Measurement of Pancreatic Lipase Ac

Measurement of Pancreatic Lipase Activity. The pancreatic lipase activity was measured using 4-methylumbelliferyl oleate (4-MU oleate) as a substrate (30). Twenty-five microliters of a sample solution dissolved in water and 50 μL of a 0.1 mM 4-MU solution dissolved in a buffer consisting of 13 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, and 1.3 mM CaCl2 (pH 8.0) were mixed in the well of a microtiter plate, and 25 μL of the lipase solution (50 U/mL) in the above buffer was then added to start the enzyme reaction. After incubation at 25 °C for 30 min,0.1 mL of 0.1 M sodium citrate (pH 4.2) was added to stop the reaction.The amount of 4-methylumbelliferone released by lipase was measured with a fluorometrical microplate reader (Fluoroskan Ascent C Lab-systems, Inc.) at an excitation wavelength of 355 nm and an emission wavelength of 460 nm. The IC50 of the test sample was obtained from the least-squares regression line of the plots of the logarithm of the sample concentration (log) versus the pancreatic lipase activity (%).

Preparation of Crude Polyphenol Oxidase Solution. Fresh leaves(600 g) of C. sinensis cV. Kyoken-129gou and polyamide (150 g) were homogenized in a 0.01 M potassium phosphate buffer (pH 7.0) under cooling. After removal of the insolubles by filtration through gauze,the solution was centrifuged (5000 rpm), and the supernatant was treated with acetone at -20 °C. The resulting precipitates were collected using an 8000 rpm centrifuge, dissolved in 600 mL of a 0.01 M citric acid-0.02 M potassium phosphate buffer (pH 5.6), and used for the enzymatic reaction of polyphenol oxidase.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัดกิจกรรมของเอนไซม์ไลเปสที่ตับอ่อน กิจกรรมของเอนไซม์ไลเปสที่ตับอ่อนถูกวัดโดยใช้ oleate 4-methylumbelliferyl (4-หมู่ oleate) เป็นพื้นผิว (30) Microliters ยี่สิบห้าของโซลูชันตัวอย่างละลายในน้ำและ μL 50 ของโซลูชัน 4 หมู่ 0.1 มม.ละลายในบัฟเฟอร์ที่ประกอบด้วย 13 mM ตรี-HCl, 150 มม. NaCl และ 1.3 มม. CaCl2 (pH 8.0) ถูกผสมอย่างดีของจาน microtiter และ μL 25 ของโซลูชั่นเอนไซม์ไลเปส (50 U/mL) ในบัฟเฟอร์ข้างต้นแล้วเพิ่มเริ่มต้นปฏิกิริยาเอนไซม์ หลังจากบ่มที่ 25 ° C สำหรับ 30 min, 0.1 mL ของ 0.1 M โซเดียมซิเตรต (pH 4.2) ถูกเพิ่มเพื่อหยุดปฏิกิริยาจำนวน 4-methylumbelliferone ออก โดยเอนไซม์ไลเปสถูกวัด ด้วยเครื่อง fluorometrical microplate อ่าน (C ขึ้น Fluoroskan ห้องปฏิบัติการระบบ inc) ที่มีความยาวคลื่นในการกระตุ้นของ 355 nm และความยาวคลื่นการเล็ดรอดของ 460 nm IC50 ของตัวอย่างทดสอบได้รับจากเส้นถดถอยอย่างน้อยสี่เหลี่ยมของที่ดินของลอการิทึมของความเข้มข้นตัวอย่าง (ล็อก) กับกิจกรรมตับอ่อนเอนไซม์ไลเปส (%).

Preparation ดิบ Polyphenol Oxidase โซลูชัน สดใบ (600 กรัม) ของ C. sinensis cV Kyoken-129gou และใยสังเคราะห์ (150 กรัม) ถูก homogenized เป็นกลุ่มใน 0.01 M โพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.0) ภายใต้การระบายความร้อน หลังจากเอาของ insolubles โดยการกรองผ่านผ้าพันแผล การแก้ปัญหาถูก centrifuged (5000 รอบต่อนาที), และ supernatant ได้รับอะซีโตนที่-20 องศาเซลเซียส Precipitates ได้ถูกเก็บรวบรวมใช้เป็น 8000 รอบต่อนาทีเครื่องหมุนเหวี่ยง ละลายใน mL 600 0 กรดซิตริกที่ 0.01 M02 M โพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 5.6), และใช้สำหรับปฏิกิริยาเอนไซม์ในระบบของ polyphenol oxidase

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การวัดกิจกรรมของเอนไซม์ตับอ่อน กิจกรรมเอนไซม์ตับอ่อนถูกวัดโดยใช้ 4-methylumbelliferyl โอลีเอทโอลีเอทนำ ) เป็นสารตั้งต้น ( 30 ) ยี่สิบห้าตัวเลขตัวอย่างของโซลูชั่นที่ละลายในน้ำ และ 50 μ L ของ 0.1 มิลลิเมตรนำสารละลาย HCl ละลายในบัฟเฟอร์ที่ประกอบด้วยบริษัท 13 มม. ขนาด 150 มม. และ 1.3 มม. CaCl2 ( pH 8.0 ) มาผสมในบ่อน้ำของไมโครจานและ 25 μ L ของเอนไซม์โซลูชั่น ( 50 U / ml ) ในบัฟเฟอร์ข้างต้นก็เพิ่มเริ่มเอนไซม์ปฏิกิริยา หลังจากบ่มที่อุณหภูมิ 25 องศา C นาน 30 นาที 0.1 มิลลิลิตร 0.1 โมลาร์โซเดียมซิเตรต ( pH 4.2 ) ถูกเพิ่มเข้ามาเพื่อหยุดปฏิกิริยา ปริมาณ 4-methylumbelliferone ออกโดยไลเปสเป็นวัดที่มีพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย ( อ่าน fluorometrical fluoroskan ทางขึ้น C Lab ระบบ , Inc) ที่ความยาวคลื่น 355 nm และกระตุ้นการปล่อยความยาวคลื่น 500 นาโนเมตร การ ic50 ของการทดสอบตัวอย่างที่ได้จากวิธีเชิงเส้นของแปลงของลอการิทึมของตัวอย่างความเข้มข้น ( log ) และกิจกรรมเอนไซม์ตับอ่อน ( % )

เตรียมสกัด polyphenol oxidase โซลูชั่น ใบสด ( 600 กรัม ) ของ ไซแนนซิสพันธุ์kyoken-129gou และใยสังเคราะห์ ( 150 กรัม ) เป็นโฮโมใน 0.01 M โพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.0 ) ภายใต้ความเย็น หลังจากเอาของ insolubles โดยการกรองผ่านตาข่าย , สารละลายไฟฟ้า ( 5 , 000 รอบต่อนาที ) และนำปฏิบัติด้วยอะซิโตน ที่ - 20 องศา ทำให้ตะกอนที่ใช้ในการเก็บรวบรวมเป็น 8000 รอบต่อนาทีซึ่งละลายใน 600 มล. ของ 0.01 M citric acid-0 .02 M โพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 5.6 ) , และใช้สำหรับการเกิดปฏิกิริยาของเอนไซม์ polyphenol oxidase .