MATERIALS AND METHODSPlant material

MATERIALS AND METHODS
Plant materials and multiple shoot induction: Buds adjacent to the tuberous roots of Stemona curtisii Hook.f. were obtained from Trang Province, Southern Thailand.They were washed under running tap water and surface sterilized by shaking for 5 min in 0.1% mercuric chloride solution (w/v). Buds were then washed several times in sterile distilled water and placed on Murashige and Skoog (MS) medium (Murashige and Skoog, 1962) supplemented with 2 mg/L N6-benzyladenine (BA) and 3% (w/v) sucrose, 0.2% (w/v) gelrite (Sigma-Aldrich,USA). The pH of the medium was adjusted to 5.8 before autoclaving at 121ºC for 15 min. Cultures were incubated
at 25±2ºC under 16 h/d photoperiods. Multiple shoots
were induced from the buds explants after 2-3 months of
culturing showed extensive proliferation. Shoot explants
were placed on the root culture medium, MS medium
supplemented with 1 mg/L naphthalene acetic acid (NAA)
and solidified with 0.2% (w/v) gelrite at 25±2ºC, under 16
h/d photoperiods. Roots were generated after culturing for
3 months.
Addition of salicylic acid: Salicylic acid (SigmaAldrich,
Germany) concentration 100, 200, 300 and 500
mg/L was added to the MS medium to an appropriate
concentration and the pH was adjusted to 5.8 before
autoclaving. Roots (1 g fresh weight) were inoculated into
elicitation medium and control medium (without SA
addition) for 16 weeks at 25ºC, with 16 h photoperiod
(2000 lux, cool white fluorescent tubes).
After 16 weeks of elicitation roots were collected and
the fresh weight was determined. The roots were then
dried with venticell at 35ºC. After total elimination of
water was achieved, the dried roots were weighed and the
alkaloid content was determined by HPLC.
Root extract: Dried root powder (1 g) was macerated
sequentially with 3×50 mL methanol (Merck, HPLC
grade, Germany) at room temperature over 3 days. The
methanol solution (150 mL) was filtered and evaporated
at 35ºC. Then the crude methanol extract was dissolved in
1 mL methanol and 1 mL water before extraction with
dichloromethane (3×5 mL) to give the partially purified
extract. The weight was recorded. The extract was
analyzed by HPLC.
Medium extract: The medium was extracted with
dichloromethane (Merck, HPLC grade, Germany) at a
ratio of medium: dichloromethane of 1:1 (3 times). The
dichloromethane fraction was separated and filtered
before evaporated at 35ºC to give the partially purified
extract. The weight was recorded. The extract was
analyzed by HPLC.
High-Performance Liquid Chroma-tography (HPLC)
Analysis of Alkaloids from the Roots and the
Exudates: Quantification was based on the external
standard method using calibration curves. The mixed
working standard solutions containing
oxyprotostemonine, stemocuurtisine and stemocurtisinol
in the concentration range of 0.164-10.516, 0.001-0.128
and 0.001-0.200 mg/L were prepared, respectively. The
analysis of these compounds were performed using an
Agilent 1100 HPLC system equipped with UV detector at
wavelength of 297 nm (Agilent Technologies, Palo Atto,
CA, USA). 20 :L of solution was injected onto reversed
phased (Inertsil ODS-3, 5 :m, 4.6 I.D. × 150 mm, GL
sciences Inc., Japan). HPLC column and eluted at flow
rate 1.0 mL/min with methanol (Merck, HPLC grade,
Germany)-Milli-Q water (60:40, v/v). Prior to the next
run, the HPLC column was equilibrated further for 30
min. Data acquisition and analysis were performed by the
Agilent ChemStation software. The retention times of
oxyprotostemonine, stemocurtisine and stemocurtisinol
were 2.37, 4.15 and 7.67 min, respectively.
Research location: All experiments were conducted at
Plant Tissue Culture Laboratory, Department of Biology,
Faculty of Science, Chiang Mai University, Chiang Mai,
Thailand for 1 year (January 2010 - January 2011).
Statistical analysis: All experiments were repeated at
least thrice with 15 replicates per treatment. All the values
are expressed as the mean±SE. The data was analyzed by
using one-way analysis of variance (ANOVA) followed
by Turkey’s test, p

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัสดุและวิธีการพืชวัสดุและเหนี่ยวนำยิงหลาย: ตาติดกับราก tuberous โป่งของสกุลหนอนตายหยาก curtisii Hook.f ได้รับมาจากจังหวัดตรัง ภาคใต้ Thailand.They ถูกซัดทำน้ำประปาและพื้นผิวที่ผ่านการฆ่าเชื้อ โดยการเขย่า 5 นาทีในโซลูชัน mercuric คลอไรด์ 0.1% (w/v) ตาถูกล้างหลายครั้งในน้ำกลั่นที่ผ่านการฆ่าเชื้อ และวางบน Murashige และ Skoog (MS) ปานกลาง (Murashige และ Skoog, 1962) เสริม ด้วย 2 mg/L N6 benzyladenine (BA) และ 3% (w/v) ซูโครส gelrite 0.2% (w/v) (Sigma Aldrich สหรัฐอเมริกา) ค่า pH ของตัวกลางปรับปรุงไป 5.8 ก่อนสปอร์ที่ 121ºC สำหรับวัฒนธรรม 15 นาทีได้รับการกกที่ 25±2ºC ภายใต้ photoperiods 16 h/d หลายหน่อนำจากเฌลตา 2-3 เดือนนำไปเลี้ยงพบแพร่กระจายกว้างขวาง ยิงเฌลในรากวัฒนธรรมกลาง ปานกลาง MSเสริม ด้วยกรดอะซิติกการบูร 1 mg/L (ราดหน้า)และทั้งกับ gelrite 0.2% (w/v) ที่ต่ำกว่า 16, 25±2ºCphotoperiods h/d สร้างขึ้นหลังจากนำไปเลี้ยงสำหรับราก3 เดือนนอกจากนี้กรด: กรด (SigmaAldrichเยอรมนี) ความเข้มข้น 100, 200, 300 และ 500mg/L ถูกปานกลาง MS ถึงเหมาะสมความเข้มข้นและค่า pH ปรับปรุงไป 5.8 ก่อนสปอร์ ราก (1 กรัมน้ำหนักสด) มี inoculated เป็นelicitation สื่อและควบคุมสื่อ (ไม่ มี SAนอกจากนี้) สัปดาห์ที่ 16 เวลากว่า 25 องศาเซลเซียส กับช่วงแสง 16 ชม(2000 lux หลอดฟลูออเรสเซนต์สีขาวเย็น)หลังจากสัปดาห์ที่ 16 ของ elicitation รากถูกเก็บรวบรวม และพิจารณาน้ำหนักสด รากได้แล้วอบ ด้วย venticell ที่ 35 ºc หลังจากการกำจัดทั้งหมดของน้ำสำเร็จ รากแห้งถูกชั่งน้ำหนักและมีกำหนดเนื้อหาด่าง โดย HPLCสารสกัดจากราก: เป็น macerated ผงรากแห้ง (1 กรัม)ลำดับวยเม 3 × 50 มล. (Merck, HPLCเกรด เยอรมนี) ที่อุณหภูมิห้อง 3 วัน การกรอง และระเหยเมทานอลโซลูชั่น (150 มิลลิลิตร)ที่ 35 ºc แล้ว ละลายสารสกัดเมทานอลน้ำมันดิบในเมทานอล 1 มิลลิลิตรและน้ำ 1 มิลลิลิตรก่อนสกัดด้วยdichloromethane (3 × 5 มิลลิลิตร) ให้บริสุทธิ์บางส่วนสารสกัดจาก มีบันทึกน้ำหนัก สารสกัดที่ได้วิเคราะห์ ด้วย HPLCสารสกัดจากปานกลาง: สื่อถูกสกัดด้วยdichloromethane (Merck, HPLC เกรด เยอรมนี) ที่มีอัตราส่วนของกลาง: dichloromethane 1:1 (3 ครั้ง) การส่วน dichloromethane ถูกแยก และการกรองข้อมูลระเหยที่ 35 ºc ให้บริสุทธิ์บางส่วนก่อนสารสกัดจาก มีบันทึกน้ำหนัก สารสกัดที่ได้วิเคราะห์ ด้วย HPLCประสิทธิภาพของเหลว Chroma-tography (HPLC)วิเคราะห์ของลคาลอยด์จากรากและExudates: นับตามภายนอกวิธีมาตรฐานที่ใช้สอบเทียบเส้นโค้ง การผสมโซลูชั่นมาตรฐานที่ประกอบด้วยการทำงานoxyprotostemonine, stemocuurtisine และ stemocurtisinolในช่วงความเข้มข้นของ 0.164-10.516, 0.001-0.128และ 0.001 0.200 mg/L วจัด ตามลำดับ การการวิเคราะห์สารเหล่านี้ดำเนินการโดยใช้การระบบ HPLC Agilent 1100 พร้อมเครื่องตรวจจับ UV ที่ความยาวคลื่น 297 nm (Agilent เทคโนโลยี พาโล AttoCA, USA) 20: L ของสารละลายถูกฉีดลงบนกลับเลิกใช้ (ODS Inertsil-3, 5: m, 4.6 ประชาชน× 150 มม. GLวิทยาศาสตร์ Inc. ญี่ปุ่น) คอลัมน์ HPLC และ eluted ที่ไหลอัตรา 1.0 มิลลิลิตร/นาที ด้วยเมทานอล (Merck, HPLC เกรดน้ำเยอรมนี) -หนึ่ง - Q (เบาะ v/v) ก่อนถัดไปรัน คอลัมน์ HPLC มี equilibrated เพิ่มเติม 30วิเคราะห์และเก็บข้อมูลอย่างน้อยดำเนินการโดยการซอฟต์แวร์ Agilent ChemStation เวลาเก็บรักษาของoxyprotostemonine, stemocurtisine และ stemocurtisinolถูก นาที 2.37, 4.15 และ 7.67 ตามลำดับสถานที่วิจัย: ดำเนินการทดลองทั้งหมดที่เนื้อเยื่อ ภาควิชาชีววิทยา พืชคณะวิทยาศาสตร์ มหาวิทยาลัยเชียงใหม่ เชียงใหม่ประเทศไทย 1 ปี (2553 มกราคม - 2554 มกราคม)การวิเคราะห์ทางสถิติ: ซ้ำกันในการทดลองทั้งหมดที่อย่างน้อยสามครั้งกับ 15 replicates ต่อการรักษา ค่าทั้งหมดจะแสดงเป็น mean±SE การ ข้อมูลที่ถูกวิเคราะห์โดยใช้ทางเดียวการวิเคราะห์ความแปรปรวน (ANOVA) ตามโดยการทดสอบของตุรกี p < 0.05 ถือทางสถิติอย่างมีนัยสำคัญ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัสดุและวิธีการ
วัสดุพืชและหลายยิงเหนี่ยวนำ: บัดที่อยู่ติดกับรากสะสมอาหารของหนอนตายหยาก Hook.f. ที่ได้รับจากจังหวัดตรังภาคใต้ Thailand.They ถูกล้างภายใต้การใช้น้ำประปาและพื้นผิวที่ผ่านการฆ่าเชื้อด้วยการเขย่าสำหรับการแก้ปัญหาคลอไรด์เมอร์คิว 5 นาทีใน 0.1% (w / v) ตาก็ล้างแล้วหลายต่อหลายครั้งในน้ำกลั่นผ่านการฆ่าเชื้อและวางไว้บน Murashige และ Skoog (MS) กลาง (Murashige และ Skoog, 1962) เสริมด้วย 2 มิลลิกรัม / ลิตร N6-benzyladenine (BA) และ 3% (w / v) ซูโครส 0.2 % (w / v) gelrite (Sigma-Aldrich, สหรัฐอเมริกา) ค่า pH ของกลางปรับ 5.8 ก่อนที่จะนึ่งฆ่าเชื้อที่121ºCนาน 15 นาที วัฒนธรรมที่ถูกบ่ม
ที่อุณหภูมิ 25 ±2ºCอายุต่ำกว่า 16 H / D photoperiods หน่อหลาย
ที่ถูกเหนี่ยวนำให้เกิดจากตาชิ้นหลังจาก 2-3 เดือนของการ
เพาะเลี้ยงพบว่ามีการแพร่กระจายอย่างกว้างขวาง ยิงชิ้น
ถูกวางไว้บนอาหารเลี้ยงรากสูตร MS ที่
เสริมด้วย 1 มิลลิกรัม / ลิตรเหม็นกรดอะซิติก (NAA)
และผลึกกับ 0.2% (w / v) gelrite ที่ 25 ±2ºC, อายุต่ำกว่า 16
H / D photoperiods รากถูกสร้างขึ้นหลังจากการเลี้ยง
3 เดือน.
เพิ่มของกรดซาลิไซลิกรดซาลิไซลิ (SigmaAldrich,
เยอรมนี) ความเข้มข้น 100, 200, 300 และ 500
มิลลิกรัม / ลิตรถูกเพิ่มลงในอาหารสูตร MS ที่จะเหมาะสม
ความเข้มข้นและค่า pH ปรับ 5.8 ก่อน
นึ่งฆ่าเชื้อ ราก (1 กรัมน้ำหนักสด) ถูกเชื้อเข้า
กลางการสอบถามและการควบคุมกลาง (โดยไม่ต้อง SA
นอกจากนี้) เป็นเวลา 16 สัปดาห์ที่ 25 องศาเซลเซียสมี 16 ชั่วโมงต่อช่วงแสง
(2000 ลักซ์, หลอดเรืองแสงเย็นสีขาว).
หลังจาก 16 สัปดาห์ของรากดึงเอาถูกเก็บรวบรวมและ
น้ำหนักสดถูกกำหนด รากนั้นก็
แห้งด้วย venticell ที่35ºC หลังจากการกำจัดรวมของ
น้ำก็ประสบความสำเร็จรากแห้งชั่งและ
เนื้อหาอัลคาลอยถูกกำหนดโดยวิธี HPLC.
สารสกัดจากรากผงรากแห้ง (1 กรัม) เป็น macerated
ตามลำดับด้วย 3 × 50 มลเมทานอล (เมอร์ค HPLC
เกรดเยอรมนี) ที่ อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 3 วัน
แก้ปัญหาเมทานอล (150 มิลลิลิตร) ถูกกรองและระเหย
ที่35ºC จากนั้นสารสกัดเมทานอลน้ำมันดิบถูกละลายใน
1 เมทานอลมิลลิลิตรและน้ำ 1 มิลลิลิตรก่อนการสกัดด้วย
ไดคลอโรมีเทน (3 × 5 มิลลิลิตร) เพื่อให้ผู้บริสุทธิ์บางส่วน
สารสกัดจาก น้ำหนักที่ถูกบันทึกไว้ สารสกัดถูก
วิเคราะห์โดยวิธี HPLC.
สารสกัดจากกลาง: สื่อถูกสกัดด้วย
ไดคลอโรมีเทน (เมอร์คเกรด HPLC, เยอรมนี) ที่
อัตราส่วนของกลาง: ไดคลอโรมีเทน 1: 1 (3 ครั้ง)
ส่วนไดคลอโรมีเทนถูกแยกและกรอง
ระเหยก่อนที่35ºCให้บริสุทธิ์บางส่วน
สารสกัดจาก น้ำหนักที่ถูกบันทึกไว้ สารสกัดถูก
วิเคราะห์โดยวิธี HPLC.
สูงของเหลวสมรรถนะ Chroma-tography (HPLC)
การวิเคราะห์ลคาลอยด์จากรากและ
exudates: ปริมาณขึ้นอยู่กับภายนอก
วิธีการมาตรฐานโดยใช้เส้นโค้งการสอบเทียบ ผสม
สารละลายมาตรฐานการทำงานที่มี
oxyprotostemonine, stemocuurtisine และ stemocurtisinol
อยู่ในช่วงความเข้มข้นของ 0.164-10.516, 0.001-0.128
และ 0.001-0.200 มิลลิกรัม / ลิตรได้จัดทำขึ้นตามลำดับ
วิเคราะห์ของสารเหล่านี้ได้ดำเนินการโดยใช้
ระบบ HPLC Agilent 1100 พร้อมกับเครื่องตรวจจับรังสียูวีที่
ความยาวคลื่น 297 นาโนเมตร (Agilent Technologies, พาโลอัล Atto,
CA, USA) 20: L ของการแก้ปัญหาถูกฉีดเข้าสู่ตรงกันข้าม
จะค่อย ๆ (Inertsil ODS-3, 5: m, 4.6 ID × 150 มม GL
วิทยาศาสตร์อิงค์ญี่ปุ่น) คอลัมน์ HPLC และชะที่ไหล
อัตรา 1.0 มิลลิลิตร / นาทีด้วยเมทานอล (เมอร์คเกรด HPLC,
เยอรมนี) น้ำ -Milli-Q (60:40 v / v) ก่อนที่จะมีต่อไป
วิ่งคอลัมน์ HPLC ถูก equilibrated ต่อไปสำหรับ 30
นาที การเก็บข้อมูลและการวิเคราะห์ที่ถูกดำเนินการโดย
ซอฟต์แวร์ Agilent ChemStation เวลาการเก็บรักษา
oxyprotostemonine, stemocurtisine และ stemocurtisinol
เป็น 2.37, 4.15 และ 7.67 นาทีตามลำดับ.
สถานวิจัย: การทดลองทั้งหมดถูกดำเนินการ
เพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อพืชห้องปฏิบัติการภาควิชาชีววิทยา
คณะวิทยาศาสตร์มหาวิทยาลัยเชียงใหม่, เชียงใหม่,
ไทย 1 ปี (มกราคม 2010 - มกราคม 2011).
การวิเคราะห์ทางสถิติทุกการทดลองซ้ำอย่าง
น้อยสามครั้งกับ 15 ซ้ำต่อการรักษา ค่าทั้งหมด
จะแสดงเป็นค่าเฉลี่ย± SE วิเคราะห์ข้อมูลโดย
ใช้วิธีการวิเคราะห์ความแปรปรวน (ANOVA) ตาม
โดยการทดสอบของตุรกี, p <0.05 ได้รับการพิจารณาทางสถิติ
อย่างมีนัยสำคัญ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัสดุและวิธีการวัสดุปลูกและการชักนำหลายยิง : ตาติดกับรากสะสมอาหารของหนอนตายหยาก curtisii Hook . f . ที่ได้รับจากจังหวัด ภาคใต้ของประเทศไทย พวกเขาล้างภายใต้น้ำ และใช้ฆ่าเชื้อที่ผิวโดยการเขย่า 5 นาที ในสารละลายเมอร์คิวริกคลอไรด์ 0.1% ( w / v ) ตา แล้วล้างหลายๆ ครั้งในการฆ่าเชื้อน้ำและวางไว้บนอาหารสูตร Murashige และ Skoog ( MS ) กลาง ( อาหารสูตร Murashige and Skoog , 1962 ) ที่เติม 2 mg / L n6 benzyladenine ( BA ) และ 3% ( w / v ) โดย 0.2% ( w / v ) gelrite ( ซิกม่า Aldrich , USA ) พีเอชของอาหารปรับฐานก่อนอัตราส่วนโฟกัสที่ 121 º C เป็นเวลา 15 นาที โดยวัฒนธรรมคือ25 ± 2 º C ภายใต้ 16 photoperiods H / D ยอดหลายยอดถูกชักนำจากตา เลี้ยงหลังจาก 2-3 เดือนมีการขยายตัวอย่างกว้างขวาง ถ่ายภาพอาหารอยู่ในรากวัฒนธรรมกลาง , MSเสริม 1 มิลลิกรัมแนฟธาลีน acetic acid ( NAA )และแข็งกับ 0.2% ( w / v ) gelrite 25 ± 2 º C ภายใต้ 16H / D photoperiods . ถูกสร้างขึ้นหลังจากเพาะเลี้ยงราก3 เดือนโดย salicylic acid : กรด salicylic ( sigmaaldrich ,เยอรมนี ) ที่ความเข้มข้น 100 , 200 , 300 และ 500 บาทมิลลิกรัมต่อลิตร ได้เพิ่มไปยัง MS ให้เหมาะสมความเข้มข้นและพีเอชปรับดีขึ้นก่อนอัตราส่วนโฟกัส . ราก ( 1 กรัมน้ำหนักสด ) เป็นเชื้อกลางและกลางควบคุมการ ( ไม่มีสา1 ) เป็นเวลา 16 สัปดาห์ที่ 25 º C ที่มีแสง 16 ชั่วโมง( 2 , 000 ลักซ์ หลอดเรืองแสงสีขาวเย็น )หลังจาก 16 สัปดาห์ รากและการศึกษาน้ำหนักสด ถูกกำหนดไว้ รากเป็นแล้วแห้งด้วย venticell 35 º C หลังจากทั้งหมดการน้ำคือความ , รากแห้งมีน้ำหนักและคาล เนื้อหาถูกกำหนดโดย HPLCสารสกัดจากราก : รากผงแห้ง ( 1 กรัม ) คือ maceratedโดดเด่นด้วย 3 ×เมทานอล 50 ml ( Merck , HPLCเกรด , เยอรมนี ) ที่อุณหภูมิห้อง กว่า 3 วัน ที่สารละลายเมทานอล ( 150 มิลลิลิตร ) คือกรองและระเหย35 º C แล้วสารสกัดละลายใน1 มิลลิลิตรต่อน้ำ 1 มิลลิลิตร และก่อนการสกัดไดคลอโรมีเทน ( 3 × 5 ml ) ให้บริสุทธิ์บางส่วนสารสกัด น้ำหนักจะถูกบันทึก สารสกัด คือวิเคราะห์โดย HPLCสื่อ : สื่อสารสกัดด้วยไดคลอโรมีเทน ( Merck , HPLC เกรดเยอรมัน ) ที่อัตราส่วน 1 : 1 ) : ไดคลอโรมีเทน ( 3 ครั้ง ) ที่ส่วนเพื่อแยกและกรองก่อนที่จะเริ่มที่ 35 º C เพื่อให้บริสุทธิ์บางส่วนสารสกัด น้ำหนักจะถูกบันทึก สารสกัด คือวิเคราะห์โดย HPLCของเหลวสมรรถนะสูง ( HPLC ) tography โครมาการวิเคราะห์ของแอลคาลอยด์จากรากและ: ขึ้นอยู่กับปริมาณสารที่หลั่งภายนอกวิธีมาตรฐานโดยใช้เส้นโค้งสอบเทียบ การผสมโซลูชั่นที่มีมาตรฐานการทํางานoxyprotostemonine stemocuurtisine สตีโมเคอร์ทิซินอล , และในช่วงความเข้มข้นของ 0.164-10.516 0.001-0.128 ,0.001-0.200 มก. / ล. และเตรียม ตามลำดับ ที่การวิเคราะห์สารประกอบเหล่านี้ถูกดำเนินการโดยใช้Agilent 1100 กรัมระบบติดตั้งเครื่องตรวจจับรังสียูวีที่ความยาวคลื่น nm 297 ( Agilent เทคโนโลยี พาโล อัตโต ,แคลิฟอร์เนีย สหรัฐอเมริกา ) 20 ลิตรฉีดลงในสารละลาย .แบ่ง ( inertsil ods-3 5 : M , 4.6 ระบุ× 150 มม. , GLวิทยาศาสตร์ ( ญี่ปุ่น ) คอลัมน์ HPLC ตัวอย่างที่ไหลอัตรา 1.0 มล. / นาทีกับเมทานอล ( Merck , HPLC เกรดเยอรมนี ) - milli-q น้ำ ( 60 : 40 , v / v ) ก่อนต่อไปวิ่ง , HPLC คอลัมน์ equilibrated เพิ่มเติมสำหรับ 30นาที ข้อมูลการวิเคราะห์และแสดงโดยchemstation ด้านซอฟต์แวร์ การเก็บรักษาครั้งoxyprotostemonine stemocurtisine สตีโมเคอร์ทิซินอล , และและเป็น 2.37 , 4.15 7.67 min ตามลำดับสถานที่วิจัย : การทดลองที่ห้องปฏิบัติการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อพืช ภาควิชาชีววิทยาคณะวิทยาศาสตร์ มหาวิทยาลัยเชียงใหม่ เชียงใหม่ประเทศไทย 1 ปี ( มกราคม 2553 - มกราคม 2554 )การวิเคราะห์สถิติ : การทดลองซ้ำที่อย่างน้อยสามครั้ง 15 นาที ต่อ การรักษา ค่าทั้งหมดแสดงเป็นค่าเฉลี่ย±เซ วิเคราะห์ข้อมูลโดยโดยใช้การวิเคราะห์ความแปรปรวนทางเดียว ( ANOVA ) ตามโดยการทดสอบของตุรกี , p < 0.05 ถือว่าอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติที่สําคัญ