methodThe phosphoramidite method of

method

The phosphoramidite method of DNA synthesis is currently considered as the standard synthesis method used in most automated synthesizers today. This method allows achieving the high coupling efficiencies needed to synthesize longer and longer oligonucleotides with low amounts of failure sequences. The oligonucleotide phosphoramidite synthesis chemistry was introduced nearly 20 years ago (McBride and Caruthers, 1983). Building blocks used for synthesis are commonly referred to as “monomers”, which are activated DNA nucleosides (phosphoramidites). The dimethoxytrityl (DMT) group is used to protect the 5’-end of the nucleoside, a β-cyanoethyl group protects the 3’-phosphite moiety, and may also include additional groups that serve to protect reactive primary amines in the heterocyclic nucleo bases. The protecting groups are selected to prevent branching or other undesirable side reactions from occurring during synthesis. Oligonucleotides are synthesized on solid supports. Typically, the support is a small column filled with control pore glass (CPG), polystyrene or a membrane. The oligonucleotide is usually synthesized from the 3’ to the 5’. The synthesis begins with the addition of a reaction column loaded with the initial support-bound protected nucleotide into the column holder of the synthesizer. The first nucleotide building block or monomer is usually anchored to a long chain alkylamine-controlled pore glass (LCAA-CPG).

A schematic diagram general outline the solid phase oligonucleotide synthesis of a dinucleotide is illustrated below.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วิธีPhosphoramidite วิธีการสังเคราะห์ดีเอ็นเอในปัจจุบันถือเป็นวิธีการสังเคราะห์มาตรฐานที่ใช้ในซินธิไซเซอร์อัตโนมัติสุดวันนี้ วิธีนี้ช่วยให้บรรลุประสิทธิภาพสูงเชื่อมต้องสังเคราะห์อีกต่อไป และลำดับ oligonucleotides ยาวกับปริมาณต่ำของความล้มเหลว ทางเคมีการสังเคราะห์ oligonucleotide phosphoramidite นำมาเกือบ 20 ปี (ไฮและ Caruthers, 1983) บล็อกที่ใช้สำหรับการสังเคราะห์จะมักเรียกว่า "โมโนเมอร์" ซึ่งเป็นดีเอ็นเอทั้งงาน (phosphoramidites) ใช้กลุ่ม dimethoxytrityl (DMT) เพื่อปกป้อง 5'-สิ้นสุดการ nucleoside กลุ่มβ-cyanoethyl ปกป้อง moiety 3'-phosphite และอาจรวมถึงกลุ่มเพิ่มเติมเพื่อป้องกันปฏิกิริยาเอมีนหลักในฐาน nucleo ๔๒๓ กลุ่มปกป้องไว้เพื่อป้องกันไม่ให้โยงหัวข้อ หรือปฏิกิริยาข้างเคียงที่ไม่พึงประสงค์เกิดขึ้นระหว่างการสังเคราะห์ มีสังเคราะห์ oligonucleotides บนไม้รองรับ โดยทั่วไป การสนับสนุนเป็นคอลัมน์เล็ก ๆ เต็มไป ด้วยการควบคุมรูขุมขนแก้ว (CPG), สไตหรือเยื่อหุ้มเซลล์ Oligonucleotide มักจะถูกสังเคราะห์จาก 3' ไปยัง 5' การสังเคราะห์เริ่มต้น ด้วยการเพิ่มคอลัมน์ปฏิกิริยาโหลด ด้วยอิพอกป้องกันขอบสนับสนุนการเริ่มต้นเป็นเจ้าของคอลัมน์ของการสังเคราะห์ กลุ่มอาคารของนิวคลีโอไทด์หรือน้ำยาแรกมักยึดแก้วรูขุมขนควบคุม alkylamine สายโซ่ยาว (LCAA-CPG)แบบไดอะแกรมแผนผังสังเขปการ dinucleotide การสังเคราะห์ oligonucleotide ของแข็งมีภาพประกอบด้านล่าง

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วิธีการ

วิธีการ phosphoramidite ของการสังเคราะห์ดีเอ็นเอขณะนี้ถือเป็นวิธีการสังเคราะห์มาตรฐานที่ใช้ในการสังเคราะห์อัตโนมัติที่สุดในวันนี้ วิธีการนี้จะช่วยให้บรรลุประสิทธิภาพการมีเพศสัมพันธ์สูงที่จำเป็นในการสังเคราะห์อีกต่อไปและ oligonucleotides อีกต่อไปกับจำนวนเงินที่ต่ำของลำดับความล้มเหลว เคมีสังเคราะห์ oligonucleotide phosphoramidite ถูกนำมาเกือบ 20 ปีที่ผ่านมา (ไบรด์และ Caruthers, 1983) กลุ่มอาคารที่ใช้สำหรับการสังเคราะห์มักจะถูกเรียกว่า "โมโนเมอร์" ซึ่งจะเปิดใช้งาน nucleosides ดีเอ็นเอ (phosphoramidites) dimethoxytrityl (DMT) กลุ่มที่มีการใช้เพื่อป้องกัน 5'-end nucleoside กลุ่มβ-cyanoethyl ปกป้องครึ่ง 3'-phosphite และยังอาจรวมถึงกลุ่มอื่น ๆ ที่ทำหน้าที่ในการปกป้องเอมีนหลักปฏิกิริยาในฐาน Nucleo heterocyclic . กลุ่มปกป้องได้รับการคัดเลือกเพื่อป้องกันการแตกแขนงหรืออื่น ๆ ที่เกิดปฏิกิริยาข้างเคียงที่ไม่พึงประสงค์เกิดขึ้นในระหว่างการสังเคราะห์ oligonucleotides มีการสังเคราะห์ในการสนับสนุนที่แข็งแกร่ง โดยปกติแล้วการสนับสนุนเป็นคอลัมน์เล็ก ๆ ที่เต็มไปด้วยกระจกควบคุมรูขุมขน (CPG), สไตรีนหรือเมมเบรน oligonucleotide มักจะสังเคราะห์จาก 3 'ไป 5' การสังเคราะห์เริ่มต้นด้วยนอกเหนือจากคอลัมน์ปฏิกิริยาที่เต็มไปด้วยการสนับสนุนเริ่มต้นที่ถูกผูกไว้เบื่อหน่ายการป้องกันเข้าไปในช่องใส่คอลัมน์สังเคราะห์ที่ กลุ่มอาคารเบื่อหน่ายแรกหรือโมโนเมอร์มักจะติดกับโซ่ยาว alkylamine ควบคุมกระจกรูขุมขน (LCAA-CPG).

แผนผังแผนภาพปริทัศน์การสังเคราะห์เฟส oligonucleotide มั่นคงของ dinucleotide จะแสดงด้านล่าง