษาเบาหวานหนู (200 มิลลิกรัม /กิโลกรัม/วัน)ตามหลักฐานเพิ่มเติม และสำรองยา 3กลุ่ม v คัมภีร์:รับ Glibenclamide หนูเบาหวาน (50 มิลลิกรัม /กิโลกรัม/วัน)2.6 พันชั่ง Toxicity Test. R. เฉียบพลัน (50 – 250 มก./กก.ร่างกายน้ำหนัก) เป็นจัดการเนื้อหาให้หนูศึกษาความเป็นพิษเฉียบพลันแต่ละกลุ่มได้สังเกตแต่ละร่องรอยของความเป็นพิษและการเปลี่ยนแปลงพฤติกรรมเข้าร่องเข้ารอย กรูมมิ่ง convulsionsเชลโล หรือ hypothermia เริ่มสังเกตเหล่านี้h 1 หลังกระบวนและขึ้นน้อยหนึ่งครั้งทุกวันสำหรับ 14วันนั้น นอกจากนี้ยังมีคำนวณอัตราการตาย2.7. วัดชีวเคมี จบการศึกษา (30วัน หลังจากค้างคืนถือศีลอด สัตว์เสียสละโดยปากมดลูกเคลื่อนที่ต่อไปนี้ใช้ isoflurane ยาเนื้อเยื่อตับ excised และล้าง ด้วยน้ำเกลือฉ่ำได้ทันทีแช่อยู่ในไนโตรเจนเหลว และเก็บที่ −80∘C สำหรับวิเคราะห์เชิงชีวเคมี แล้ว วัดเอนไซม์ตับ assays ชีวเคมีและกิจกรรมมีดำเนินการAST และ ALT ได้ assayed โดยใช้วิธีการReitman และ Frankel [28] คาร์โบไฮเดรตรวมเนื้อหาประเมินตามวิธีการก่อตั้งขึ้นโดยคาร์ et al[29] เนื้อหายังไม่ถูกกำหนดโดยSaifter et al. [30] โปรตีนที่ถูกประเมินโดยการวิธีของ Lowry et al. [31] กับการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย ทั้งหมดassays เอนไซม์ในระบบในการศึกษานี้ได้ดำเนินการโดยใช้น้ำมันhomogenate ตับ2.8. สถิติวิเคราะห์ มีแสดงผลเป็นการหมายถึง ± SD (