Each isolate was streaked on the ag

Each isolate was streaked on the agar from which it had been
isolated and incubated at 37 C for24e48 h.DNA froma single colony
was extracted with InstaGene matrix (BioRad, 732-6030, Hertfordshire,
UK) according to manufacturer’s instructions. Isolates were
grouped at species level based on genetic fingerprinting obtained
from amplification of the 16S e 23S ITS region. Primers S-D-Bact-
1494-a-S-20 (50-GTCGTAACAAGGTAGCCGTA-30: 10 pmol ml1), and
L-D-Bact-0035-a-A-15 (50-CAAGGCATCCACCGT-30: 10 pmol ml1)
were used to direct theamplification under the following conditions:
94 C for 1 min followed by 35 cycles of denaturation at 94 C for
1min, annealing at 55 C for 1min and elongation at 72 C for 1 min
using Taq polymerase (5U; N808-0161, Applied Biosystems, Warrington,
UK). The PCR was ended with a final extension at 72 C for
7 min (Ouoba, Parkouda, Diawara, Scotti, & Varnam, 2008). Isolates
were further discriminated at intraspecies level by rep-PCR using the
primer GTG5 (50-GTG GTG GTG GTG GTG-30; 5 pmol ml1) under the
following conditions: 94 C for 4 min followed by 30 cycles of
denaturation at 94 C for 30 s, annealing at 45 C for 1 min, elongation
at 65 C for 8min and final extension at 65 C for 16min (Ouoba et al.,
2008). Amplified PCR productswere separated by 1.5% (w/v) agarose
gel electrophoresis at 120 V for 1 h and 2 h respectively for ITS and
rep-PCR products. Gels were stained with ethidium bromide and
documented using the Gel Doc It Imaging System (M-26X, UVP,
Cambridge UK). The DNA profiles were observed and all bacteria
showing the same profile were clustered in the same group. Profiles
were analysed using the Bionumerics system (Bio-Numerics 2.50,
UPGMA Pearson Correlation, Applied Maths, Sint-Martens-Latem,
Belgium).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

แต่ละแยกมีลายอยู่ agar ซึ่งจะได้รับแยก และ incubated ที่ 37 C for24e48 h.DNA froma เดียวอาณานิคมถูกสกัด ด้วย InstaGene เมตริกซ์ (BioRad, 732-6030 ฮาร์ทฟอร์ดเชอร์สหราชอาณาจักร) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต แยกได้ในระดับสปีชีส์ตามพันธุกรรมลายพิมพ์ได้รับการจัดกลุ่มจากการขยายภาคของอี 23S 16S ไพรเมอร์ S-D-Bact -1494-a-S-20 (50-GTCGTAACAAGGTAGCCGTA-30: pmol 10 ml 1), และL-D-Bact-0035-a-A-15 (50-CAAGGCATCCACCGT-30: pmol 10 ml 1)ใช้โดยตรง theamplification ภายใต้เงื่อนไขต่อไปนี้:C 94 ใน 1 นาทีตาม ด้วยรอบ 35 ของ denaturation ที่ 94 C สำหรับ1 นาที การอบเหนียวที่ 55 C elongation ที่ 72 C ใน 1 นาทีและ 1 นาทีโดยใช้พอลิเมอเรส Taq (5U N808-0161 ใช้ Biosystems, Warringtonสหราชอาณาจักร) PCR สิ้นสุดที่ C 72 สำหรับขยายสุดท้ายนาที 7 (Ouoba, Parkouda, Diawara, Scotti, & Varnam, 2008) แยกมี discriminated เพิ่มเติมในระดับ intraspecies โดยใช้ PCR แทนรองพื้น GTG5 (50-GTG GTG GTG GTG GTG-30; 5 pmol ml 1) ภายใต้การเงื่อนไขต่อไปนี้: C 94 สำหรับ 4 นาทีตามรอบ 30 ของdenaturation ที่ 94 C สำหรับ 30 s การอบเหนียวที่ 45 C ใน 1 นาที elongationที่ 65 C 8 นาทีและภายในขั้นสุดท้ายที่ 65 C สำหรับ 16 นาที (Ouoba et al.,2008) ขยาย PCR productswere คั่น ด้วย agarose 1.5% (w/v)เจ electrophoresis ที่ 120 V 1 h และ 2 h สำหรับของตามลำดับ และผลิตภัณฑ์ PCR แทน เจมีสีกับโบรไมด์ ethidium และจัดทำเอกสารโดยใช้เจอกก็ภาพระบบ (M-26 X, UVPเคมบริดจ์สหราชอาณาจักร) โพรไฟล์ดีเอ็นเอถูกสังเกต และแบคทีเรียทั้งหมดมีจับกลุ่มแสดงโพรไฟล์เดียวกันในกลุ่มเดียวกัน โพรไฟล์มี analysed ใช้ระบบ Bionumerics (ไบโอ-Numerics 2.50UPGMA เพียร์ความสัมพันธ์ คณิตศาสตร์ประยุกต์ ซินท์-Martens-Latemเบลเยียม)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

แต่ละคนได้รับการแยกลายบนอาหารเลี้ยงเชื้อจากการที่มันถูก
โดดเดี่ยวและบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส for24e48 h.DNA FROMA อาณานิคมเดียว
ถูกสกัดด้วยเมทริกซ์ InstaGene (BioRad, 732-6030, Hertfordshire,
สหราชอาณาจักร) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต แยกถูก
จัดกลุ่มอยู่ในระดับสายพันธุ์ขึ้นอยู่กับลายนิ้วมือทางพันธุกรรมที่ได้รับ
จากการขยายของ 16S อี 23S ภูมิภาค ไพรเมอร์ SD-Bact-
1494-AS-20 (50 GTCGTAACAAGGTAGCCGTA-30: 10 pmol มล 1?) และ
LD-bact-0035-AA-15 (50 CAAGGCATCCACCGT-30: 10 pmol มล 1)
ถูกนำมาใช้ theamplification โดยตรงภายใต้เงื่อนไขดังต่อไปนี้:
? 94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 นาทีตามด้วย 35 รอบของการสูญเสียสภาพธรรมชาติที่ 94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา
? 1min, การอบที่อุณหภูมิ 55 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 นาทีและการยืดตัวที่ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 นาที
โดยใช้โพลิเมอร์ Taq (5U; N808- 0161, Applied Biosystems, Warrington,
สหราชอาณาจักร) PCR ก็จบลงด้วยนามสกุลสุดท้ายที่ 72? C เป็นเวลา
7 นาที (Ouoba, Parkouda, Diawara, Scotti และ Varnam 2008) สายพันธุ์
ที่ได้รับการเลือกปฏิบัติต่อไปในระดับ intraspecies โดยตัวแทน-PCR โดยใช้
ไพรเมอร์ GTG5 (50 GTG GTG GTG GTG GTG-30; 5 pmol มล 1?) ภายใต้
เงื่อนไขดังต่อไปนี้: 94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 4 นาทีตามด้วย 30 รอบ?
denaturation ที่ 94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 วินาที, การอบที่ 45 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 นาที, การยืดตัว
ที่ 65 องศาเซลเซียสสำหรับการขยาย 8min และครั้งสุดท้ายที่ 65 องศาเซลเซียสสำหรับ 16min (Ouoba et al.,
2008) PCR ขยาย productswere แยกจากกันโดย 1.5% (w / v) agarose
ข่าวคราวที่ 120 โวลต์เป็นเวลา 1 ชั่วโมงและ 2 ชั่วโมงตามลำดับและ
ผลิตภัณฑ์ตัวแทน-PCR เจลถูกย้อมด้วย ethidium bromide และ
เอกสารโดยใช้เจล Doc มันระบบการถ่ายภาพ (M-26X, UVP,
เคมบริดจ์ประเทศอังกฤษ) โปรไฟล์ดีเอ็นเอถูกตั้งข้อสังเกตและแบคทีเรียทั้งหมด
แสดงรายละเอียดเหมือนกันรวมกลุ่มกันในกลุ่มเดียวกัน ส่วนกำหนดค่า
ที่ได้มาวิเคราะห์โดยใช้ระบบ Bionumerics (Bio-Numerics 2.50
UPGMA เพียร์สันสหสัมพันธ์คณิตศาสตร์ประยุกต์, Sint-Martens-Latem,
เบลเยี่ยม)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

แยกเป็นแต่ละลายบนวุ้นซึ่งก็มี
แยกและบ่มที่ 37  C แบบเดียว for24e48 h.dna อาณานิคม
ถูกสกัดด้วย instagene เมทริกซ์ ( biorad 732-6030 เฮิร์ท
, , UK ) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต ไอโซเลท
จัดกลุ่มที่สายพันธุ์ระดับพันธุกรรมลายนิ้วมือที่ได้จากการขยายของ e
( 23s ภูมิภาคของ ไพรเมอร์ s-d-bact -
1494-a-s-20 ( 50-gtcgtaacaaggtagccgta-30 : 10 pmol ml  1 ) ,
l-d-bact-0035-a-a-15 ( 50-caaggcatccaccgt-30 : 10 pmol ml  1 )
1 ใช้ theamplification โดยตรงภายใต้เงื่อนไขต่อไปนี้ :
94  นาน 1 นาที ตามด้วย 3 รอบ ( ที่ 94  C
เสียอบอ่อนที่อุณหภูมิ 55  C เสียยืดยาวและ 72  C เป็นเวลา 1 นาที ( ใช้แท็กโดย
5U ; n808-0161 ประยุกต์ Biosystems Warrington UK , ,
)การตรวจก็จบลงด้วยการสุดท้ายที่ 72  C
7 นาที ( ouoba parkouda diawara สก็อตตี้ , , , , varnam & , 2008 ) ไอโซเลต
ได้จำแนกระดับ intraspecies โดยวิธี PCR ที่ใช้ไพรเมอร์ gtg5 rep
( 50-gtg GTG GTG GTG gtg-30 ; 5 pmol ml  1 ) ภายใต้เงื่อนไขต่อไปนี้ : 94 
เป็นเวลา 4 นาที ตามด้วย 30 รอบ
( ที่ 94  C 30 S , อบอ่อนที่อุณหภูมิ 45  C เป็นเวลา 1 นาที
การยืดตัว65  C 8min ครั้งสุดท้าย และนามสกุลที่ 65  C 16min ( ouoba et al . ,
2008 ) การขยาย PCR และแยกจากกันโดย 1.5 % ( w / v )
, เจลที่ 120 V เป็นเวลา 1 ชั่วโมง และ 2 ชั่วโมงตามลำดับ และผลิตภัณฑ์ PCR
ตัวแทน . ทิเดียมโบรไมด์เจลถูกย้อมด้วยสีและใช้เจลหมอมัน
เอกสาร Imaging System ( m-26x uvp
, , Cambridge UK ) ดีเอ็นเอโปรไฟล์และจำนวนแบคทีเรียทั้งหมด
แสดงข้อมูลเป็นแบบเดียวกันในกลุ่มเดียวกัน โปรไฟล์
สถิติที่ใช้คือ bionumerics ระบบไบโอ numerics 2.50
วิธีหาค่าสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์แบบเพียร์สัน การประยุกต์คณิตศาสตร์ , ซินท์มาร์เทน latem
, เบลเยียม )