The 5 and 3 rapid amplification of

The 5 and 3 rapid amplification of cDNA ends (RACE) was
used with RT-PCR of mRNAs extracted from cultured fibroblasts
after they were treated with the IFN inducer poly (I)/(C)
for 7 h (Schumacher et al. 1994), using a Marathon cDNA
amplification kit (Clontech) to generate double-stranded
cDNA. The double-stranded cDNA was ligated with the Marathon
cDNA adaptor and purified on a chromaspin-TE1000
column (Clontech). The 5- and 3-RACE was performed by
using the double-stranded cDNA as a template with the Mx
gene-specific primers NE2-F (5-CCAGAATGCATCAGAG
GTGA-3, bp 671–690) and NE2-R (5-TCCTTTCCATGCATT
GTCTG-3, bp 1453–1434), and the adaptor primers AP1 (5-
CCATCCTAATACGACTCACTATAGGGC-3) and AP2 (5-
ACTCACTATAG GGCTCGAGCGGC-3). Furthermore, Mx
gene-specific primers, FUL-F (5-ATAGAGCAAGCCAGAA
GAACAGCAG-3, bp 113–137) and FUL-R (5-GCTTTGACA
AGGGTAGGCATATCAG-3, bp 2432–2408) were generated
based on the sequences of progressively amplified 5- and 3-
RACE to obtain the full-length Mx cDNA. Amplified fulllength
Mx cDNA fragments were cloned into pGEM-T Easy
vector (Promega).
Sequencing and

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

มี 3 และ 5 อย่างรวดเร็วขยายของ cDNA สิ้นสุดลง (แข่งขัน)ใช้กับ RT-PCR ของ mRNAs ที่สกัดจาก fibroblasts อ่างหลังจากที่พวกเขาได้รับการรักษา ด้วยการ IFN inducer ลี (I)/(C)สำหรับ h 7 (ชูมาเกอร์ et al. ปี 1994), ใช้ cDNA มาราธอนชุดขยาย (Clontech) เพื่อสร้างขนคู่cDNA CDNA ควั่นคู่ถูกควบกับมาราธอนอะแดปเตอร์ cDNA และบริสุทธิ์บน chromaspin-TE1000คอลัมน์ (Clontech) ดำเนินการ 5 - และ 3-แข่งขันโดยใช้ cDNA ควั่นคู่เป็นแม่กับ Mxยีนเฉพาะไพรเมอร์ NE2-F (5-CCAGAATGCATCAGAGGTGA-3, bp 671-690) และ NE2-R (5-TCCTTTCCATGCATTGTCTG-3, bp 1453 – 1434), และไพรเมอร์อะแดปเตอร์ AP1 (5-CCATCCTAATACGACTCACTATAGGGC-3) และ AP2 (5-ACTCACTATAG GGCTCGAGCGGC-3) นอกจากนี้ Mxยีนเฉพาะไพรเมอร์ FUL-F (5-ATAGAGCAAGCCAGAAGAACAGCAG-3, bp 113 – 137) และ FUL-R (5-GCTTTGACAAGGGTAGGCATATCAG-3, bp 2432-2408) สร้างขึ้นตามลำดับของความก้าวหน้าเอาต์ 5 - 3-การแข่งขันรับ cDNA Mx ปราศจาก Fulllength เอาต์บางส่วนของ cDNA Mx มีโคลนเป็น Easy pGEM-Tเวกเตอร์ (Promega)ลำดับเบส และ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

5 และ 3 การขยายตัวอย่างรวดเร็วของยีนปลาย (RACE) ถูก
นำมาใช้กับ RT-PCR ของ mRNAs สกัดจากเซลล์เพาะเลี้ยง
หลังจากที่พวกเขาได้รับการรักษาด้วยการเหนี่ยวนำ IFN โพลี (I) / (C)
เป็นเวลา 7 ชั่วโมง (ชูมัคเกอร์ et al. 1994) โดยใช้ยีนมาราธอน
ชุดเครื่องขยายเสียง (Clontech) เพื่อสร้างเกลียวคู่
ยีน cDNA เกลียวคู่ถูกผูกกับมาราธอน
อะแดปเตอร์ cDNA และบริสุทธิ์ใน chromaspin-TE1000
คอลัมน์ (Clontech) 5 และ 3 การแข่งขันได้ดำเนินการโดย
ใช้ยีนเกลียวคู่เป็นแม่แบบที่มี Mx
ไพรเมอร์ยีนเฉพาะ NE2-F (5 CCAGAATGCATCAGAG
GTGA-3, 671-690 bp) และ NE2-R (5 TCCTTTCCATGCATT
GTCTG-3, bp 1453-1434) และไพรเมอร์อะแดปเตอร์ AP1 (5
CCATCCTAATACGACTCACTATAGGGC-3) และ AP2 (5
ACTCACTATAG GGCTCGAGCGGC-3) นอกจากนี้ Mx
ไพรเมอร์ยีนเฉพาะ FUL-F (5 ATAGAGCAAGCCAGAA
GAACAGCAG-3, 113-137 bp) และ FUL-R (5 GCTTTGACA
AGGGTAGGCATATCAG-3, bp 2432-2408) ถูกสร้างขึ้น
ตามลำดับของการขยายความก้าวหน้า 5 และ 3
การแข่งขันจะได้รับเต็มความยาวยีน Mx ขยาย fulllength
Mx เศษ cDNA ถูกโคลนเข้า pGEM-T ง่าย
เวกเตอร์ (Promega).
ลำดับและ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

5 และ 3 การเพิ่มอย่างรวดเร็วของ cDNA Ends ( แข่ง ) คือ
ใช้กับของรหัสนี้สกัดจากการเพาะเมล็ดข้าว
หลังจากที่พวกเขาได้รับการรักษาด้วย IFN เอนไซม์โพลี ( ฉัน ) / ( c )
7 H ( Schumacher et al . 1994 ) โดยใช้ cDNA amplification มาราธอน
ชุด ( clontech ) เพื่อสร้างคู่ตีเกลียว
ยีน . คู่ตีเกลียว cDNA ถูกผูกกับมาราธอน
สายพันธุ์บริสุทธิ์ใน chromaspin-te1000
อะแดปเตอร์คอลัมน์ ( clontech ) 5 - 3-race โดยใช้
ใช้คู่ stranded cDNA เป็นแม่แบบกับยีนที่เฉพาะเจาะจงโดย ne2-f ( 5-ccagaatgcatcagag MX

gtga-3 BP 671 ( 690 ) และ ne2-r ( 5-tcctttccatgcatt
gtctg-3 BP = ( การ ) และอะแดปเตอร์ไพรเมอร์ ap1 ( 5 -
ccatcctaatacgactcactatagggc-3 ) และ ap2 ( 5 -
actcactatag ggctcgagcggc-3 ) นอกจากนี้ ส่วนของดีเอ็นเอยีน MX
,ful-f ( 5-atagagcaagccagaa
gaacagcag-3 BP 113 ( 137 ) และ ful-r ( 5-gctttgaca
agggtaggcatatcag-3 BP 2432 ( 1346 ) ถูกสร้างขึ้นบนพื้นฐานของความก้าวหน้า
ลำดับเบส 5 และ 3
แข่งเพื่อให้ได้เต็ม MX ยีน . ขยาย fulllength
MX cDNA ชิ้นส่วนถูกโคลนเข้า pgem-t เวกเตอร์ง่าย

และลำดับ ( promega )