MALDI-TOF-MS was used to further co

MALDI-TOF-MS was used to further confirm the covalent binding of EGCG to proteins. It's known that EGCG and milk proteins can form non-covalent complexes at pH ≤ 7 due to weak associations such as hydrogen-bonding, hydrophobic interaction and Van der Waals forces (Yang et al., 2014 and Zorilla et al., 2011). Since the total phenolic content of the non-covalent complexes was about 30 mg/g as described above, it could be deduced that non-covalent interactions indeed occurred between milk proteins and EGCG. In MALDI-TOF-MS analysis, all ionized molecules were accelerated in a 20 kV electrostatic field towards a field free high vacuum tube region, where different molecules were separated by their m/z-dependent velocities. MALDI-TOF-MS might dissect the non-covalent and covalent interactions of milk proteins with EGCG based on its detection principle (Ishii et al., 2008 and Ishii et al., 2011). As depicted in Fig. 1, the peaks of the covalent complexes shifted to a higher molecular mass and broadened in comparison with those of control proteins, and the mass spectra of the non-covalent complexes were identical with those of control proteins. For instance, the molecular weight of LA before and after covalent complexation with EGCG was found to be 14,180.49 and 15,090.60 g/mol, respectively, and the addition of molecular weight could be calculated as EGCG dimer. The mass spectrum of non-covalent LA–EGCG complex showed no difference with that of control LA. Similar phenomena were also observed in other proteins. Upon covalent complexation with EGCG, the shift in molecular weight indicated an addition of 2, 4, 4 and 8 EGCG molecules per protein molecule for LA, LG, LF and SC, respectively. A possible explanation for this phenomenon is that interactions between EGCG and milk proteins in the non-covalent complexes may be damaged due to the high acceleration voltage, long-distance flight at high speed and separation in electromagnetic field, since EGCG interacts with the proteins via weak bonds in the non-covalent complexes (Zorilla et al., 2011). While covalent interactions between EGCG and milk proteins are not affected by these factors owing to strong covalent bonds. Thus, the increase in molecular weight may indicate that EGCG is covalently bound to the milk proteins. In addition, the covalent binding of EGCG to proteins was also confirmed by SDS-PAGE (see additional material, SI. 1).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

MALDI TOF MS ถูกใช้เพื่อการ ยืนยันการผูกโควาเลนต์ของ EGCG กับโปรตีน เป็นที่รู้จักกันว่า EGCG และโปรตีนนมสามารถรูปแบบคอมเพล็กซ์ไม่โควาเลนต์ที่ pH ≤ 7 เนื่องจากความสัมพันธ์ของอ่อนเช่น พันธะไฮโดรเจน แบบโต้ตอบและ Van der Waals กอง (Yang et al. 2014 และ Zorilla et al. 2011) ตั้งแต่ฟีนอเนื้อหารวมของคอมเพล็กซ์ไม่โควาเลนต์ ประมาณ 30 mg/g ตามที่อธิบายไว้ข้างต้น มันสามารถสามารถ deduced ที่โต้ตอบไม่ใช่โควาเลนต์แน่นอนที่เกิดขึ้นระหว่างโปรตีนจากน้ำนมและ EGCG ในการวิเคราะห์ MALDI TOF MS โมเลกุลแตกตัวเป็นไอออนทั้งหมดถูกเร่งใน 20 kV สถิตสู่ภูมิภาคฟรีหลอดสุญญากาศสูงฟิลด์ ที่โมเลกุลแตกต่างกันถูกคั่น ด้วยความเร็ว m/z-ขึ้นอยู่กับของพวกเขา MALDI TOF MS อาจแบบโต้ตอบที่ไม่ใช่โควาเลนต์ และโควาเลนต์ของโปรตีนนม ด้วย EGCG ที่อิงหลักการตรวจจับ (Ishii et al. 2008 และ Ishii et al. 2011) ตามที่แสดงในรูปที่ 1 ยอดเขาของคอมเพล็กซ์โควาเลนต์เปลี่ยนเป็นมวลโมเลกุลสูง และขยายเมื่อเปรียบเทียบกับผู้ที่ควบคุมโปรตีน และสเปกตรัมมวลของคอมเพล็กซ์ไม่โควาเลนต์ได้เหมือนกับการควบคุมโปรตีน เช่น น้ำหนักโมเลกุลของลาก่อน และ หลังโควาเลนต์กำเนิดเช่นเดียวกับ EGCG พบว่าเป็น 14,180.49 และ 15,090.60 กรัม/โมล ตามลำดับ และสามารถคำนวณการเพิ่มของน้ำหนักโมเลกุลเป็น EGCG dimer ไม่ต่างกับของตัวควบคุม LA. พบสเปกตรัมมวลของคอมเพล็กซ์ลา – EGCG ไม่โควาเลนต์ ปรากฏการณ์คล้ายถูกสังเกตในโปรตีนอื่น ๆ เมื่อโควาเลนต์กำเนิดเช่นเดียวกับ EGCG กะน้ำหนักโมเลกุลแสดงการเพิ่มของ EGCG ที่ 2, 4, 4 และ 8 โมเลกุลต่อโมเลกุลโปรตีน LA, LG, LF และ SC ตามลำดับ คำอธิบายที่เป็นไปได้สำหรับปรากฏการณ์นี้ได้ว่า ปฏิสัมพันธ์ระหว่าง EGCG และโปรตีนนมในคอมเพล็กซ์ไม่โควาเลนต์อาจเสียหายเนื่องจากแรงดันสูงเร่ง เครื่องทางไกลที่ความเร็วสูงและการแยกในสนามแม่เหล็กไฟฟ้า ตั้งแต่ EGCG interacts กับโปรตีนด้วยพันธะที่อ่อนแอในคอมเพล็กซ์ไม่โควาเลนต์ (Zorilla et al. 2011) ในขณะที่ปฏิสัมพันธ์โควาเลนต์ระหว่าง EGCG และโปรตีนนมไม่ได้รับผลกระทบ โดยปัจจัยเหล่านี้เนื่องจากพันธะโคเวเลนต์ที่แข็งแรง ดังนั้น การเพิ่มขึ้นของน้ำหนักโมเลกุลอาจบ่งชี้ว่า EGCG ถูกผูกไว้กับโปรตีนนมด้วย นอกจากนี้ การผูกโควาเลนต์ของ EGCG กับโปรตีนยังยืนยันหน้า SDS (ดูเพิ่มเติมวัสดุ SI 1)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

MALDI-TOF-MS ถูกนำมาใช้เพื่อยืนยันโควาเลนต์ผูกพันของ EGCG กับโปรตีน เป็นที่รู้จักกันว่า EGCG และโปรตีนนมสามารถสร้างคอมเพล็กซ์ที่ไม่ใช่โควาเลนต์ที่ pH ≤ 7 เนื่องจากสมาคมอ่อนแอเช่นไฮโดรเจนพันธะปฏิสัมพันธ์ชอบน้ำและแวนเดอร์ Waals กองกำลัง (Yang et al., ปี 2014 และ Zorilla et al. 2011) เนื่องจากเนื้อหาฟีนอลรวมของคอมเพล็กซ์ที่ไม่ใช่โควาเลนต์เป็นประมาณ 30 มิลลิกรัม / กรัมตามที่อธิบายไว้ข้างต้นก็อาจจะอนุมานได้ว่าการมีปฏิสัมพันธ์ที่ไม่ใช่โควาเลนต์ที่เกิดขึ้นจริงระหว่างโปรตีนนมและ EGCG ในการวิเคราะห์ MALDI-TOF-MS ทุกโมเลกุลแตกตัวเป็นไอออนเร่งในสนามไฟฟ้าสถิต 20 กิโลโวลต์ต่อสนามฟรีสูญญากาศสูงภูมิภาคหลอดที่โมเลกุลที่แตกต่างกันแยกออกจากกันโดย m / z ขึ้นอยู่กับความเร็วของพวกเขา MALDI-TOF-MS อาจผ่าไม่ใช่โควาเลนต์และโควาเลนต์ปฏิสัมพันธ์ของโปรตีนนมที่มีสาร EGCG อยู่บนหลักการของการตรวจสอบ (อิชิ et al., 2008 และอิชิ et al. 2011) ในฐานะที่เป็นที่ปรากฎในรูป 1 ยอดคอมเพล็กซ์โควาเลนต์ขยับไปยังมวลโมเลกุลสูงขึ้นและขยายวงกว้างขึ้นในการเปรียบเทียบกับบรรดาของโปรตีนที่ควบคุมและสเปกตรัมมวลของคอมเพล็กซ์ที่ไม่ใช่โควาเลนต์เหมือนกันกับบรรดาของโปรตีนที่ควบคุม ยกตัวอย่างเช่นน้ำหนักโมเลกุลของ LA ก่อนและหลังการเชิงซ้อนโควาเลนต์กับ EGCG ถูกพบว่าเป็น 14,180.49 และ 15,090.60 กรัม / โมลตามลำดับและการเพิ่มของน้ำหนักโมเลกุลสามารถคำนวณเป็นสาร EGCG dimer สเปกตรัมของมวลที่ไม่ใช่โควาเลนต์ที่ซับซ้อน LA-EGCG แสดงให้เห็นความแตกต่างกับที่ของการควบคุม LA ไม่มี ปรากฏการณ์ที่คล้ายกันนอกจากนี้ยังพบในโปรตีนชนิดอื่น ๆ เมื่อเชิงซ้อนโควาเลนต์กับ EGCG, การเปลี่ยนแปลงในน้ำหนักโมเลกุลที่ระบุไว้นอกเหนือจาก 2, 4, 4 และ 8 โมเลกุลต่อโมเลกุล EGCG โปรตีนสำหรับ LA, LG, LF และ SC ได้ตามลำดับ คำอธิบายที่เป็นไปได้สำหรับปรากฏการณ์นี้ก็คือการมีปฏิสัมพันธ์ระหว่าง EGCG และโปรตีนนมในคอมเพล็กซ์ที่ไม่ใช่โควาเลนต์อาจได้รับความเสียหายอันเนื่องมาจากแรงดันไฟฟ้าเร่งความเร็วสูงเที่ยวบินทางไกลด้วยความเร็วสูงและการแยกในสนามแม่เหล็กไฟฟ้าตั้งแต่ EGCG มีปฏิสัมพันธ์กับโปรตีนผ่านทาง พันธบัตรที่อ่อนแอในคอมเพล็กซ์ที่ไม่ใช่โควาเลนต์ (Zorilla et al. 2011) ในขณะที่การมีปฏิสัมพันธ์ระหว่างโควาเลนต์ EGCG และโปรตีนนมจะไม่ได้รับผลกระทบจากปัจจัยเหล่านี้เนื่องจากพันธะโควาเลนแข็งแกร่ง ดังนั้นการเพิ่มขึ้นของน้ำหนักโมเลกุลอาจบ่งชี้ว่าสาร EGCG เป็นโควาเลนต์ที่ถูกผูกไว้กับโปรตีนนม นอกจากนี้โควาเลนต์ผูกพันของ EGCG กับโปรตีนนอกจากนี้ยังได้รับการยืนยันโดยวิธี SDS-PAGE (ดูเพิ่มเติมเนื้อหา, SI. 1)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

maldi-tof-ms ใช้เพิ่มเติมยืนยันการเข้าเล่มของ EGCG ในโปรตีน มันเป็นที่รู้จักกันว่า EGCG และนมโปรตีนสามารถรูปแบบไม่มีการ≤เชิงซ้อนที่ pH 7 เนื่องจากสมาคมอ่อนแอ เช่น พันธะไฮโดรเจน ปฏิกิริยาไฮโดรโฟบิก และแรงแวนเดอร์วาลส์ ( หยาง et al . , 2014 และ zorilla et al . , 2011 ) เนื่องจากเนื้อหาทั้งหมดของสารประกอบโควาเลนต์ิกไม่ประมาณ 30 มิลลิกรัม / กรัม ตามที่อธิบายไว้ข้างต้น สามารถคาดคะเนได้ว่า ไม่ใช่การปฏิสัมพันธ์จริงที่เกิดขึ้นระหว่างโปรตีนนมและ EGCG . ในการวิเคราะห์ maldi-tof-ms ทุกโมเลกุลประจุถูกเร่งใน 20 KV สนามไฟฟ้าสถิตสู่สนามฟรีสูง vacuum tube ) ที่แยกได้จากโมเลกุลที่แตกต่างกันความเร็ว m / z-dependent ของพวกเขา maldi-tof-ms อาจผ่าและไม่โควาเลนต์การปฏิกิริยาของโปรตีนนมด้วย EGCG หลักการการตรวจจับ ( อิชิ et al . , 2008 และ ชิ et al . , 2011 ) ตามที่ปรากฎในรูปที่ 1 ยอดของสารประกอบโควาเลนต์ขยับไปสูงกว่าโมเลกุลมวลและขยายในการเปรียบเทียบกับที่ของโปรตีน ควบคุมและมวลสเปกตรัมของสารประกอบโควาเลนต์ที่ไม่ถูกเหมือนกันกับของโปรตีนควบคุม อย่างเช่น โมเลกุลของ ลา ก่อน และหลังการการด้วย EGCG พบและเป็น 14180.49 15090.60 กรัม / โมล ตามลำดับ และนอกจากนี้ของโมเลกุลสามารถถูกคำนวณเป็น EGCG เมอร์ . มวลสเปกตรัมที่ไม่ซับซ้อนการลา– EGCG ต่างกันกับของการควบคุมที่ LA ปรากฏการณ์ที่คล้ายกันพบในโปรตีนอื่น ๆ เมื่อการเกิดสารประกอบเชิงซ้อนกับโควา EGCG , การเปลี่ยนแปลงในโมเลกุล พบการเพิ่มของ 2 , 4 , 4 และ 8 โมเลกุลต่อโมเลกุลโปรตีนสำหรับ EGCG ลา , LG , LF และ D ตามลำดับ คำอธิบายที่เป็นไปได้สำหรับปรากฏการณ์นี้คือการมีปฏิสัมพันธ์ระหว่าง EGCG และนมโปรตีนในการไม่ซับซ้อนอาจได้รับความเสียหายเนื่องจากแรงดันสูงเร่งเที่ยวบินทางไกลที่ความเร็วสูงและการแยกในสนามแม่เหล็กไฟฟ้าเนื่องจาก EGCG มีปฏิสัมพันธ์กับโปรตีนที่ผ่านที่อ่อนแอไม่โควาเลนต์พันธบัตรในสารประกอบเชิงซ้อน ( zorilla et al . , 2011 ) ในขณะที่การปฏิสัมพันธ์ระหว่าง EGCG และนมโปรตีน จะไม่ได้รับผลกระทบจากปัจจัยเหล่านี้ เนื่องจากพันธบัตรโควาเลนต์ที่แข็งแกร่ง ดังนั้น การเพิ่มขึ้นของน้ำหนัก โมเลกุลจะพบว่า EGCG เป็น covalently ผูกพันกับนมโปรตีน นอกจากนี้ การเข้าเล่มของ EGCG ยังได้รับการยืนยันโดย SDS-PAGE โปรตีน ( ดูข้อมูลเพิ่มเติมได้ 1 )