Two genomic clones (lambda Ubi-1 an

Two genomic clones (lambda Ubi-1 and lambda Ubi-2) encoding the highly conserved 76 amino acid protein ubiquitin have been isolated from maize. Sequence analysis shows that both genes contain seven contiguous direct repeats of the protein coding region in a polyprotein conformation. The deduced amino acid sequence of all 14 repeats is identical and is the same as for other plant ubiquitins. The use of transcript-specific oligonucleotide probes shows that Ubi-1 and Ubi-2 are expressed constitutively at 25 degrees C but are inducible to higher levels at elevated temperatures in maize seedlings. Both genes contain an intron in the 5' untranslated region which is inefficiently processed following a brief, severe heat shock. The transcription start site of Ubi-1 has been determined and a transcriptional fusion of 0.9 kb of the 5' flanking region and the entire 5' untranslated sequence of Ubi-1 with the coding sequence of the gene encoding the reporter molecule chloramphenicol acetyl transferase (CAT) has been constructed (pUBI-CAT). CAT assays of extracts of protoplasts electroporated with this construct show that the ubiquitin gene fragment confers a high level of CAT expression in maize and other monocot protoplasts but not in protoplasts of the dicot tobacco. Expression from the Ubi-1 promoter of pUBI-CAT yields more than a 10-fold higher level of CAT activity in maize protoplasts than expression from the widely used cauliflower mosaic virus 35S promoter of a 35S-CAT construct. Conversely, in tobacco protoplasts CAT activity from transcription of pUBI-CAT is less than one tenth of the level from p35S-CAT.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สอง genomic โคลน (แลมบ์ดา Ubi 1 และแลมบ์ดา Ubi-2) รหัส ubiquitin โปรตีนกรดอะมิโนสูงนำ 76 ได้แยกต่างหากจากข้าวโพด การวิเคราะห์แสดงว่า ยีนทั้งสองประกอบด้วยการทำซ้ำโดยตรงติดกันเจ็ดโปรตีนรหัสภูมิภาคใน polyprotein conformation ลำดับกรดอะมิโน deduced ของการทำซ้ำทั้งหมดที่ 14 เหมือนกัน และเหมือนกับ ubiquitins โรงงานอื่น ๆ การใช้เสียงบรรยายเฉพาะ oligonucleotide probes แสดงว่า Ubi-1 และ Ubi 2 แสดง constitutively ที่ 25 องศา C แต่เป็น inducible ระดับสูงที่อุณหภูมิสูงในข้าวโพดกล้าไม้ ยีนทั้งสองประกอบด้วย intron มีใน 5' untranslated ภูมิภาคที่ทิ้งไปอย่างสิ้นเปลืองการประมวลผลต่อไล่ความร้อนสั้น ๆ รุนแรง ไซต์เริ่มต้น transcription ของ Ubi-1 ได้ถูกกำหนด และผสมผสาน transcriptional 0.9 kb 5' flanking ภูมิภาคและทั้ง 5' untranslated ลำดับของ Ubi 1 ลำดับรหัสของยีนที่เข้ารหัสในโปรแกรมรายงานโมเลกุล chloramphenicol acetyl transferase (CAT) ได้สร้างขึ้น (pUBI-CAT) CAT assays สารสกัดจากโป electroporated มีโครงสร้างนี้แสดงว่า ส่วนยีน ubiquitin confers CAT นิพจน์ ในข้าวโพดและอื่น ๆ โป monocot แต่ไม่โปยาสูบ dicot ระดับสูง นิพจน์จากโปรโมเตอร์ Ubi-1 pUBI-แมวทำให้มากกว่า 10-fold ระดับสูงขึ้นของกิจกรรม CAT ในโปข้าวโพดกว่านิพจน์จากโปรโมเตอร์ 35S ไวรัสโมเสกกะหล่ำที่ใช้กันอย่างแพร่หลายของสร้าง 35S CAT ในทางกลับกัน ในโปยาสูบแมว กิจกรรมจาก transcription pUBI แมวจะน้อยกว่าหนึ่งในสิบของระดับจาก p35S CAT

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สองโคลนจีโนม (แลมบ์ดา Ubi-1 และแลมบ์ดา Ubi-2) การเข้ารหัสอนุรักษ์สูง 76 อะมิโนโปรตีน ubiquitin กรดที่ได้รับการคัดแยกได้จากข้าวโพด การวิเคราะห์ลำดับแสดงให้เห็นว่ายีนทั้งสองมีเจ็ดซ้ำตรงที่อยู่ติดกันของภูมิภาคการเข้ารหัสโปรตีนในรูป polyprotein ลำดับกรดอะมิโนอนุมานทั้งหมด 14 ซ้ำเป็นเหมือนกันและเป็นเหมือนกับ ubiquitins พืชอื่น ๆ ใช้สำเนาเฉพาะ probes oligonucleotide แสดงให้เห็นว่า Ubi-1 และ Ubi-2 จะแสดง constitutively ที่ 25 องศาเซลเซียส แต่ inducible ให้อยู่ในระดับที่สูงขึ้นเมื่ออุณหภูมิสูงขึ้นในต้นกล้าข้าวโพด ยีนทั้งสองมี Intron ใน 5 'ไม่ได้แปลภูมิภาคท​​ี่มีการประมวลผลไม่ได้ผลดังต่อไปนี้สั้น ๆ ช็อตความร้อนอย่างรุนแรง เว็บไซต์เริ่มต้นการถอดรหัสของ Ubi-1 ได้รับการพิจารณาและฟิวชั่นการถอดรหัส 0.9 กิโล 5 'ภูมิภาคขนาบข้างและทั้ง 5' ลำดับการแปลของ Ubi-1 กับลำดับการเข้ารหัสของยีน transferase นักข่าวโมเลกุล chloramphenicol acetyl ( กสท.) ได้รับการสร้างขึ้น (Pubi-CAT) ตรวจ CAT ของสารสกัดจาก protoplasts electroporated กับการแสดงนี้สร้างที่ส่วนยีน ubiquitin ฟาโรห์ระดับสูงของการแสดงออกของกสท. ในข้าวโพดและอื่น ๆ monocot protoplasts แต่ไม่ได้อยู่ใน protoplasts ของยาสูบ dicot การแสดงออกจาก Ubi-1 ก่อการ Pubi-CAT เป็นผลตอบแทนมากกว่า 10 เท่าระดับที่สูงขึ้นของกิจกรรม CAT ใน protoplasts ข้าวโพดกว่าการแสดงออกจากผู้ก่อการใช้กันอย่างแพร่หลายไวรัสกะหล่ำกระเบื้องโมเสคของ 35S 35S-CAT สร้าง ตรงกันข้ามในยาสูบ protoplasts กิจกรรม CAT จากการถอดความจาก Pubi-CAT น้อยกว่าหนึ่งในสิบของระดับจาก p35S-CAT

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

สองสร้างโคลน ( แลมบ์ดา ubi-1 แลมบ์ดาและ ubi-2 ) ที่มีการอนุรักษ์ 76 กรดอะมิโนโปรตีนข้างนอกการเข้ารหัสได้รับที่แยกได้จากข้าวโพด การวิเคราะห์ลำดับเบส พบว่าทั้งยีนประกอบด้วยเจ็ดติดกันตรงทำซ้ำของโปรตีนรหัสภูมิภาคในไอโซฟอร์มโครงสร้าง กรดอะมิโนได้ลำดับ 14 ซ้ำเป็นเหมือนกัน และก็เหมือน ubiquitins พืชอื่น ๆการใช้หลักฐานที่เฉพาะเจาะจง ซึ่งวิธีการและแสดงให้เห็นว่า ubi-1 ubi-2 แสดง constitutively ที่ 25 องศา C แต่ inducible ไปยังระดับที่สูงขึ้น ที่อุณหภูมิสูงในข้าวโพด และกล้าไม้ มีทั้งยีน iNtRON ใน 5 ' untranslated ซึ่งมีเขตแปรรูปตามบทสรุป ช็อกความร้อนที่รุนแรงการถอดความเริ่มเว็บไซต์ของ ubi-1 ได้รับการพิจารณาและลอง 0.9 kb ฟิวชั่นของ 5 ' flanking region และทั้ง 5 ' ลำดับการแปลของ ubi-1 กับรหัสลำดับของยีนนักข่าวโมเลกุลของสอะของการเข้ารหัส ( แมว ) ถูกสร้างขึ้น ( pubi แมว )แมวพยายามสกัด electroporated เลสนี้สร้างแสดงให้เห็นว่าข้างนอกมียีนที่เกี่ยวข้องในระดับสูงของแมวการแสดงออกในข้าวโพดและเซลล์พืชใบเลี้ยงเดี่ยวอื่นๆแต่ไม่ได้อยู่ในโปรโตพลาสต์ของพืชใบเลี้ยงคู่ใบยาสูบการแสดงออกจากการ ubi-1 ของ pubi แมวผลผลิตมากกว่า 10 เท่า สูงกว่าระดับของกิจกรรมในข้าวโพดพบแมวมากกว่าการแสดงออกจากการใช้กันอย่างแพร่หลายกะหล่ำดอกฝังไวรัส 35s โปรโมเตอร์ของ 35s-cat สร้าง ในทางกลับกัน ในกิจกรรมจากการถอดความของโปรโตพลาสต์ยาสูบแมวแมว pubi น้อยกว่าหนึ่งในสิบของระดับจาก p35s แมว