- ข้อความ
- ประวัติศาสตร์
composition was attained by using a
composition was attained by using a dedicated software, controlling
the pump. Before and during the analyses, a degassing unit
avoided any bubble formation.
The three different stationary phases investigated (PinnacleTM II
CN, PinnacleTM II C18, PinnacleTM II Phenyl) were purchased in bulk
from Restek Corporation (Bellefonte, PA, USA). All of them were
silica-based and had the same particle and pore size (3m and
110Å, respectively).
2.2. Instrumentation
An UltimateTM Capillary HPLC unit from LC Packings Dionex
(Amsterdam, The Netherlands), equipped with a manual sample
injector and a flow splitting unit, was employed for nano-LC experiments.
The injector devicewas a lowdispersion six-port valve from
VICI VALCO Instrumentations (Houston, TX, USA) equipped with
a 1L external loop. The separated compounds were detected by
on-column UV/Vis spectra at 205 nm.
The capillary columns were directly connected to the injector
valve in order to reduce dead volumes and avoid any band broadening
effects.
All columns were laboratory-packed and -prepared (100m
ID×375m OD, 25.0cm packed, 25.5cm effective length). Fused
silica capillaries were purchased from Composite Metal Services
(Hallow,Worcestershire, UK).
The temperature of the chromatographic systemwas controlled
by continuous room conditioning.
The pump and detector were controlled by ChromeleonTM
Chromatography Management System Software (Version 6.6, LC
Packings) and ChromQuest Version 3.0, Thermo Finnigan (St. Jose,
CA, USA), respectively.
2.3. Preparation of packed capillaries
The three columns used in this study were prepared following a
previously described method [20].
Briefly, one end of each capillarywas connected to amechanical
temporary frit (Valco, Houston, TX, USA) used to retain the packing
material, while the other end was attached to a 10 cm×4.1mm ID
stainless steel HPLC pre-column (Valco), used as reservoir for the
slurry.
Each slurry was prepared suspending about 20mg of the
selected stationary phase in 1mL of acetone. The suspension
obtained was sonicated for 10min, transferred to the reservoir and
pumped through the empty capillary by using a PerkinElmer series
10 LC pump (Palo Alto, CA, USA) at a pressure of 35MPa (350 bar,
5000 psi) and for a length of about 30.0 cm. During this step, each
capillary was ultrasonicated in a water bath, in order to obtain a
homogeneous stationary-phase bed structure. Then, each capillary
was washed for 15 min using a 5mM NaCl solution at a pressure of
35MPa. The NaCl solution was necessary because frits were not
obtained with the use of water. A series of salt concentrations
were tested in the 2–30mM range, with the best results, concerning
stability and permeability of syntherized frits, attained at
5mM.
A laboratory-made electrical heated wire was used to prepare
inlet and outlet frits, by simply heating the capillary at about 700 ◦C
for 7–8 s. The heating process modifies the physicochemical properties
of the silica that becomes permeable to solventswhile blocking
the stationary phase. Temperature and heating times are very critical
for the appropriate frit permeability and robustness; therefore
these parameters were optimized experimentally. During the following
phase, the temporary frit was removed, and the excess of
stationary phase eliminated in the back-flush mode.
The detection windows were prepared by removing the outer
polyimide layer with a razor, for a length of about 0.5 cm, close to
the outlet frit. An optical microscopewas used to monitor the whole
procedure. Finally, each capillary was cut to the desired length and
was equilibrated using a 50/50 (v/v) H2O/ACN mixture.
A mixture of three alkylbenzenes, namely benzene, toluene,
ethylbenzene (0.1% (v/v) each inwater),was used as test sample and
periodically injected in order to evaluate any possible modification
of the chromatographic performance of the three columns. The test
compounds were analyzed using a mobile phase mixture consisting
of ACN/H2O (80/20 (v/v)). The validity of the applied packing
procedure was demonstrated through the evaluation of efficiency,
peak tailing, peak shape and backpressure. The latter values were
compared with results previously obtained using capillary columns
packed with similar stationary phases.
2.4. Sample preparation
Each real-world sample, previously fortified with a mixture of
the eight selected pesticides, was subjected to LLE and SPE. The
LLE procedure was carried out by slightly modifying the method
proposed by Shen et al. [21].
Briefly, 5 g of each sample were introduced into 50mL plastic
centrifuge tubes and then 20mL of EtAcwere added. The centrifuge
tubewas capped tightly and subjected to sonication for 10min. The
tube was then centrifuged for 20min at 3000 rpm, and the upper
layer was transferred into a second centrifuge tube. The extraction
process was repeated twice, and the two extracts were combined.
Then, in order to remove any trace ofwater fromthe two combined
extracts, 4 g of anhydrous Na2SO4 were added and, after 10min,
the solution was carefully filtered through a filter paper (at atmospheric
pressure) in a 100mL boiling flask. The filtrate, evaporated
to dryness by using a rotary evaporator,was reconstituted with 2mL
of ACN, diluted with 4mL of water and subjected to SPE clean-up
process. SPE was performed by employing a Sep-Pak Vac C18 6cc
C18 cartridge (Waters, Milford, MA, USA), previously activated with
10mL of ACN and flushed with 10mL of deionizedwater. The crude
extract obtained by LLE, and reconstituted in ACN, was loaded onto
the cartridge. The cartridge was washed with 20mL of water and
dried under a stream of nitrogen for 5 min.
The purified sample was finally eluted with 10mL of ACN and,
after organic solvent evaporation, diluted to the desired concentration
in H2O/ACN, 9/1 (v/v). The final solution was then injected
directly in the nano-LC instrument, and analyzed under the optimized
operational conditions described in Section 3.
3. Results and discussion
3.1. Choice of the stationary phase
Initially, considerable attention was devoted to the development
of a nano-LC approach, suitable for the analysis of baby
food pesticides. In particular, the choice of the most appropriate
stationary phase, enabling the generation of a robust, stable and
efficient chromatographic column, appeared to be of fundamental
importance.
The characteristics of Pinnacle IITM seemed to be very promising
for complex matrix analysis; the studies published on Pinnacle
II PAH [22], Pinnacle II C18 [23] and Pinnacle DB C18 [24] have
confirmed the high versatility of these materials. Therefore, three
different Pinnacle II stationary phases (CN, C18 and phenyl) were
investigated, with the aim of establishing their analytical suitability.
Sixty nanoliters of the eight-pesticide standard mixture, prepared
by diluting each stock solution in H2O:ACN 50/50 (v/v) at
the 50g/mL concentration level, were analyzed under isocratic
elution conditions, on each column. In order to define the optimal
chromatographic conditions for each column, a series of parameters
were evaluated.
the pump. Before and during the analyses, a degassing unit
avoided any bubble formation.
The three different stationary phases investigated (PinnacleTM II
CN, PinnacleTM II C18, PinnacleTM II Phenyl) were purchased in bulk
from Restek Corporation (Bellefonte, PA, USA). All of them were
silica-based and had the same particle and pore size (3m and
110Å, respectively).
2.2. Instrumentation
An UltimateTM Capillary HPLC unit from LC Packings Dionex
(Amsterdam, The Netherlands), equipped with a manual sample
injector and a flow splitting unit, was employed for nano-LC experiments.
The injector devicewas a lowdispersion six-port valve from
VICI VALCO Instrumentations (Houston, TX, USA) equipped with
a 1L external loop. The separated compounds were detected by
on-column UV/Vis spectra at 205 nm.
The capillary columns were directly connected to the injector
valve in order to reduce dead volumes and avoid any band broadening
effects.
All columns were laboratory-packed and -prepared (100m
ID×375m OD, 25.0cm packed, 25.5cm effective length). Fused
silica capillaries were purchased from Composite Metal Services
(Hallow,Worcestershire, UK).
The temperature of the chromatographic systemwas controlled
by continuous room conditioning.
The pump and detector were controlled by ChromeleonTM
Chromatography Management System Software (Version 6.6, LC
Packings) and ChromQuest Version 3.0, Thermo Finnigan (St. Jose,
CA, USA), respectively.
2.3. Preparation of packed capillaries
The three columns used in this study were prepared following a
previously described method [20].
Briefly, one end of each capillarywas connected to amechanical
temporary frit (Valco, Houston, TX, USA) used to retain the packing
material, while the other end was attached to a 10 cm×4.1mm ID
stainless steel HPLC pre-column (Valco), used as reservoir for the
slurry.
Each slurry was prepared suspending about 20mg of the
selected stationary phase in 1mL of acetone. The suspension
obtained was sonicated for 10min, transferred to the reservoir and
pumped through the empty capillary by using a PerkinElmer series
10 LC pump (Palo Alto, CA, USA) at a pressure of 35MPa (350 bar,
5000 psi) and for a length of about 30.0 cm. During this step, each
capillary was ultrasonicated in a water bath, in order to obtain a
homogeneous stationary-phase bed structure. Then, each capillary
was washed for 15 min using a 5mM NaCl solution at a pressure of
35MPa. The NaCl solution was necessary because frits were not
obtained with the use of water. A series of salt concentrations
were tested in the 2–30mM range, with the best results, concerning
stability and permeability of syntherized frits, attained at
5mM.
A laboratory-made electrical heated wire was used to prepare
inlet and outlet frits, by simply heating the capillary at about 700 ◦C
for 7–8 s. The heating process modifies the physicochemical properties
of the silica that becomes permeable to solventswhile blocking
the stationary phase. Temperature and heating times are very critical
for the appropriate frit permeability and robustness; therefore
these parameters were optimized experimentally. During the following
phase, the temporary frit was removed, and the excess of
stationary phase eliminated in the back-flush mode.
The detection windows were prepared by removing the outer
polyimide layer with a razor, for a length of about 0.5 cm, close to
the outlet frit. An optical microscopewas used to monitor the whole
procedure. Finally, each capillary was cut to the desired length and
was equilibrated using a 50/50 (v/v) H2O/ACN mixture.
A mixture of three alkylbenzenes, namely benzene, toluene,
ethylbenzene (0.1% (v/v) each inwater),was used as test sample and
periodically injected in order to evaluate any possible modification
of the chromatographic performance of the three columns. The test
compounds were analyzed using a mobile phase mixture consisting
of ACN/H2O (80/20 (v/v)). The validity of the applied packing
procedure was demonstrated through the evaluation of efficiency,
peak tailing, peak shape and backpressure. The latter values were
compared with results previously obtained using capillary columns
packed with similar stationary phases.
2.4. Sample preparation
Each real-world sample, previously fortified with a mixture of
the eight selected pesticides, was subjected to LLE and SPE. The
LLE procedure was carried out by slightly modifying the method
proposed by Shen et al. [21].
Briefly, 5 g of each sample were introduced into 50mL plastic
centrifuge tubes and then 20mL of EtAcwere added. The centrifuge
tubewas capped tightly and subjected to sonication for 10min. The
tube was then centrifuged for 20min at 3000 rpm, and the upper
layer was transferred into a second centrifuge tube. The extraction
process was repeated twice, and the two extracts were combined.
Then, in order to remove any trace ofwater fromthe two combined
extracts, 4 g of anhydrous Na2SO4 were added and, after 10min,
the solution was carefully filtered through a filter paper (at atmospheric
pressure) in a 100mL boiling flask. The filtrate, evaporated
to dryness by using a rotary evaporator,was reconstituted with 2mL
of ACN, diluted with 4mL of water and subjected to SPE clean-up
process. SPE was performed by employing a Sep-Pak Vac C18 6cc
C18 cartridge (Waters, Milford, MA, USA), previously activated with
10mL of ACN and flushed with 10mL of deionizedwater. The crude
extract obtained by LLE, and reconstituted in ACN, was loaded onto
the cartridge. The cartridge was washed with 20mL of water and
dried under a stream of nitrogen for 5 min.
The purified sample was finally eluted with 10mL of ACN and,
after organic solvent evaporation, diluted to the desired concentration
in H2O/ACN, 9/1 (v/v). The final solution was then injected
directly in the nano-LC instrument, and analyzed under the optimized
operational conditions described in Section 3.
3. Results and discussion
3.1. Choice of the stationary phase
Initially, considerable attention was devoted to the development
of a nano-LC approach, suitable for the analysis of baby
food pesticides. In particular, the choice of the most appropriate
stationary phase, enabling the generation of a robust, stable and
efficient chromatographic column, appeared to be of fundamental
importance.
The characteristics of Pinnacle IITM seemed to be very promising
for complex matrix analysis; the studies published on Pinnacle
II PAH [22], Pinnacle II C18 [23] and Pinnacle DB C18 [24] have
confirmed the high versatility of these materials. Therefore, three
different Pinnacle II stationary phases (CN, C18 and phenyl) were
investigated, with the aim of establishing their analytical suitability.
Sixty nanoliters of the eight-pesticide standard mixture, prepared
by diluting each stock solution in H2O:ACN 50/50 (v/v) at
the 50g/mL concentration level, were analyzed under isocratic
elution conditions, on each column. In order to define the optimal
chromatographic conditions for each column, a series of parameters
were evaluated.
0/5000
องค์ประกอบที่ได้ โดยใช้ซอฟต์แวร์เฉพาะ การควบคุม
ปั๊ม ก่อน และ ระหว่าง วิเคราะห์ หน่วยการ degassing
หลีกเลี่ยงผู้แต่งฟองใด ๆ .
สอบสวน 3 เฟสเครื่องเขียนต่าง ๆ (PinnacleTM II
CN, PinnacleTM II C18, PinnacleTM II Phenyl) ซื้อในจำนวนมาก
จาก บริษัท Restek (Bellefonte, PA สหรัฐอเมริกา) ทั้งหมด
ใช้ซิลิกา และมีขนาดอนุภาคและรูขุมขนเดียวกัน (ม. 3 และ
110Å ตามลำดับ)
2.2 ใช้เครื่องมือ
หน่วยอัน UltimateTM รูพรุน HPLC จาก LC ลเครื่อง Dionex
(อัมสเตอร์ดัม ประเทศเนเธอร์แลนด์), พร้อมตัวอย่างด้วยตนเอง
อัดและขั้นตอนการแบ่งหน่วย ถูกจ้างสำหรับทดลองนาโน LC.
devicewas หัวฉีด lowdispersion หกพอร์ตวาล์วจาก
เครื่อง VALCO Instrumentations (Houston, TX สหรัฐอเมริกา) ที่เพียบพร้อมไปด้วย
วนภายนอก 1 L พบสารแยกโดย
แรมสเป็คตรา UV/Vis ในคอลัมน์ที่ 205 nm.
คอลัมน์เส้นเลือดฝอยได้ตรงกับความต้องการหัวฉีด
วาล์วเพื่อลดปริมาณคนตาย และหลีกเลี่ยงการใด ๆ วง broadening
ผลการ
คอลัมน์ทั้งหมดถูก บรรจุห้องปฏิบัติการ และ - เตรียม (100 m
ฟิลด์ ID OD, 25.0 ซม.บรรจุ 25.5 ซม.ผลยาว 375 เมตร) Fused
ซื้อซิลิก้าเลี้ยงจากโลหะผสมบริการ
(Hallow,Worcestershire, UK)
systemwas chromatographic ควบคุมอุณหภูมิ
โดยปรับห้องพักต่อเนื่อง
ปั๊มและเครื่องตรวจจับถูกควบคุม โดย ChromeleonTM
Chromatography จัดการระบบซอฟต์แวร์ (6.6 รุ่น LC
ลเครื่อง) และรุ่น ChromQuest 3.0 เทอร์โม Finnigan (St. Jose,
CA, USA), ตามลำดับ.
2.3 เตรียมรวบรวมเลี้ยง
สามคอลัมน์ที่ใช้ในการศึกษานี้ได้เตรียมการดังต่อไปนี้เป็น
ก่อนหน้านี้ อธิบายวิธีการ [20]
สั้น ๆ ปลายด้านหนึ่งของ capillarywas แต่ละการเชื่อมต่อกับ amechanical
ชั่วคราว frit (Valco, Houston, TX สหรัฐอเมริกา) ใช้ในการเก็บบันทึก
วัสดุ ในขณะที่อีกฝ่ายแนบกับ 10 cm × 4. มม. 1 ID
สเตนเลส HPLC ก่อนคอลัมน์ (Valco), ใช้เป็นอ่างเก็บน้ำสำหรับ
สารละลาย
แต่ละสารละลายที่เตรียมระงับประมาณ 20 มก.
ระยะกับที่เลือกใน 1mL ของอะซิโตน การระงับ
รับถูก sonicated สำหรับ 10 นาที การโอนย้ายไปอ่างเก็บน้ำ และ
สูบผ่านแรงเปล่าโดยชุด PerkinElmer
10 LC ปั๊ม (ดัลลัส CA, USA) ที่ความดัน 35MPa (350 บาร์,
5000 psi) และมีความยาวประมาณ 30.0 ซม. ในระหว่างขั้นตอนนี้ แต่ละ
แรงถูก ultrasonicated ในน้ำน้ำ เพื่อให้ได้เป็น
โครงสร้างเตียงเขียนเฟสเหมือนกัน แล้ว แต่ละแรง
ถูกล้างใน 15 นาทีใช้โซลูชัน NaCl 5 มม.ที่ความดันของ
35MPa โซลูชัน NaCl จำเป็นเนื่องจากไม่มี frits
ได้ ด้วยการใช้น้ำ ชุดของความเข้มข้นเกลือ
ทดสอบในช่วง 2 – 30 มม. มีผลลัพธ์ดีที่สุด เกี่ยวกับ
ความมั่นคงและ permeability ของ syntherized frits บรรลุที่
5 mM.
ทำห้องปฏิบัติการไฟฟ้าอุ่นลวดที่ใช้ในการเตรียม
ทางเข้าของและเต้าเสียบ frits โดยเพียงความร้อนแรงที่ ◦C ประมาณ 700
สำหรับ s 7-8 กระบวนการความร้อนปรับเปลี่ยนคุณสมบัติ physicochemical
ของซิลิกาที่ permeable บล็อก solventswhile
ระยะเครื่องเขียน อุณหภูมิและความร้อนเวลาเป็นสิ่งสำคัญมาก
permeability frit ที่เหมาะสมและเสถียรภาพ ดังนั้น
พารามิเตอร์เหล่านี้ถูกปรับ experimentally ในช่วงต่อไปนี้
ระยะ frit ชั่วคราวถูกเอาออก และเกินของ
ระยะเครื่องเขียนในโหมดหลังล้าง
windows ตรวจหาได้เตรียมออกหมายนอก
polyimide ชั้นกับมีดโกนหนวด สำหรับความยาวประมาณ 0.5 ซม. ปิดการ
frit เต้าเสียบ Microscopewas แสงที่ใช้ในการตรวจสอบทั้งหมด
กระบวนการ ในที่สุด แต่ละแรงถูกตัดตามระยะเวลาที่ระบุ และ
ถูก equilibrated โดยใช้ตัวแบบ (v/v) H2O/ACN ผสม
เป็นส่วนผสมของ alkylbenzenes สาม ได้แก่เบนซีน โทลูอีน,
เอทิล (inwater 0.1% (v/v) แต่ละ), ถูกใช้เป็นตัวอย่างทดสอบ และ
ฉีดเป็นระยะ ๆ เพื่อประเมินการปรับเปลี่ยนใด ๆ ได้
ทำงาน chromatographic ของคอลัมน์ที่สาม การทดสอบ
สารประกอบถูกวิเคราะห์โดยใช้การเคลื่อนระยะผสมประกอบด้วย
ของ ACN/H2O (80/20 (v/v)) มีผลบังคับใช้ของบันทึกใช้
ตอนที่แสดงถึงการประเมินประสิทธิภาพ,
tailing พีค รูปร่างสูง และ backpressure ค่าหลังถูก
เปรียบเทียบกับผลที่ได้รับก่อนหน้านี้ ใช้คอลัมน์เส้นเลือดฝอย
เต็มไป ด้วยคล้ายกับระยะการ
2.4 ตัวอย่างการเตรียม
แต่ละตัวอย่างจริง ธาตุก่อนหน้านี้ ด้วย
แปดเลือกยาฆ่าแมลง ถูกกักกัน LLE และ SPE ใน
LLE กระบวนถูกดำเนินการ โดยปรับเปลี่ยนวิธีการเล็กน้อย
เสนอโดย Shen et al. [21] .
สั้น ๆ g 5 ของแต่ละตัวอย่างถูกนำเข้าสู่ 50mL พลาสติก
เครื่องหมุนเหวี่ยงท่อ แล้ว 20mL ของ EtAcwere เพิ่ม เครื่องหมุนเหวี่ยง
tubewas ปรบมืออย่างใกล้ชิด และการ sonication สำหรับ 10 นาที ใน
หลอดถูก centrifuged แล้วสำหรับ 20 นาทีที่ 3000 รอบต่อนาที และบน
ชั้นถูกโอนย้ายไปยังหลอดเครื่องหมุนเหวี่ยงที่สอง สกัด
กระบวนการถูกซ้ำสองครั้ง และสารสกัดจากทั้งสองได้รวมกัน
แล้ว เพื่อออกติดตาม ofwater ใด ๆ สองรวม
สารสกัด 4 กรัมของ Na2SO4 ไดถูกเพิ่ม และ 10 นาที,
อย่างถูกกรองโซลูชันโดยใช้กระดาษกรอง (ที่บรรยากาศ
ความดัน) ใน 100 มลร้อนหนาว สารกรอง หายไป
กับความแห้งกร้านโดย evaporator โรตารี่ ถูก reconstituted กับ 2mL
ของ ACN ผสมกับ 4mL ของน้ำ และการ SPE ล้าง
กระบวนการ SPE ที่ดำเนินการ โดยใช้ 6cc C18 Vac Sep-ปาก
C18 ตลับหมึก (น้ำ ลฟอร์ด MA, USA), เรียกใช้ก่อนหน้านี้ ด้วย
10mL ของ ACN และล้าง ด้วย 10mL ของ deionizedwater ดิบ
สารสกัดได้รับ โดย LLE และ reconstituted ใน ACN ถูกโหลดลงใน
ตลับหมึก ตลับหมึกถูกล้าง ด้วยน้ำ 20mL และ
แห้งภายใต้กระแสของไนโตรเจนสำหรับ 5 นาที
ตัวอย่างบริสุทธิ์ถูกสุด eluted กับ 10mL ของ ACN และ,
หลังจากระเหยตัวทำละลายอินทรีย์ ผสมให้เข้มข้นต้อง
ใน H2O/ACN, 9/1 (v/v) การแก้ปัญหาสุดท้ายที่ฉีดแล้ว
ในเครื่อง LC นาโน และวิเคราะห์ภายใต้การเพิ่มประสิทธิภาพ
ปฏิบัติเงื่อนไขที่อธิบายไว้ในส่วนที่ 3
3 ผลลัพธ์และสนทนา
3.1 ทางเฟสกับ
ครั้งแรก ความสนใจมากที่ทุ่มเทการพัฒนา
ของนาโน LC วิธีการ เหมาะสำหรับการวิเคราะห์ของเด็ก
อาหารยาฆ่าแมลง โดยเฉพาะ ตัวเลือกที่เหมาะสมที่สุด
ระยะเครื่องเขียน การเปิดใช้งานการสร้างคอกที่แข็งแกร่ง และ
มีประสิทธิภาพคอลัมน์ chromatographic ปรากฏเป็นของพื้นฐาน
สำคัญ.
ลักษณะของพินนาเคิล IITM ดูเหมือนจะ มีแนวโน้มมาก
สำหรับการวิเคราะห์เมตริกซ์ที่ซับซ้อน ศึกษาการเผยแพร่บนพินนาเคิล
C18 พินนาเคิล II, II ละ [22] [23] และ C18 DB พินนาเคิล [24] มี
ยืนยันความคล่องตัวสูงวัสดุเหล่านี้ ดังนั้น สาม
อื่นพินนาเคิล II กับระยะ (CN, C18 และ phenyl) ถูก
สอบสวน มีจุดประสงค์เพื่อสร้างการวิเคราะห์ความเหมาะสม
nanoliters หกของผสมมาตรฐาน 8 แมลง เตรียม
โดย diluting แต่ละหุ้นโซลูชั่นในแบบ H2O:ACN (v/v) ที่
ระดับความเข้มข้น 50 g/mL มีวิเคราะห์ภายใต้ isocratic คิด
elution เงื่อนไข ในแต่ละคอลัมน์ การกำหนดดีที่สุด
chromatographic เงื่อนไขสำหรับแต่ละคอลัมน์ ชุดของพารามิเตอร์
ได้ประเมิน
ปั๊ม ก่อน และ ระหว่าง วิเคราะห์ หน่วยการ degassing
หลีกเลี่ยงผู้แต่งฟองใด ๆ .
สอบสวน 3 เฟสเครื่องเขียนต่าง ๆ (PinnacleTM II
CN, PinnacleTM II C18, PinnacleTM II Phenyl) ซื้อในจำนวนมาก
จาก บริษัท Restek (Bellefonte, PA สหรัฐอเมริกา) ทั้งหมด
ใช้ซิลิกา และมีขนาดอนุภาคและรูขุมขนเดียวกัน (ม. 3 และ
110Å ตามลำดับ)
2.2 ใช้เครื่องมือ
หน่วยอัน UltimateTM รูพรุน HPLC จาก LC ลเครื่อง Dionex
(อัมสเตอร์ดัม ประเทศเนเธอร์แลนด์), พร้อมตัวอย่างด้วยตนเอง
อัดและขั้นตอนการแบ่งหน่วย ถูกจ้างสำหรับทดลองนาโน LC.
devicewas หัวฉีด lowdispersion หกพอร์ตวาล์วจาก
เครื่อง VALCO Instrumentations (Houston, TX สหรัฐอเมริกา) ที่เพียบพร้อมไปด้วย
วนภายนอก 1 L พบสารแยกโดย
แรมสเป็คตรา UV/Vis ในคอลัมน์ที่ 205 nm.
คอลัมน์เส้นเลือดฝอยได้ตรงกับความต้องการหัวฉีด
วาล์วเพื่อลดปริมาณคนตาย และหลีกเลี่ยงการใด ๆ วง broadening
ผลการ
คอลัมน์ทั้งหมดถูก บรรจุห้องปฏิบัติการ และ - เตรียม (100 m
ฟิลด์ ID OD, 25.0 ซม.บรรจุ 25.5 ซม.ผลยาว 375 เมตร) Fused
ซื้อซิลิก้าเลี้ยงจากโลหะผสมบริการ
(Hallow,Worcestershire, UK)
systemwas chromatographic ควบคุมอุณหภูมิ
โดยปรับห้องพักต่อเนื่อง
ปั๊มและเครื่องตรวจจับถูกควบคุม โดย ChromeleonTM
Chromatography จัดการระบบซอฟต์แวร์ (6.6 รุ่น LC
ลเครื่อง) และรุ่น ChromQuest 3.0 เทอร์โม Finnigan (St. Jose,
CA, USA), ตามลำดับ.
2.3 เตรียมรวบรวมเลี้ยง
สามคอลัมน์ที่ใช้ในการศึกษานี้ได้เตรียมการดังต่อไปนี้เป็น
ก่อนหน้านี้ อธิบายวิธีการ [20]
สั้น ๆ ปลายด้านหนึ่งของ capillarywas แต่ละการเชื่อมต่อกับ amechanical
ชั่วคราว frit (Valco, Houston, TX สหรัฐอเมริกา) ใช้ในการเก็บบันทึก
วัสดุ ในขณะที่อีกฝ่ายแนบกับ 10 cm × 4. มม. 1 ID
สเตนเลส HPLC ก่อนคอลัมน์ (Valco), ใช้เป็นอ่างเก็บน้ำสำหรับ
สารละลาย
แต่ละสารละลายที่เตรียมระงับประมาณ 20 มก.
ระยะกับที่เลือกใน 1mL ของอะซิโตน การระงับ
รับถูก sonicated สำหรับ 10 นาที การโอนย้ายไปอ่างเก็บน้ำ และ
สูบผ่านแรงเปล่าโดยชุด PerkinElmer
10 LC ปั๊ม (ดัลลัส CA, USA) ที่ความดัน 35MPa (350 บาร์,
5000 psi) และมีความยาวประมาณ 30.0 ซม. ในระหว่างขั้นตอนนี้ แต่ละ
แรงถูก ultrasonicated ในน้ำน้ำ เพื่อให้ได้เป็น
โครงสร้างเตียงเขียนเฟสเหมือนกัน แล้ว แต่ละแรง
ถูกล้างใน 15 นาทีใช้โซลูชัน NaCl 5 มม.ที่ความดันของ
35MPa โซลูชัน NaCl จำเป็นเนื่องจากไม่มี frits
ได้ ด้วยการใช้น้ำ ชุดของความเข้มข้นเกลือ
ทดสอบในช่วง 2 – 30 มม. มีผลลัพธ์ดีที่สุด เกี่ยวกับ
ความมั่นคงและ permeability ของ syntherized frits บรรลุที่
5 mM.
ทำห้องปฏิบัติการไฟฟ้าอุ่นลวดที่ใช้ในการเตรียม
ทางเข้าของและเต้าเสียบ frits โดยเพียงความร้อนแรงที่ ◦C ประมาณ 700
สำหรับ s 7-8 กระบวนการความร้อนปรับเปลี่ยนคุณสมบัติ physicochemical
ของซิลิกาที่ permeable บล็อก solventswhile
ระยะเครื่องเขียน อุณหภูมิและความร้อนเวลาเป็นสิ่งสำคัญมาก
permeability frit ที่เหมาะสมและเสถียรภาพ ดังนั้น
พารามิเตอร์เหล่านี้ถูกปรับ experimentally ในช่วงต่อไปนี้
ระยะ frit ชั่วคราวถูกเอาออก และเกินของ
ระยะเครื่องเขียนในโหมดหลังล้าง
windows ตรวจหาได้เตรียมออกหมายนอก
polyimide ชั้นกับมีดโกนหนวด สำหรับความยาวประมาณ 0.5 ซม. ปิดการ
frit เต้าเสียบ Microscopewas แสงที่ใช้ในการตรวจสอบทั้งหมด
กระบวนการ ในที่สุด แต่ละแรงถูกตัดตามระยะเวลาที่ระบุ และ
ถูก equilibrated โดยใช้ตัวแบบ (v/v) H2O/ACN ผสม
เป็นส่วนผสมของ alkylbenzenes สาม ได้แก่เบนซีน โทลูอีน,
เอทิล (inwater 0.1% (v/v) แต่ละ), ถูกใช้เป็นตัวอย่างทดสอบ และ
ฉีดเป็นระยะ ๆ เพื่อประเมินการปรับเปลี่ยนใด ๆ ได้
ทำงาน chromatographic ของคอลัมน์ที่สาม การทดสอบ
สารประกอบถูกวิเคราะห์โดยใช้การเคลื่อนระยะผสมประกอบด้วย
ของ ACN/H2O (80/20 (v/v)) มีผลบังคับใช้ของบันทึกใช้
ตอนที่แสดงถึงการประเมินประสิทธิภาพ,
tailing พีค รูปร่างสูง และ backpressure ค่าหลังถูก
เปรียบเทียบกับผลที่ได้รับก่อนหน้านี้ ใช้คอลัมน์เส้นเลือดฝอย
เต็มไป ด้วยคล้ายกับระยะการ
2.4 ตัวอย่างการเตรียม
แต่ละตัวอย่างจริง ธาตุก่อนหน้านี้ ด้วย
แปดเลือกยาฆ่าแมลง ถูกกักกัน LLE และ SPE ใน
LLE กระบวนถูกดำเนินการ โดยปรับเปลี่ยนวิธีการเล็กน้อย
เสนอโดย Shen et al. [21] .
สั้น ๆ g 5 ของแต่ละตัวอย่างถูกนำเข้าสู่ 50mL พลาสติก
เครื่องหมุนเหวี่ยงท่อ แล้ว 20mL ของ EtAcwere เพิ่ม เครื่องหมุนเหวี่ยง
tubewas ปรบมืออย่างใกล้ชิด และการ sonication สำหรับ 10 นาที ใน
หลอดถูก centrifuged แล้วสำหรับ 20 นาทีที่ 3000 รอบต่อนาที และบน
ชั้นถูกโอนย้ายไปยังหลอดเครื่องหมุนเหวี่ยงที่สอง สกัด
กระบวนการถูกซ้ำสองครั้ง และสารสกัดจากทั้งสองได้รวมกัน
แล้ว เพื่อออกติดตาม ofwater ใด ๆ สองรวม
สารสกัด 4 กรัมของ Na2SO4 ไดถูกเพิ่ม และ 10 นาที,
อย่างถูกกรองโซลูชันโดยใช้กระดาษกรอง (ที่บรรยากาศ
ความดัน) ใน 100 มลร้อนหนาว สารกรอง หายไป
กับความแห้งกร้านโดย evaporator โรตารี่ ถูก reconstituted กับ 2mL
ของ ACN ผสมกับ 4mL ของน้ำ และการ SPE ล้าง
กระบวนการ SPE ที่ดำเนินการ โดยใช้ 6cc C18 Vac Sep-ปาก
C18 ตลับหมึก (น้ำ ลฟอร์ด MA, USA), เรียกใช้ก่อนหน้านี้ ด้วย
10mL ของ ACN และล้าง ด้วย 10mL ของ deionizedwater ดิบ
สารสกัดได้รับ โดย LLE และ reconstituted ใน ACN ถูกโหลดลงใน
ตลับหมึก ตลับหมึกถูกล้าง ด้วยน้ำ 20mL และ
แห้งภายใต้กระแสของไนโตรเจนสำหรับ 5 นาที
ตัวอย่างบริสุทธิ์ถูกสุด eluted กับ 10mL ของ ACN และ,
หลังจากระเหยตัวทำละลายอินทรีย์ ผสมให้เข้มข้นต้อง
ใน H2O/ACN, 9/1 (v/v) การแก้ปัญหาสุดท้ายที่ฉีดแล้ว
ในเครื่อง LC นาโน และวิเคราะห์ภายใต้การเพิ่มประสิทธิภาพ
ปฏิบัติเงื่อนไขที่อธิบายไว้ในส่วนที่ 3
3 ผลลัพธ์และสนทนา
3.1 ทางเฟสกับ
ครั้งแรก ความสนใจมากที่ทุ่มเทการพัฒนา
ของนาโน LC วิธีการ เหมาะสำหรับการวิเคราะห์ของเด็ก
อาหารยาฆ่าแมลง โดยเฉพาะ ตัวเลือกที่เหมาะสมที่สุด
ระยะเครื่องเขียน การเปิดใช้งานการสร้างคอกที่แข็งแกร่ง และ
มีประสิทธิภาพคอลัมน์ chromatographic ปรากฏเป็นของพื้นฐาน
สำคัญ.
ลักษณะของพินนาเคิล IITM ดูเหมือนจะ มีแนวโน้มมาก
สำหรับการวิเคราะห์เมตริกซ์ที่ซับซ้อน ศึกษาการเผยแพร่บนพินนาเคิล
C18 พินนาเคิล II, II ละ [22] [23] และ C18 DB พินนาเคิล [24] มี
ยืนยันความคล่องตัวสูงวัสดุเหล่านี้ ดังนั้น สาม
อื่นพินนาเคิล II กับระยะ (CN, C18 และ phenyl) ถูก
สอบสวน มีจุดประสงค์เพื่อสร้างการวิเคราะห์ความเหมาะสม
nanoliters หกของผสมมาตรฐาน 8 แมลง เตรียม
โดย diluting แต่ละหุ้นโซลูชั่นในแบบ H2O:ACN (v/v) ที่
ระดับความเข้มข้น 50 g/mL มีวิเคราะห์ภายใต้ isocratic คิด
elution เงื่อนไข ในแต่ละคอลัมน์ การกำหนดดีที่สุด
chromatographic เงื่อนไขสำหรับแต่ละคอลัมน์ ชุดของพารามิเตอร์
ได้ประเมิน
การแปล กรุณารอสักครู่..
composition was attained by using a dedicated software, controlling
the pump. Before and during the analyses, a degassing unit
avoided any bubble formation.
The three different stationary phases investigated (PinnacleTM II
CN, PinnacleTM II C18, PinnacleTM II Phenyl) were purchased in bulk
from Restek Corporation (Bellefonte, PA, USA). All of them were
silica-based and had the same particle and pore size (3m and
110Å, respectively).
2.2. Instrumentation
An UltimateTM Capillary HPLC unit from LC Packings Dionex
(Amsterdam, The Netherlands), equipped with a manual sample
injector and a flow splitting unit, was employed for nano-LC experiments.
The injector devicewas a lowdispersion six-port valve from
VICI VALCO Instrumentations (Houston, TX, USA) equipped with
a 1L external loop. The separated compounds were detected by
on-column UV/Vis spectra at 205 nm.
The capillary columns were directly connected to the injector
valve in order to reduce dead volumes and avoid any band broadening
effects.
All columns were laboratory-packed and -prepared (100m
ID×375m OD, 25.0cm packed, 25.5cm effective length). Fused
silica capillaries were purchased from Composite Metal Services
(Hallow,Worcestershire, UK).
The temperature of the chromatographic systemwas controlled
by continuous room conditioning.
The pump and detector were controlled by ChromeleonTM
Chromatography Management System Software (Version 6.6, LC
Packings) and ChromQuest Version 3.0, Thermo Finnigan (St. Jose,
CA, USA), respectively.
2.3. Preparation of packed capillaries
The three columns used in this study were prepared following a
previously described method [20].
Briefly, one end of each capillarywas connected to amechanical
temporary frit (Valco, Houston, TX, USA) used to retain the packing
material, while the other end was attached to a 10 cm×4.1mm ID
stainless steel HPLC pre-column (Valco), used as reservoir for the
slurry.
Each slurry was prepared suspending about 20mg of the
selected stationary phase in 1mL of acetone. The suspension
obtained was sonicated for 10min, transferred to the reservoir and
pumped through the empty capillary by using a PerkinElmer series
10 LC pump (Palo Alto, CA, USA) at a pressure of 35MPa (350 bar,
5000 psi) and for a length of about 30.0 cm. During this step, each
capillary was ultrasonicated in a water bath, in order to obtain a
homogeneous stationary-phase bed structure. Then, each capillary
was washed for 15 min using a 5mM NaCl solution at a pressure of
35MPa. The NaCl solution was necessary because frits were not
obtained with the use of water. A series of salt concentrations
were tested in the 2–30mM range, with the best results, concerning
stability and permeability of syntherized frits, attained at
5mM.
A laboratory-made electrical heated wire was used to prepare
inlet and outlet frits, by simply heating the capillary at about 700 ◦C
for 7–8 s. The heating process modifies the physicochemical properties
of the silica that becomes permeable to solventswhile blocking
the stationary phase. Temperature and heating times are very critical
for the appropriate frit permeability and robustness; therefore
these parameters were optimized experimentally. During the following
phase, the temporary frit was removed, and the excess of
stationary phase eliminated in the back-flush mode.
The detection windows were prepared by removing the outer
polyimide layer with a razor, for a length of about 0.5 cm, close to
the outlet frit. An optical microscopewas used to monitor the whole
procedure. Finally, each capillary was cut to the desired length and
was equilibrated using a 50/50 (v/v) H2O/ACN mixture.
A mixture of three alkylbenzenes, namely benzene, toluene,
ethylbenzene (0.1% (v/v) each inwater),was used as test sample and
periodically injected in order to evaluate any possible modification
of the chromatographic performance of the three columns. The test
compounds were analyzed using a mobile phase mixture consisting
of ACN/H2O (80/20 (v/v)). The validity of the applied packing
procedure was demonstrated through the evaluation of efficiency,
peak tailing, peak shape and backpressure. The latter values were
compared with results previously obtained using capillary columns
packed with similar stationary phases.
2.4. Sample preparation
Each real-world sample, previously fortified with a mixture of
the eight selected pesticides, was subjected to LLE and SPE. The
LLE procedure was carried out by slightly modifying the method
proposed by Shen et al. [21].
Briefly, 5 g of each sample were introduced into 50mL plastic
centrifuge tubes and then 20mL of EtAcwere added. The centrifuge
tubewas capped tightly and subjected to sonication for 10min. The
tube was then centrifuged for 20min at 3000 rpm, and the upper
layer was transferred into a second centrifuge tube. The extraction
process was repeated twice, and the two extracts were combined.
Then, in order to remove any trace ofwater fromthe two combined
extracts, 4 g of anhydrous Na2SO4 were added and, after 10min,
the solution was carefully filtered through a filter paper (at atmospheric
pressure) in a 100mL boiling flask. The filtrate, evaporated
to dryness by using a rotary evaporator,was reconstituted with 2mL
of ACN, diluted with 4mL of water and subjected to SPE clean-up
process. SPE was performed by employing a Sep-Pak Vac C18 6cc
C18 cartridge (Waters, Milford, MA, USA), previously activated with
10mL of ACN and flushed with 10mL of deionizedwater. The crude
extract obtained by LLE, and reconstituted in ACN, was loaded onto
the cartridge. The cartridge was washed with 20mL of water and
dried under a stream of nitrogen for 5 min.
The purified sample was finally eluted with 10mL of ACN and,
after organic solvent evaporation, diluted to the desired concentration
in H2O/ACN, 9/1 (v/v). The final solution was then injected
directly in the nano-LC instrument, and analyzed under the optimized
operational conditions described in Section 3.
3. Results and discussion
3.1. Choice of the stationary phase
Initially, considerable attention was devoted to the development
of a nano-LC approach, suitable for the analysis of baby
food pesticides. In particular, the choice of the most appropriate
stationary phase, enabling the generation of a robust, stable and
efficient chromatographic column, appeared to be of fundamental
importance.
The characteristics of Pinnacle IITM seemed to be very promising
for complex matrix analysis; the studies published on Pinnacle
II PAH [22], Pinnacle II C18 [23] and Pinnacle DB C18 [24] have
confirmed the high versatility of these materials. Therefore, three
different Pinnacle II stationary phases (CN, C18 and phenyl) were
investigated, with the aim of establishing their analytical suitability.
Sixty nanoliters of the eight-pesticide standard mixture, prepared
by diluting each stock solution in H2O:ACN 50/50 (v/v) at
the 50g/mL concentration level, were analyzed under isocratic
elution conditions, on each column. In order to define the optimal
chromatographic conditions for each column, a series of parameters
were evaluated.
the pump. Before and during the analyses, a degassing unit
avoided any bubble formation.
The three different stationary phases investigated (PinnacleTM II
CN, PinnacleTM II C18, PinnacleTM II Phenyl) were purchased in bulk
from Restek Corporation (Bellefonte, PA, USA). All of them were
silica-based and had the same particle and pore size (3m and
110Å, respectively).
2.2. Instrumentation
An UltimateTM Capillary HPLC unit from LC Packings Dionex
(Amsterdam, The Netherlands), equipped with a manual sample
injector and a flow splitting unit, was employed for nano-LC experiments.
The injector devicewas a lowdispersion six-port valve from
VICI VALCO Instrumentations (Houston, TX, USA) equipped with
a 1L external loop. The separated compounds were detected by
on-column UV/Vis spectra at 205 nm.
The capillary columns were directly connected to the injector
valve in order to reduce dead volumes and avoid any band broadening
effects.
All columns were laboratory-packed and -prepared (100m
ID×375m OD, 25.0cm packed, 25.5cm effective length). Fused
silica capillaries were purchased from Composite Metal Services
(Hallow,Worcestershire, UK).
The temperature of the chromatographic systemwas controlled
by continuous room conditioning.
The pump and detector were controlled by ChromeleonTM
Chromatography Management System Software (Version 6.6, LC
Packings) and ChromQuest Version 3.0, Thermo Finnigan (St. Jose,
CA, USA), respectively.
2.3. Preparation of packed capillaries
The three columns used in this study were prepared following a
previously described method [20].
Briefly, one end of each capillarywas connected to amechanical
temporary frit (Valco, Houston, TX, USA) used to retain the packing
material, while the other end was attached to a 10 cm×4.1mm ID
stainless steel HPLC pre-column (Valco), used as reservoir for the
slurry.
Each slurry was prepared suspending about 20mg of the
selected stationary phase in 1mL of acetone. The suspension
obtained was sonicated for 10min, transferred to the reservoir and
pumped through the empty capillary by using a PerkinElmer series
10 LC pump (Palo Alto, CA, USA) at a pressure of 35MPa (350 bar,
5000 psi) and for a length of about 30.0 cm. During this step, each
capillary was ultrasonicated in a water bath, in order to obtain a
homogeneous stationary-phase bed structure. Then, each capillary
was washed for 15 min using a 5mM NaCl solution at a pressure of
35MPa. The NaCl solution was necessary because frits were not
obtained with the use of water. A series of salt concentrations
were tested in the 2–30mM range, with the best results, concerning
stability and permeability of syntherized frits, attained at
5mM.
A laboratory-made electrical heated wire was used to prepare
inlet and outlet frits, by simply heating the capillary at about 700 ◦C
for 7–8 s. The heating process modifies the physicochemical properties
of the silica that becomes permeable to solventswhile blocking
the stationary phase. Temperature and heating times are very critical
for the appropriate frit permeability and robustness; therefore
these parameters were optimized experimentally. During the following
phase, the temporary frit was removed, and the excess of
stationary phase eliminated in the back-flush mode.
The detection windows were prepared by removing the outer
polyimide layer with a razor, for a length of about 0.5 cm, close to
the outlet frit. An optical microscopewas used to monitor the whole
procedure. Finally, each capillary was cut to the desired length and
was equilibrated using a 50/50 (v/v) H2O/ACN mixture.
A mixture of three alkylbenzenes, namely benzene, toluene,
ethylbenzene (0.1% (v/v) each inwater),was used as test sample and
periodically injected in order to evaluate any possible modification
of the chromatographic performance of the three columns. The test
compounds were analyzed using a mobile phase mixture consisting
of ACN/H2O (80/20 (v/v)). The validity of the applied packing
procedure was demonstrated through the evaluation of efficiency,
peak tailing, peak shape and backpressure. The latter values were
compared with results previously obtained using capillary columns
packed with similar stationary phases.
2.4. Sample preparation
Each real-world sample, previously fortified with a mixture of
the eight selected pesticides, was subjected to LLE and SPE. The
LLE procedure was carried out by slightly modifying the method
proposed by Shen et al. [21].
Briefly, 5 g of each sample were introduced into 50mL plastic
centrifuge tubes and then 20mL of EtAcwere added. The centrifuge
tubewas capped tightly and subjected to sonication for 10min. The
tube was then centrifuged for 20min at 3000 rpm, and the upper
layer was transferred into a second centrifuge tube. The extraction
process was repeated twice, and the two extracts were combined.
Then, in order to remove any trace ofwater fromthe two combined
extracts, 4 g of anhydrous Na2SO4 were added and, after 10min,
the solution was carefully filtered through a filter paper (at atmospheric
pressure) in a 100mL boiling flask. The filtrate, evaporated
to dryness by using a rotary evaporator,was reconstituted with 2mL
of ACN, diluted with 4mL of water and subjected to SPE clean-up
process. SPE was performed by employing a Sep-Pak Vac C18 6cc
C18 cartridge (Waters, Milford, MA, USA), previously activated with
10mL of ACN and flushed with 10mL of deionizedwater. The crude
extract obtained by LLE, and reconstituted in ACN, was loaded onto
the cartridge. The cartridge was washed with 20mL of water and
dried under a stream of nitrogen for 5 min.
The purified sample was finally eluted with 10mL of ACN and,
after organic solvent evaporation, diluted to the desired concentration
in H2O/ACN, 9/1 (v/v). The final solution was then injected
directly in the nano-LC instrument, and analyzed under the optimized
operational conditions described in Section 3.
3. Results and discussion
3.1. Choice of the stationary phase
Initially, considerable attention was devoted to the development
of a nano-LC approach, suitable for the analysis of baby
food pesticides. In particular, the choice of the most appropriate
stationary phase, enabling the generation of a robust, stable and
efficient chromatographic column, appeared to be of fundamental
importance.
The characteristics of Pinnacle IITM seemed to be very promising
for complex matrix analysis; the studies published on Pinnacle
II PAH [22], Pinnacle II C18 [23] and Pinnacle DB C18 [24] have
confirmed the high versatility of these materials. Therefore, three
different Pinnacle II stationary phases (CN, C18 and phenyl) were
investigated, with the aim of establishing their analytical suitability.
Sixty nanoliters of the eight-pesticide standard mixture, prepared
by diluting each stock solution in H2O:ACN 50/50 (v/v) at
the 50g/mL concentration level, were analyzed under isocratic
elution conditions, on each column. In order to define the optimal
chromatographic conditions for each column, a series of parameters
were evaluated.
การแปล กรุณารอสักครู่..
องค์ประกอบ คือ บรรลุโดยการใช้ซอฟต์แวร์เฉพาะการควบคุม
ปั๊ม ก่อนและระหว่างการวิเคราะห์ , degassing หน่วย
หลีกเลี่ยงฟองใด ๆเกิด ทั้งสามต่างหยุดนิ่งขั้นตอนสอบสวน ( pinnacletm II
CN , pinnacletm II c18 pinnacletm ) , 2 ) ซื้อเป็นกลุ่ม
จาก restek Corporation ( bellefonte , PA , USA ) ทั้งหมดของพวกเขาถูก
ซิลิก้าจากอนุภาคเดียวกันและมีขนาดรูพรุนและ ( 3 m
110 •ตามลำดับ )
2.2 . เครื่องมือที่ ultimatetm หลอดเลือดฝอย HPLC
หน่วยจาก LC packings DIONEX
( อัมสเตอร์ดัม , เนเธอร์แลนด์ ) , อุปกรณ์ที่มีหัวฉีดตัวอย่าง
คู่มือและแบ่งหน่วยการไหลเป็นแบบนาโน LC โดย
หัวฉีด devicewas เป็น lowdispersion หกพอร์ตวาล์วจาก
vici valco instrumentations ( Houston , TX ,สหรัฐอเมริกา ) พร้อมกับ
1 L จากวง การแยกสารประกอบที่พบใน UV / Vis โดย
คอลัมน์สเปกตรัมที่ 205 nm .
C คอลัมน์โดยตรงเชื่อมต่อกับหัวฉีด
วาล์วเพื่อลดปริมาณที่ตายแล้วและหลีกเลี่ยงการใด ๆ วงขยายผล .
คอลัมน์ทั้งหมดถูกจัดเตรียมและปฏิบัติการ - ( 100 M
ID × 375 M . 25.0cm บรรจุ 25.5cm ที่มีความยาว ) ฟิวส์
ซิลิกาฝอย ซื้อมาจากบริการโลหะคอมโพสิต
( Hallow , Worcestershire , สหราชอาณาจักร )
และควบคุมอุณหภูมิของ systemwas โดยปรับอากาศในห้องอย่างต่อเนื่อง
ปั๊มและเครื่องตรวจจับถูกควบคุมโดยซอฟต์แวร์การจัดการระบบสาร chromeleontm
( รุ่น 6.6 , LC
packings ) และ chromquest รุ่น 3.0 , เทอร์โม ฟินนิกัน ( St . โฮเซ่
CA , USA ) ตามลำดับ
2.3การเตรียมการของเส้นเลือดฝอยบรรจุ
สามคอลัมน์ที่ใช้ในการศึกษา คือ เตรียมตามวิธีที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้
[ 20 ] .
สั้นที่ปลายด้านหนึ่งของแต่ละ capillarywas เชื่อมต่อกับฟริตชั่วคราว amechanical
( valco , ฮูสตัน , TX , USA ) ใช้เพื่อรักษาบรรจุ
วัสดุ , ในขณะที่อื่น ๆที่สิ้นสุดถูกแนบมากับ 10 cm × 4.1mm ID
สแตนเลสคอลัมน์ HPLC ก่อน ( valco ) , ใช้เป็นอ่างเก็บน้ำ
โสกน้ำ
แต่ละเตรียมระงับเรื่องที่ของเฟสใน 1ml
เลือกเครื่องเขียนของอะซิโตน การระงับ
ได้รับ sonicated สำหรับวันโอนไปยังอ่างเก็บน้ำและ
สูบผ่านหลอดเลือดฝอยว่างโดยใช้ Perkinelmer ชุด
10 LC ปั๊ม ( อัลโต แคลิฟอร์เนีย สหรัฐอเมริกา ) ที่ความดันของ 35mpa ( 350 บาร์ ,
5 , 000 ปอนด์ต่อตารางนิ้ว ) และความยาวประมาณ 30.0 เซนติเมตร ในขั้นตอนนี้แต่ละ
ซึ่งเป็น ultrasonicated ในน้ำอาบ เพื่อขอรับ
เป็นเครื่องเขียนเฟสเตียงโครงสร้าง แล้ว แต่ละฝอย
ซัก 15 นาทีโดยใช้โซลูชั่นที่ 5 ที่มีความดัน
35mpa . ในสารละลายเกลือที่จำเป็นเพราะ ฟริตไม่ได้
ได้ด้วยการใช้น้ำ ชุดทดสอบปริมาณเกลือ
2 – 30mm พิสัย กับผลลัพธ์ที่ดีที่สุดเกี่ยวกับ
เสถียรภาพและความสามารถในการซึมผ่านของ syntherized ฟริตหาความที่
5 mm .
ปฏิบัติการทำลวดร้อนไฟฟ้าถูกใช้เพื่อเตรียมความพร้อม
ขาเข้า ขาออกฟริต โดยเพียงแค่ร้อนเส้นเลือดฝอยที่ประมาณ 700 ◦ c
7 – 8 . ความร้อนกระบวนการปรับเปลี่ยนสมบัติทางกายภาพและเคมีของซิลิกาที่
solventswhile กลาย permeable การบัง เฟสอยู่กับที่อุณหภูมิและเวลาที่ความร้อนสำคัญมาก
ที่เหมาะสม ฟริตการซึมผ่าน และความแข็งแกร่ง ดังนั้น
พารามิเตอร์เหล่านี้ที่เหมาะสมนี้ ระหว่าง
ตามระยะ , ฟริตชั่วคราวจะถูกลบออก และส่วนเกินของ
stationary phase ตกรอบหลังโหมดล้าง
ตรวจหา Windows ถูกเตรียมโดยการเอาชั้น polyimide ด้านนอก
ด้วยมีดโกนสำหรับความยาวประมาณ 0.5 ซม. ปิด
ร้าน มส . การ microscopewas แสงที่ใช้ในการตรวจสอบขั้นตอนทั้งหมด
สุดท้ายแต่ละปลายนิ้วถูกตัดความยาวที่ต้องการและ
คือ equilibrated ใช้ 50 / 50 ( v / v ) H2O / ACN ส่วนผสม .
ผสมสาม alkylbenzenes ได้แก่ เบนซีน โทลูอีน
เบนซีน ( 0.1 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) ในแต่ละ ) , ใช้ตัวอย่างทดสอบและ
เป็นระยะ ๆฉีดเพื่อประเมินประสิทธิภาพและเป็นไปได้ของการปรับเปลี่ยน
ของสามคอลัมน์ สารทดสอบ
วิเคราะห์ข้อมูลโดยใช้ส่วนผสมเฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วย
ของ ACN / H2O ( 80 / 20 ( v / v ) ) ความถูกต้องของการใช้บรรจุ
) ผ่านการประเมินประสิทธิภาพ
สูงสุดตามรูปร่างสูงสุด และ backpressure . ค่าหลัง
เมื่อเทียบกับผลที่ได้รับก่อนหน้านี้โดยใช้คอลัมน์บรรจุด้วยเฟสคงที่เหมือนเส้นเลือดฝอย
.
2.4 . ตัวอย่างการเตรียม
แต่ละจริงตัวอย่างก่อนหน้านี้ เสริมด้วยส่วนผสมของ
8 เลือก ยาฆ่าแมลง และถูกยัดเยียด glycine เอสพีอี .
ขั้นตอนที่ไหน ทำโดยการปรับเปลี่ยนเล็กน้อยวิธี
เสนอโดย Shen et al . [ 21 ] .
สั้น ๆ5 กรัมของแต่ละตัวอย่างถูกแนะนำใน 50ml พลาสติก
centrifuge หลอดแล้วหลอดของ etacwere เพิ่ม การหมุนเหวี่ยง
tubewas ปกคลุมแน่น และต้อง sonication สำหรับ 10min .
ท่อไฟฟ้าสำหรับ 20 นาทีแล้วที่ 3000 รอบต่อนาที และชั้นบน
ถูกโอนเข้าหลอด centrifuge วินาที ขั้นตอนการสกัด
ทำซ้ำสองครั้ง และทั้งสองสารสกัดร่วม .
แล้วเพื่อที่จะลบร่องรอยของน้ำสกัดจากสองรวมกัน
4 G ของรัส na2so4 เพิ่มหลังจากวัน
, สารละลายกรองผ่านกระดาษกรอง ( อย่างที่ความดันบรรยากาศ
) ในขวด 100ml เดือด . 148 , ระเหย
แห้งโดยใช้เครื่องระเหยแบบหมุนสามารถกับ 2ml
ของ ACN , เจือจางด้วยน้ำ และต้อง 4ml สารทำความสะอาด
กระบวนการเอสพีได้ โดยการใช้ก.ย. ปาก Vac c18 6cc
c18 ตลับ ( น้ำที่ Milford , MA , USA ) ก่อนหน้านี้ใช้งานกับ
ที่มาของ ACN และหน้าแดง กับที่มาของ deionizedwater . น้ำมันสกัดที่ได้จากที่ไหน
และสร้างในโรงเรียนอัสสัมชัญนครราชสีมา ถูกโหลดลงบน
ตลับหมึก ตลับหมึกที่ถูกล้างด้วยหลอดน้ำและแห้งภายใต้กระแส
ไนโตรเจนเป็นเวลา 5 นาทีและตัวอย่างสุดท้ายตัวอย่างกับที่มาของ ACN และ
หลังจากการระเหยตัวทำละลายอินทรีย์ เพื่อลดปริมาณที่ต้องการ
ใน H2O / ACN , 9 / 1 ( v / v ) ทางออกสุดท้ายคือฉีดนั้น
โดยตรงในนาโน LC , เครื่องมือวิเคราะห์ประสิทธิภาพการดำเนินงานภายใต้เงื่อนไขที่อธิบายไว้ในมาตรา 3
.
3 ผลและการอภิปราย
3.1 . ทางเลือกของ
เฟสอยู่กับที่ในตอนแรกความสนใจมากคือเพื่อรองรับการพัฒนา
ของนาโน LC วิธีเหมาะสมสำหรับการวิเคราะห์สารกำจัดศัตรูพืชอาหารที่รัก
โดยเฉพาะการเลือกที่เหมาะสมที่สุด
เครื่องเขียนเฟส ช่วยสร้างที่แข็งแกร่ง มั่นคง และคอลัมน์โครมาโตกราฟี
มีประสิทธิภาพ ดูเหมือนจะมีความสำคัญพื้นฐาน
.
ลักษณะของ iitm พินดูเหมือนจะสดใสมาก
การวิเคราะห์เมทริกซ์ที่ซับซ้อน ; การศึกษาที่ตีพิมพ์ใน II สุดยอด
ป้า [ 22 ] [ 23 ] และ 2 c18 จุดสุดยอดจุดสุดยอด dB c18 [ 24 ]
ยืนยันความคล่องตัวสูงของวัสดุเหล่านี้ ดังนั้นสาม
เฟสคงที่ Pinnacle II แตกต่างกัน ( CN ) , และ c18 )
) ด้วยจุดมุ่งหมายของการสร้างความเหมาะสมเชิงวิเคราะห์ของพวกเขา .
หกสิบตัวเลขของแปดมาตรฐานสารเคมีผสมเตรียมสารละลายเจือจาง
โดยแต่ละหุ้นใน H2O : ACN 50 / 50 ( v / v )
50 g / ml ระดับความเข้มข้น วิเคราะห์ภายใต้สภาวะการชะ Isocratic
, ในแต่ละคอลัมน์ การกำหนดที่เหมาะสม
เมื่อเงื่อนไขแต่ละคอลัมน์เป็นชุดของพารามิเตอร์
ถูกประเมิน
ปั๊ม ก่อนและระหว่างการวิเคราะห์ , degassing หน่วย
หลีกเลี่ยงฟองใด ๆเกิด ทั้งสามต่างหยุดนิ่งขั้นตอนสอบสวน ( pinnacletm II
CN , pinnacletm II c18 pinnacletm ) , 2 ) ซื้อเป็นกลุ่ม
จาก restek Corporation ( bellefonte , PA , USA ) ทั้งหมดของพวกเขาถูก
ซิลิก้าจากอนุภาคเดียวกันและมีขนาดรูพรุนและ ( 3 m
110 •ตามลำดับ )
2.2 . เครื่องมือที่ ultimatetm หลอดเลือดฝอย HPLC
หน่วยจาก LC packings DIONEX
( อัมสเตอร์ดัม , เนเธอร์แลนด์ ) , อุปกรณ์ที่มีหัวฉีดตัวอย่าง
คู่มือและแบ่งหน่วยการไหลเป็นแบบนาโน LC โดย
หัวฉีด devicewas เป็น lowdispersion หกพอร์ตวาล์วจาก
vici valco instrumentations ( Houston , TX ,สหรัฐอเมริกา ) พร้อมกับ
1 L จากวง การแยกสารประกอบที่พบใน UV / Vis โดย
คอลัมน์สเปกตรัมที่ 205 nm .
C คอลัมน์โดยตรงเชื่อมต่อกับหัวฉีด
วาล์วเพื่อลดปริมาณที่ตายแล้วและหลีกเลี่ยงการใด ๆ วงขยายผล .
คอลัมน์ทั้งหมดถูกจัดเตรียมและปฏิบัติการ - ( 100 M
ID × 375 M . 25.0cm บรรจุ 25.5cm ที่มีความยาว ) ฟิวส์
ซิลิกาฝอย ซื้อมาจากบริการโลหะคอมโพสิต
( Hallow , Worcestershire , สหราชอาณาจักร )
และควบคุมอุณหภูมิของ systemwas โดยปรับอากาศในห้องอย่างต่อเนื่อง
ปั๊มและเครื่องตรวจจับถูกควบคุมโดยซอฟต์แวร์การจัดการระบบสาร chromeleontm
( รุ่น 6.6 , LC
packings ) และ chromquest รุ่น 3.0 , เทอร์โม ฟินนิกัน ( St . โฮเซ่
CA , USA ) ตามลำดับ
2.3การเตรียมการของเส้นเลือดฝอยบรรจุ
สามคอลัมน์ที่ใช้ในการศึกษา คือ เตรียมตามวิธีที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้
[ 20 ] .
สั้นที่ปลายด้านหนึ่งของแต่ละ capillarywas เชื่อมต่อกับฟริตชั่วคราว amechanical
( valco , ฮูสตัน , TX , USA ) ใช้เพื่อรักษาบรรจุ
วัสดุ , ในขณะที่อื่น ๆที่สิ้นสุดถูกแนบมากับ 10 cm × 4.1mm ID
สแตนเลสคอลัมน์ HPLC ก่อน ( valco ) , ใช้เป็นอ่างเก็บน้ำ
โสกน้ำ
แต่ละเตรียมระงับเรื่องที่ของเฟสใน 1ml
เลือกเครื่องเขียนของอะซิโตน การระงับ
ได้รับ sonicated สำหรับวันโอนไปยังอ่างเก็บน้ำและ
สูบผ่านหลอดเลือดฝอยว่างโดยใช้ Perkinelmer ชุด
10 LC ปั๊ม ( อัลโต แคลิฟอร์เนีย สหรัฐอเมริกา ) ที่ความดันของ 35mpa ( 350 บาร์ ,
5 , 000 ปอนด์ต่อตารางนิ้ว ) และความยาวประมาณ 30.0 เซนติเมตร ในขั้นตอนนี้แต่ละ
ซึ่งเป็น ultrasonicated ในน้ำอาบ เพื่อขอรับ
เป็นเครื่องเขียนเฟสเตียงโครงสร้าง แล้ว แต่ละฝอย
ซัก 15 นาทีโดยใช้โซลูชั่นที่ 5 ที่มีความดัน
35mpa . ในสารละลายเกลือที่จำเป็นเพราะ ฟริตไม่ได้
ได้ด้วยการใช้น้ำ ชุดทดสอบปริมาณเกลือ
2 – 30mm พิสัย กับผลลัพธ์ที่ดีที่สุดเกี่ยวกับ
เสถียรภาพและความสามารถในการซึมผ่านของ syntherized ฟริตหาความที่
5 mm .
ปฏิบัติการทำลวดร้อนไฟฟ้าถูกใช้เพื่อเตรียมความพร้อม
ขาเข้า ขาออกฟริต โดยเพียงแค่ร้อนเส้นเลือดฝอยที่ประมาณ 700 ◦ c
7 – 8 . ความร้อนกระบวนการปรับเปลี่ยนสมบัติทางกายภาพและเคมีของซิลิกาที่
solventswhile กลาย permeable การบัง เฟสอยู่กับที่อุณหภูมิและเวลาที่ความร้อนสำคัญมาก
ที่เหมาะสม ฟริตการซึมผ่าน และความแข็งแกร่ง ดังนั้น
พารามิเตอร์เหล่านี้ที่เหมาะสมนี้ ระหว่าง
ตามระยะ , ฟริตชั่วคราวจะถูกลบออก และส่วนเกินของ
stationary phase ตกรอบหลังโหมดล้าง
ตรวจหา Windows ถูกเตรียมโดยการเอาชั้น polyimide ด้านนอก
ด้วยมีดโกนสำหรับความยาวประมาณ 0.5 ซม. ปิด
ร้าน มส . การ microscopewas แสงที่ใช้ในการตรวจสอบขั้นตอนทั้งหมด
สุดท้ายแต่ละปลายนิ้วถูกตัดความยาวที่ต้องการและ
คือ equilibrated ใช้ 50 / 50 ( v / v ) H2O / ACN ส่วนผสม .
ผสมสาม alkylbenzenes ได้แก่ เบนซีน โทลูอีน
เบนซีน ( 0.1 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) ในแต่ละ ) , ใช้ตัวอย่างทดสอบและ
เป็นระยะ ๆฉีดเพื่อประเมินประสิทธิภาพและเป็นไปได้ของการปรับเปลี่ยน
ของสามคอลัมน์ สารทดสอบ
วิเคราะห์ข้อมูลโดยใช้ส่วนผสมเฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วย
ของ ACN / H2O ( 80 / 20 ( v / v ) ) ความถูกต้องของการใช้บรรจุ
) ผ่านการประเมินประสิทธิภาพ
สูงสุดตามรูปร่างสูงสุด และ backpressure . ค่าหลัง
เมื่อเทียบกับผลที่ได้รับก่อนหน้านี้โดยใช้คอลัมน์บรรจุด้วยเฟสคงที่เหมือนเส้นเลือดฝอย
.
2.4 . ตัวอย่างการเตรียม
แต่ละจริงตัวอย่างก่อนหน้านี้ เสริมด้วยส่วนผสมของ
8 เลือก ยาฆ่าแมลง และถูกยัดเยียด glycine เอสพีอี .
ขั้นตอนที่ไหน ทำโดยการปรับเปลี่ยนเล็กน้อยวิธี
เสนอโดย Shen et al . [ 21 ] .
สั้น ๆ5 กรัมของแต่ละตัวอย่างถูกแนะนำใน 50ml พลาสติก
centrifuge หลอดแล้วหลอดของ etacwere เพิ่ม การหมุนเหวี่ยง
tubewas ปกคลุมแน่น และต้อง sonication สำหรับ 10min .
ท่อไฟฟ้าสำหรับ 20 นาทีแล้วที่ 3000 รอบต่อนาที และชั้นบน
ถูกโอนเข้าหลอด centrifuge วินาที ขั้นตอนการสกัด
ทำซ้ำสองครั้ง และทั้งสองสารสกัดร่วม .
แล้วเพื่อที่จะลบร่องรอยของน้ำสกัดจากสองรวมกัน
4 G ของรัส na2so4 เพิ่มหลังจากวัน
, สารละลายกรองผ่านกระดาษกรอง ( อย่างที่ความดันบรรยากาศ
) ในขวด 100ml เดือด . 148 , ระเหย
แห้งโดยใช้เครื่องระเหยแบบหมุนสามารถกับ 2ml
ของ ACN , เจือจางด้วยน้ำ และต้อง 4ml สารทำความสะอาด
กระบวนการเอสพีได้ โดยการใช้ก.ย. ปาก Vac c18 6cc
c18 ตลับ ( น้ำที่ Milford , MA , USA ) ก่อนหน้านี้ใช้งานกับ
ที่มาของ ACN และหน้าแดง กับที่มาของ deionizedwater . น้ำมันสกัดที่ได้จากที่ไหน
และสร้างในโรงเรียนอัสสัมชัญนครราชสีมา ถูกโหลดลงบน
ตลับหมึก ตลับหมึกที่ถูกล้างด้วยหลอดน้ำและแห้งภายใต้กระแส
ไนโตรเจนเป็นเวลา 5 นาทีและตัวอย่างสุดท้ายตัวอย่างกับที่มาของ ACN และ
หลังจากการระเหยตัวทำละลายอินทรีย์ เพื่อลดปริมาณที่ต้องการ
ใน H2O / ACN , 9 / 1 ( v / v ) ทางออกสุดท้ายคือฉีดนั้น
โดยตรงในนาโน LC , เครื่องมือวิเคราะห์ประสิทธิภาพการดำเนินงานภายใต้เงื่อนไขที่อธิบายไว้ในมาตรา 3
.
3 ผลและการอภิปราย
3.1 . ทางเลือกของ
เฟสอยู่กับที่ในตอนแรกความสนใจมากคือเพื่อรองรับการพัฒนา
ของนาโน LC วิธีเหมาะสมสำหรับการวิเคราะห์สารกำจัดศัตรูพืชอาหารที่รัก
โดยเฉพาะการเลือกที่เหมาะสมที่สุด
เครื่องเขียนเฟส ช่วยสร้างที่แข็งแกร่ง มั่นคง และคอลัมน์โครมาโตกราฟี
มีประสิทธิภาพ ดูเหมือนจะมีความสำคัญพื้นฐาน
.
ลักษณะของ iitm พินดูเหมือนจะสดใสมาก
การวิเคราะห์เมทริกซ์ที่ซับซ้อน ; การศึกษาที่ตีพิมพ์ใน II สุดยอด
ป้า [ 22 ] [ 23 ] และ 2 c18 จุดสุดยอดจุดสุดยอด dB c18 [ 24 ]
ยืนยันความคล่องตัวสูงของวัสดุเหล่านี้ ดังนั้นสาม
เฟสคงที่ Pinnacle II แตกต่างกัน ( CN ) , และ c18 )
) ด้วยจุดมุ่งหมายของการสร้างความเหมาะสมเชิงวิเคราะห์ของพวกเขา .
หกสิบตัวเลขของแปดมาตรฐานสารเคมีผสมเตรียมสารละลายเจือจาง
โดยแต่ละหุ้นใน H2O : ACN 50 / 50 ( v / v )
50 g / ml ระดับความเข้มข้น วิเคราะห์ภายใต้สภาวะการชะ Isocratic
, ในแต่ละคอลัมน์ การกำหนดที่เหมาะสม
เมื่อเงื่อนไขแต่ละคอลัมน์เป็นชุดของพารามิเตอร์
ถูกประเมิน
การแปล กรุณารอสักครู่..
ภาษาอื่น ๆ
การสนับสนุนเครื่องมือแปลภาษา: กรีก, กันนาดา, กาลิเชียน, คลิงออน, คอร์สิกา, คาซัค, คาตาลัน, คินยารวันดา, คีร์กิซ, คุชราต, จอร์เจีย, จีน, จีนดั้งเดิม, ชวา, ชิเชวา, ซามัว, ซีบัวโน, ซุนดา, ซูลู, ญี่ปุ่น, ดัตช์, ตรวจหาภาษา, ตุรกี, ทมิฬ, ทาจิก, ทาทาร์, นอร์เวย์, บอสเนีย, บัลแกเรีย, บาสก์, ปัญจาป, ฝรั่งเศส, พาชตู, ฟริเชียน, ฟินแลนด์, ฟิลิปปินส์, ภาษาอินโดนีเซี, มองโกเลีย, มัลทีส, มาซีโดเนีย, มาราฐี, มาลากาซี, มาลายาลัม, มาเลย์, ม้ง, ยิดดิช, ยูเครน, รัสเซีย, ละติน, ลักเซมเบิร์ก, ลัตเวีย, ลาว, ลิทัวเนีย, สวาฮิลี, สวีเดน, สิงหล, สินธี, สเปน, สโลวัก, สโลวีเนีย, อังกฤษ, อัมฮาริก, อาร์เซอร์ไบจัน, อาร์เมเนีย, อาหรับ, อิกโบ, อิตาลี, อุยกูร์, อุสเบกิสถาน, อูรดู, ฮังการี, ฮัวซา, ฮาวาย, ฮินดี, ฮีบรู, เกลิกสกอต, เกาหลี, เขมร, เคิร์ด, เช็ก, เซอร์เบียน, เซโซโท, เดนมาร์ก, เตลูกู, เติร์กเมน, เนปาล, เบงกอล, เบลารุส, เปอร์เซีย, เมารี, เมียนมา (พม่า), เยอรมัน, เวลส์, เวียดนาม, เอสเปอแรนโต, เอสโทเนีย, เฮติครีโอล, แอฟริกา, แอลเบเนีย, โคซา, โครเอเชีย, โชนา, โซมาลี, โปรตุเกส, โปแลนด์, โยรูบา, โรมาเนีย, โอเดีย (โอริยา), ไทย, ไอซ์แลนด์, ไอร์แลนด์, การแปลภาษา.
- ลิ้มรสชาติความสนุกของชีวิต
- ช่วงระยะเวลานี้
- married but i lost her in car accident t
- เทศบาล
- เพราะฉันไม่เคยไปแถวที่ทำงานคุณ
- Let me check on the box.
- ฉันไม่เคยมีความรู้สึกแบบนี้
- Solid loss of pasta (after cooking) was
- คุณจะอยู่ไทยกี่เดือน
- ชอคสีอะไร
- I go to the toilet every 5 minutes.l've
- ฉันชอบความสวยงามของทะเล
- ฟักลูกปูคืนสู่ธรรมชาติและศูนย์การเรียนรู
- Your vary welcome. I'm not sure what tim
- แมน
- hello how are you doing today what is yo
- where in the equation, si0 and xi0 only
- 今からアメリカ帰りまーす♡2年振りに家族に会える〜(^◯^)あと運転の免許も合格
- i'm lucky to love you because you are be
- ห้องฝั่งตะวันตก
- Do you have experience with special need
- Authorized personnel only
- ฟักลูกปูคืนสู่ธรรมชาติและศูนย์การเรียนรู
- มีนาคม
