2.2.2. Extraction method• Take half

2.2.2. Extraction method
• Take half of a young dry leaf and cut it into small pieces (see Fig. 1 for
illustration) then grind it using a porcelain mortar and pestle in 400 μl
of the extraction buffer. Add more buffer until it reaches a final volume
of 1200 μl in order to have enough homogenate to place into
microfuge tube. Harvest the homogenate into 1.7 ml microfuge tubes.
• Spin (13,500 rpm, 4 min, RT) using a microcentrifuge.
• Transfer the supernatant into a new microfuge tube and add an
equal volume of isopropanol (500 μl in our study) and mix gently by
inversion. Place the mixture on ice for 5 min.
• Spin (13,500 rpm, 4 min, RT) using a microcentrifuge.
• Discard the supernatant and wash the DNA pellet with 500 μl 70%
(v/v) ethanol.
• Spin (13,500 rpm, 2 min, RT) using a table microcentrifuge.
• Discard the ethanol. Blot away the excess ethanol from the pellet by
inverting/placing it on a clean paper-towel. Let the pellet air-dry.
• Dissolve the DNA in 50 μl ddH2O and store it at 4 °C for immediate use
or −20 °C for long-term storage. If the lab is equipped with a −80 °C
freezer, we recommend storing at −80 °C for long-term storage in
order to preserve the quality.
2.3. PCR amplification and gel electrophoresis
The PCR was carried out in accordance to the Quanta Biosciences kit
recommendations. The total volume of PCR mixture was 20 μl and
comprised of 10 μl of master mix [AccuStart II PCR ToughMix (2×)],
4 μl template DNA, 1 μl of each primer (forward and reverse) and 4 μl
water.
The reaction PCR reaction was performed in a thermal cycler (BIORAD;
T100™) using an initial 94 °C denaturing step for 3 min followed

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.2.2 การสกัดด้วยวิธีการ•ใช้ใบไม้แห้งเล็กครึ่งหนึ่ง และตัดเป็นชิ้นเล็ก ๆ (ดู 1 Fig. สำหรับภาพประกอบ) แล้วบดโดยใช้ครกเครื่องเคลือบดินเผา และ pestle ใน 400 μlบัฟเฟอร์สกัด เพิ่มบัฟเฟอร์เพิ่มเติมจนกว่าจะถึงเล่มสุดท้ายของ μl 1200 ต้อง homogenate พอจะวางลงในหลอด microfuge เกี่ยว homogenate ที่เป็นหลอด microfuge 1.7 ml•หมุน (13,500 รอบต่อนาที 4 นาที RT) โดยใช้การ microcentrifuge•โอน supernatant ที่เป็นหลอด microfuge ใหม่ และเพิ่มการเท่ากับปริมาตรของ isopropanol (500 μl ในการศึกษาของเรา) และผสมเบา ๆ โดยกลับ ใส่ส่วนผสมในน้ำแข็ง 5 นาที•หมุน (13,500 รอบต่อนาที 4 นาที RT) โดยใช้การ microcentrifuge•ละทิ้งการ supernatant และล้างเม็ดดีเอ็นเอ ด้วย 500 μl 70%เอทานอล (v/v)•หมุน (13,500 รอบต่อนาที 2 นาที RT) ใช้ microcentrifuge ตาราง•ยกเลิกการเอทานอล เอทานอลเกินจากเม็ดโดยเก็บทำลายสีตรงกันข้าม/วางไว้บนผ้ากระดาษทำความสะอาด ให้เม็ด air-dry•ละลายดีเอ็นเอใน 50 μl ddH2O และเก็บไว้ที่ 4 ° C สำหรับการใช้งานทันทีหรือ −20 ° C สำหรับการเก็บระยะยาว ถ้าห้องปฏิบัติการที่ มีการ −80 ° Cตู้แช่ เราขอแนะนำให้เก็บที่ −80 ° C สำหรับการเก็บระยะยาวในสั่งการรักษาคุณภาพ2.3. PCR electrophoresis ขยายและเจลPCR จะถูกดำเนินการในชุด Quanta เวลาออกคำแนะนำ ปริมาตรรวมของส่วนผสม PCR ถูก 20 μl และประกอบด้วย 10 μl ของผสมหลัก [AccuStart II PCR ToughMix (2 ราย)],ดีเอ็นเอแม่แบบ μl 4, μl 1 พื้นแต่ละ (ไปข้างหน้า และย้อนกลับ) และ 4 μlน้ำทำปฏิกิริยาปฏิกิริยา PCR ใน cycler ร้อน (BIORADT100 ™) ใช้ denaturing เริ่มต้น 94 ° C มีขั้นตอนใน 3 นาทีด้วย

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.2.2 วิธีการสกัด
•ใช้เวลาครึ่งหนึ่งของใบอ่อนแห้งและตัดเป็นชิ้นเล็ก ๆ (ดูรูป. 1 สำหรับ
ภาพประกอบ) จากนั้นบดโดยใช้ครกสากและพอร์ซเลนใน 400 ไมโครลิตร
ของ buffer สกัด เพิ่มบัฟเฟอร์มากขึ้นจนกว่าจะถึงเล่มสุดท้าย
1200 ไมโครลิตรเพื่อให้มี homogenate พอที่จะวางลงไปใน
หลอด microfuge เก็บเกี่ยว homogenate ลง 1.7 มล. หลอด microfuge.
•ปั่น (13,500 รอบต่อนาที, 4 นาที, RT) โดยใช้ไมโคร.
•โอนใสลงในหลอด microfuge ใหม่และเพิ่ม
ปริมาณที่เท่ากันของ isopropanol (500 ไมโครลิตรในการศึกษาของเรา) และผสมเบา ๆ โดย
การผกผัน ส่วนผสมวางบนน้ำแข็งเป็นเวลา 5 นาที.
•ปั่น (13,500 รอบต่อนาที, 4 นาที, RT) โดยใช้ไมโคร.
•ใสทิ้งและล้างเม็ดดีเอ็นเอ 500 ไมโครลิตร 70%
(v / v) เอทานอล.
•ปั่น (13,500 รอบต่อนาที 2 นาที, RT) โดยใช้ไมโครตาราง.
•ทิ้งเอทานอล ลบออกเอทานอลส่วนเกินจากเม็ดโดย
inverting / วางไว้บนกระดาษทำความสะอาดผ้าขนหนู ให้เม็ดแห้ง.
•ละลายดีเอ็นเอใน 50 ไมโครลิตร ddH2O และเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียสใช้งานได้ทันที
หรือ -20 ° C สำหรับการจัดเก็บระยะยาว หากห้องปฏิบัติการเป็นอุปกรณ์ที่มี -80 ° C
ตู้แช่แข็งเราขอแนะนำให้จัดเก็บที่ -80 องศาเซลเซียสสำหรับการจัดเก็บในระยะยาว
เพื่อที่จะรักษาคุณภาพ.
2.3 ขยาย PCR และข่าวคราว
PCR ได้ดำเนินการตามควอนตั้มชีววิทยาศาสตร์ชุด
คำแนะนำ ปริมาณรวมของส่วนผสม PCR 20 ไมโครลิตรและ
ประกอบด้วย 10 ไมโครลิตรผสมต้นแบบ [AccuStart II PCR ToughMix (2 ×)]
4 ไมโครลิตรดีเอ็นเอแม่แบบ 1 ไมโครลิตรของแต่ละไพรเมอร์ (ไปข้างหน้าและย้อนกลับ) และ 4 ไมโครลิตร
น้ำ.
ปฏิกิริยา ปฏิกิริยา PCR ได้ดำเนินการใน Cycler ร้อน (Biorad;
T100 ™) โดยเริ่มต้นที่ 94 ° C ขั้นตอน denaturing เป็นเวลา 3 นาทีตาม

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.2.2 . วิธีสกัด
- ครึ่งนึงของเด็กใบแห้ง หั่นเป็นชิ้นเล็ก ๆ ( ดูรูปที่ 1 เพื่อ
ภาพประกอบ ) แล้วบดด้วยครกและสากในพอร์ซเลน 400 μ L
ของบัฟเฟอร์ในการสกัด เพิ่มบัฟเฟอร์มากขึ้น จนกระทั่งมาถึงเล่มสุดท้ายของμ
1200 ลิตร เพื่อให้มีปริมาณเพียงพอที่จะใส่เข้าไปในหลอด microfuge
. เก็บแยกเป็น 1.7 มล. microfuge หลอด .
- ปั่น ( 13500 รอบต่อนาที , 4 นาที , RT ) โดยใช้ไมโครเซนตริฟิวจ์ .
- โอนสูงเป็นหลอด microfuge ใหม่และเพิ่มปริมาณเท่ากันของไอโซโพรพานอล
( 500 μฉันในการศึกษาของเรา ) และผสมเบา ๆด้วย
การกลับกัน ที่ผสมในน้ำแข็งเป็นเวลา 5 นาที
- ปั่น ( 500 รอบต่อนาที , 4 นาที , RT ) โดยใช้ไมโครเซนตริฟิวจ์ .
- ทิ้งและล้างเม็ดนำดีเอ็นเอกับ 500 μผม 70 %
( v / v ) เอทานอล .
- ปั่น ( 13 , 500 รอบต่อนาที , 2 นาทีRT ) โดยใช้ตารางไมโครเซนตริฟิวจ์ .
- ทิ้งเอทานอล เปรอะเปื้อนไปเอทานอลส่วนเกินจากอาหารเม็ดโดย
กลับหัว / วางมันบนกระดาษผ้าเช็ดตัวสะอาด ให้เม็ดอากาศแห้ง .
- ละลาย DNA ใน 50 μผม ddh2o และเก็บไว้ที่ 4 ° C เพื่อใช้งานได้ทันที
หรือ− 20 ° C สำหรับการจัดเก็บระยะยาว ถ้าเป็นแล็ปพร้อมกับ− 80 ° C
ตู้แช่ เราแนะนำให้เก็บรักษาที่อุณหภูมิ 80 องศา C −สำหรับการเก็บข้อมูลระยะยาวใน
เพื่อรักษาคุณภาพ
2.3 และวิธี PCR (
เจล PCR พบว่าสอดคล้องกับ Quanta ชีววิทยาศาสตร์ Kit
แนะนำ ปริมาณรวมของส่วนผสม PCR คือ 20 μลิตรและ 10 ลิตร
ประกอบด้วยμ Master Mix [ accustart II PCR toughmix ( 2 × ) ] ,
4 L μแม่แบบดีเอ็นเอ 1 μ L ของแต่ละสี ( ไปข้างหน้าและย้อนกลับ ) และน้ำ 4 ลิตร

μ .ปฏิกิริยา PCR ปฏิกิริยาแสดงในรอบความร้อน ( biorad ;
T100 ™ ) โดยใช้เริ่มต้น 94 °องศาเซลเซียสนาน 3 นาทีี่ก้าวตาม