To verify the identity of the CtLIP

To verify the identity of the CtLIP as an extracellular lipase
gene and to produce the recombinant enzyme in high yield,
the yeast P. pastoris was chosen as a suitable host system for
heterologous expression of CtLIP because of its high secretion
efficiency (Cregg et al., 1993). MM-rhodamine B plates
containing triglycerides from olive oil were used because
they met the strict definition required for a lipase substrate
and could serve to distinguish between lipases and esterase
(Bigey et al., 2003). After 4 days of incubation, it was found
that 85% of the P. pastoris transformants exhibited lipase
activity. Figure 5 shows example colonies No. 1, 2, 3, 4, 5 and
7 showing fluorescence halos upon UV illumination. By
contrast, the strain GS115 transformed with empty vector
(pPIC9K) and colony no. 6 showed no fluorescence indicating
absence of lipase activity (Fig. 5).
Further tests in liquid medium (BMM) showed maximum
lipase activity in the culture medium after 144 h of
cultivation (33UmL1) (Fig. 6) and confirmed that CtLIP
was expressed as a functional lipase. Moreover, the activity
of the secreted recombinant lipase is more than 12 times
higher than that obtained with C. thermophila.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การตรวจสอบข้อมูลประจำตัวของ CtLIP ที่เป็นเอนไซม์ไลเปส extracellularยีนและ การผลิตเอนไซม์ recombinant ผลตอบแทนสูงเลือกเป็นระบบโฮสต์ที่เหมาะสมสำหรับยีสต์ P. pastorisค่า heterologous ของ CtLIP เนื่องจาก มีการหลั่งสูงประสิทธิภาพ (Cregg et al., 1993) มม.-rhodamine B แผ่นระดับไตรกลีเซอไรด์ที่มีจากน้ำมันมะกอกใช้ได้เนื่องจากพวกเขาได้พบข้อกำหนดเข้มงวดที่จำเป็นสำหรับพื้นผิวเอนไซม์ไลเปสและสามารถแยกความแตกต่างระหว่าง lipases esterase(Bigey et al., 2003) หลังจาก 4 วันของคณะทันตแพทยศาสตร์ พบว่า 85% ของ transformants P. pastoris จัดแสดงเอนไซม์ไลเปสกิจกรรมการ รูปที่ 5 แสดงอาณานิคมอย่างหมายเลข 1, 2, 3, 4, 5 และ7 แสดง halos fluorescence เมื่อรัศมีรังสียูวี โดยสายพันธุ์ GS115 เวกเตอร์ว่างที่แตกต่าง ความคมชัด(pPIC9K) และอาณานิคมหมายเลข 6 แสดงให้เห็นว่า fluorescence ไม่ระบุการขาดงานของกิจกรรมเอนไซม์ไลเปส (Fig. 5)ทดสอบเพิ่มเติมในของเหลว (BMM) พบสูงสุดกิจกรรมเอนไซม์ไลเปสในสื่อวัฒนธรรมหลัง h 144 ของเพาะปลูก (33UmL 1) (Fig. 6) และได้รับการยืนยันที่ CtLIPถูกแสดงเป็นเอนไซม์ไลเปสที่ทำงาน นอกจากนี้ กิจกรรมเอนไซม์ไลเปสที่ recombinant secreted เป็นมากกว่า 12 ครั้งสูงกว่าที่รับกับ C. thermophila

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เพื่อตรวจสอบตัวตนของ CtLIP
ที่เป็นเอนไซม์ไลเปสสารของยีนและการผลิตเอนไซม์recombinant
ในผลผลิตสูงยีสต์P. pastoris
ที่ถูกเลือกให้เป็นระบบโฮสต์ที่เหมาะสมสำหรับการแสดงออกของheterologous CtLIP
เพราะหลั่งสูงที่มีประสิทธิภาพ(Cregg et al, , 1993) MM-rhodamine B แผ่นที่มีไตรกลีเซอไรด์จากน้ำมันมะกอกถูกนำมาใช้เพราะพวกเขาได้พบความหมายที่เข้มงวดที่จำเป็นสำหรับการตั้งต้นเอนไซม์ไลเปสและสามารถให้บริการที่จะแยกแยะระหว่างไลเปสและesterase (Bigey et al., 2003) หลังจากวันที่ 4 ของการบ่มมันก็พบว่า85% ของ transformants พี pastoris เอนไซม์ไลเปสแสดงกิจกรรม รูปที่ 5 ตัวอย่างที่แสดงให้เห็นอาณานิคมฉบับที่ 1, 2, 3, 4, 5 และ7 แสดงรัศมีเรืองแสงเมื่อส่องสว่างรังสียูวี โดยคมชัด GS115 ความเครียดเปลี่ยนกับเวกเตอร์ที่ว่างเปล่า (pPIC9K) และอาณานิคมไม่มี 6 แสดงให้เห็นการเรืองแสงที่ระบุไม่มีตัวตนของกิจกรรมเอนไซม์ไลเปส(รูปที่. 5). การทดสอบต่อไปในอาหารเหลว (BMM) พบสูงสุดกิจกรรมเอนไซม์ไลเปสในอาหารเลี้ยงเชื้อหลังจาก144 ชั่วโมงของการเพาะปลูก(? 33UmL? 1) (รูปที่. 6) และได้รับการยืนยันว่า CtLIP ถูกแสดงเป็นเอนไซม์ไลเปสที่ทำงาน นอกจากนี้ยังมีกิจกรรมของเอนไซม์ไลเปส recombinant หลั่งมากกว่า 12 ครั้งสูงกว่าที่ได้รับกับซีthermophila

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เพื่อยืนยันตัวตนของ ctlip เป็นยีนไลเปส
extracellular และผลิตเอนไซม์ recombinant ในผลผลิตสูง
ยีสต์หน้า pastoris ได้รับเลือกเป็นระบบโฮสต์ที่เหมาะสมสำหรับชนิดของ ctlip
การแสดงออกเพราะประสิทธิภาพการหลั่ง
สูง ( cregg et al . , 1993 ) อืมโรดามีน บีประกอบด้วยไตรกลีเซอไรด์จากน้ำมันมะกอกจาน

ใช้เพราะพวกเขาพบนิยามเข้มงวดที่จำเป็นสำหรับเอนไซม์ตั้งต้น
และสามารถใช้ในการแยกความแตกต่างระหว่างเขาและ esterase
( bigey et al . , 2003 ) หลังจาก 4 วันของการบ่มพบ
ว่า 85% ของหน้า pastoris transformants มีกิจกรรมเอนไซม์

รูปที่ 5 แสดงตัวอย่างอาณานิคมหมายเลข 1 , 2 , 3 , 4 , 5 และ 7 แสดงรัศมีเรืองแสงบน
แสงยูวี โดย
ความคมชัดสายพันธุ์ gs115 เปลี่ยนกับ
เวกเตอร์ที่ว่างเปล่า ( ppic9k ) และอาณานิคมหมายเลข 6 ไม่พบการขาดกิจกรรมของไลเปสแสดง

( รูปที่ 5 ) การทดสอบเพิ่มเติมในอาหารเหลว ( BMM ) พบกิจกรรมของเอนไซม์สูงสุด
ในวัฒนธรรมกลางหลังของ 144 H
การเพาะปลูก (  33uml  1 ) ( ภาพที่ 6 ) และ ยืนยันว่า ctlip
ถูกแสดงเป็นเอนไซม์หน้าที่ นอกจากนี้ กิจกรรม
ของโปรตีนที่หลั่งเอนไซม์มากกว่า 12 ครั้ง
ที่สูงกว่าที่ได้รับกับ C thermophila .