Interaction of MaERF9 and -11 with

Interaction of MaERF9 and -11 with promoters of MaACS1 and MaACO1

In previous studies, banana fruit MaACS1 and MaACO1 have been reported as key genes involved in ethylene biosynthesis. In peel and pulp tissues, MaACS1 and MaACO1 were ripening- and ethylene-induced genes during fruit ripening (Inaba et al., 2007). Similar to the previous report, this study also showed that MaACS1 and MaACO1 in peel and pulp tissues were ethylene-induced, and that their transcript levels increased with ethylene evolution during fruit ripening (data not shown). Recently, several TFs, such as tomato RIN, LeERF2, tobacco TERF1, and rice OsDERF1, have been reported to modulate the expression of ethylene biosynthesis genes (Ito et al., 2008; Zhang et al., 2009; Wan et al., 2011; Qin et al., 2012). Therefore, the current study decided to investigate whether ripening-induced MaERF9 and ripening-downregulated MaERF11 could regulate MaACS1 and MaACO1 in banana fruit ripening. A yeast one-hybrid assay based on the Matchmaker Gold Yeast One-Hybrid System was first performed for this purpose. The promoters of MaACS1 and MaACO1 were cloned in front of the reporter gene AUR1-C, an antibiotic resistance gene that confers aureobasidin A resistance in yeast. No basal activities of the MaACS1 and MaACO1 promoters were detected in yeast (Fig. 4A). After the Y1H reporter strains were transformed with plasmids carrying cassettes constitutively expressing MaERF9 and -11 effectors, yeast cells harbouring MaACS1 promoter grew well in the presence of aureobasidin A (Fig. 4B). While the yeast cells harbouring the MaACO1 promoter grew well when co-transformed with MaERF11 effector, but could not grew when co-transformed with MaERF9 (Fig. 4B). These observations indicate that MaERF11 can bind to MaACS1 and MaACO1 promoters, while MaERF9 only binds to MaACS1 promoter in yeast. Next, the tobacco transient cotransformational system was used to further confirm MaERF9 and -11 binding to the promoters of MaACS1 and MaACO1 in vivo. The full-length promoters of MaACS1 and MaACO1 were used to drive the GUS reporter gene, and the open reading frames of MaERF9 and -11 were overexpressed under the control of the 35S promoter. Each promoter–GUS construct was then co-transferred with either 35S:MaERF9 and 35S:MaERF11, respectively, through Agrobacterium transfection. The interaction of MaERF9 with the MaACS1 promoter resulted in a 3.27-fold enhancement of GUS activity, but no significant change was found with the MaACO1 promoter (Fig. 5). However, a marked decrease in GUS activity was observed to the interaction of MaERF11 with the MaACS1 or MaACO1 promoter (Fig. 5). These results not only indicate that MaERF11 can bind to MaACS1 and MaACO1 promoters, and MaERF9 binds to MaACS1 promoter, but also suggest that MaERF9 might directly activate the transcription of MaACS1 by interacting with the MaACS1 promoter. In addition, MaERF11 might act as transcription repressors of MaACS1 and MaACO1 by suppressing their promoter activities.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ติดต่อ MaERF9 และ-11 กับก่อ MaACS1 และ MaACO1ในการศึกษาก่อนหน้านี้ กล้วยผลไม้ MaACS1 และ MaACO1 มีการรายงานเป็นยีนหลักที่เกี่ยวข้องกับการสังเคราะห์เอทิลีน ในเนื้อเยื่อของเปลือกและเยื่อกระดาษ MaACS1 และ MaACO1 มียีน ripening - และเอทิลีนเกิดในผลไม้ ripening (Inaba et al., 2007) เช่นเดียวกับรายงานก่อนหน้านี้ การศึกษานี้ยังพบว่า MaACS1 และ MaACO1 ในเนื้อเยื่อของเปลือกและเยื่อกระดาษเกิดจากเอทิลีน และที่ระดับของเสียงบรรยายเพิ่มกับเอทิลีนวิวัฒนาการระหว่างผลไม้ ripening (ข้อมูลไม่แสดง) ล่าสุด TFs หลาย เช่นมะเขือเทศริ้น LeERF2, TERF1 ยาสูบ ข้าว OsDERF1 รายงานการ modulate นิพจน์ของยีนที่สังเคราะห์เอทิลีน (อิโตะเอ็ด al., 2008 เตียว et al., 2009 วาน et al., 2011 ชิน et al., 2012) ดังนั้น การศึกษาปัจจุบันตัดสินใจสืบว่า ripening-เกิดจาก MaERF9 และ MaERF11 ripening downregulated สามารถควบคุม MaACS1 และ MaACO1 ใน ripening ผลไม้กล้วย ยีสต์ผสมหนึ่งวิเคราะห์ตาม Matchmaker ทองยีสต์ผสมหนึ่งระบบแรกที่ดำเนินการสำหรับวัตถุประสงค์นี้ ก่อ MaACS1 และ MaACO1 ถูกโคลนหน้าโปรแกรมรายงานยีน AUR1-C มียีนต้านทานยาปฏิชีวนะที่ confers aureobasidin A ความต้านทานในยีสต์ ไม่มีกิจกรรมโรคก่อ MaACS1 และ MaACO1 พบในยีสต์ (Fig. 4A) หลังจาก Y1H โปรแกรมรายงานสายพันธุ์ถูกแปลง ด้วย plasmids ฝ้าถือครองกำลัง constitutively MaERF9 และ-11 เบส harbouring MaACS1 โปรโมเตอร์เซลล์ยีสต์เติบโตดีในต่อหน้าของ aureobasidin (Fig. 4B) ในขณะที่เซลล์ยีสต์ harbouring โปรโมเตอร์ MaACO1 เติบโตดีเมื่อแปลงร่วมกับ MaERF11 effector แต่อาจไม่เติบโตเมื่อแปลงร่วมกับ MaERF9 (Fig. 4B) ข้อสังเกตเหล่านี้บ่งชี้ว่า MaERF11 สามารถผูกกับก่อการ MaACS1 และ MaACO1 ในขณะที่ MaERF9 เฉพาะ binds MaACS1 โปรโมเตอร์ในยีสต์ ถัดไป ยาสูบชั่วคราว cotransformational ระบบถูกใช้เพื่อยืนยันเพิ่มเติม MaERF9 และ-11 ผูกการก่อ MaACS1 และ MaACO1 ในสัตว์ทดลอง ใช้ขับยีนโปรแกรมรายงาน GUS ก่อจัด MaACS1 และ MaACO1 และเฟรมเปิดอ่านของ MaERF9 และ-11 ได้ overexpressed ภายใต้การควบคุมของโปรโมเตอร์ 35S แต่ละโครงสร้างโปรโมเตอร์ – GUS ได้แล้วร่วมแล้วกับ 35S:MaERF9 และ 35S:MaERF11 ตามลำดับ ผ่าน transfection อโกรแบคทีเรียม การโต้ตอบของ MaERF9 กับโปรโมเตอร์ MaACS1 ผลในการเพิ่มประสิทธิภาพกิจกรรม GUS 3.27-fold แต่ไม่เปลี่ยนแปลงที่สำคัญพบกับโปรโมเตอร์ MaACO1 (Fig. 5) อย่างไรก็ตาม ลดการทำเครื่องหมายในกิจกรรม GUS ถูกตรวจสอบการโต้ตอบของ MaERF11 กับโปรโมเตอร์ที่ MaACS1 หรือ MaACO1 (Fig. 5) ผลลัพธ์เหล่านี้ไม่เพียงแต่ระบุว่า MaERF11 สามารถผูกการก่อ MaACS1 และ MaACO1 และ MaERF9 binds กับโปรโมเตอร์ MaACS1 แต่ยัง แนะนำว่า MaERF9 อาจเปิด transcription ของ MaACS1 โดยตรง โดยการติดต่อกับโปรโมเตอร์ MaACS1 นอกจากนี้ MaERF11 อาจทำเป็น transcription repressors MaACS1 และ MaACO1 โดยเมื่อกิจกรรมของโปรโมเตอร์

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ปฏิสัมพันธ์ของ MaERF9 และ -11 กับโปรโมเตอร์ของ MaACS1 และ MaACO1 ในการศึกษาก่อนหน้านี้ผลไม้กล้วย MaACS1 และ MaACO1 ได้รับรายงานว่ายีนที่สำคัญเกี่ยวข้องกับการสังเคราะห์เอทิลีน ในเปลือกและเนื้อเยื่อเยื่อ MaACS1 และ MaACO1 มียีน ripening- และเอทิลีนที่เกิดขึ้นในช่วงที่ผลไม้สุก (Inaba et al., 2007) คล้ายกับรายงานก่อนหน้านี้การศึกษาครั้งนี้ยังพบว่า MaACS1 และ MaACO1 ในเปลือกและเยื่อกระดาษเนื้อเยื่อถูกเอทิลีนที่เกิดขึ้นและที่ระดับหลักฐานของพวกเขาเพิ่มขึ้นด้วยวิวัฒนาการของเอทิลีนในช่วงผลไม้สุก (ไม่ได้แสดงข้อมูล) เมื่อเร็ว ๆ นี้หลาย TFS เช่นมะเขือเทศริน, LeERF2, TERF1 ยาสูบและ OsDERF1 ข้าวที่ได้รับรายงานเพื่อปรับการแสดงออกของยีนสังเคราะห์เอทิลีน (Ito และคณะ, 2008;. Zhang et al, 2009;.. วรรณและคณะ, 2011. ฉินและคณะ, 2012) ดังนั้นการศึกษาในปัจจุบันจึงตัดสินใจที่จะตรวจสอบว่าสุกเหนี่ยวนำให้เกิด MaERF9 และสุก-downregulated MaERF11 สามารถควบคุม MaACS1 และ MaACO1 ในกล้วยสุกผลไม้ ยีสต์ทดสอบหนึ่งไฮบริดอยู่บนพื้นฐานของยีสต์ทองแม่สื่อระบบ One-ไฮบริดเป็นครั้งแรกเพื่อการนี้ โปรโมเตอร์ของ MaACS1 และ MaACO1 ถูกโคลนด้านหน้าของยีนนักข่าว aur1-C, ยีนต้านทานยาปฏิชีวนะที่ฟาโรห์ aureobasidin ต้านทานในยีสต์ ไม่มีกิจกรรมพื้นฐานของ MaACS1 และส่งเสริม MaACO1 ถูกตรวจพบในยีสต์ (รูป. 4A) หลังจากที่สายพันธุ์นักข่าว Y1H ถูกเปลี่ยนด้วยพลาสมิดแบกเทป constitutively แสดง MaERF9 -11 และเอฟเฟคเซลล์ยีสต์เยิ้มก่อการ MaACS1 เติบโตได้ดีในการปรากฏตัวของ aureobasidin (รูป. 4B) ในขณะที่เซลล์ยีสต์เยิ้มก่อการ MaACO1 ขยายตัวได้ดีเมื่อร่วมกับการเปลี่ยน Effector MaERF11 แต่ไม่สามารถขยายตัวเมื่อร่วมกับการเปลี่ยน MaERF9 (รูป. 4B) ข้อสังเกตเหล่านี้แสดงให้เห็นว่า MaERF11 สามารถผูกกับ MaACS1 และส่งเสริม MaACO1 ขณะ MaERF9 เพียงผูกกับโปรโมเตอร์ MaACS1 ในยีสต์ ถัดไปยาสูบระบบ cotransformational ชั่วคราวถูกนำมาใช้เพื่อยืนยัน MaERF9 -11 และผูกพันกับโปรโมเตอร์ของ MaACS1 และ MaACO1 ในร่างกาย โปรโมเตอร์เต็มความยาวของ MaACS1 MaACO1 และถูกนำมาใช้ในการขับรถของยีน GUS นักข่าวและกรอบการแสดงกำลังเปิด MaERF9 และ -11 ถูก overexpressed ภายใต้การควบคุมของผู้ก่อการ 35S แต่ละคนสร้างโปรโมเตอร์ GUS จากนั้นก็ร่วมกับทั้งโอน 35S: MaERF9 และ 35S: MaERF11 ตามลำดับผ่าน transfection Agrobacterium ปฏิสัมพันธ์ของ MaERF9 กับโปรโมเตอร์ MaACS1 ผลในการเพิ่มประสิทธิภาพ 3.27 เท่าของกิจกรรม GUS แต่ไม่มีการเปลี่ยนแปลงอย่างมีนัยสำคัญกับการก่อการ MaACO1 (รูปที่. 5) อย่างไรก็ตามการลดลงของการทำเครื่องหมายในกิจกรรม GUS เป็นข้อสังเกตในการปฏิสัมพันธ์ของ MaERF11 กับ MaACS1 หรือก่อการ MaACO1 (รูปที่. 5) ผลลัพธ์เหล่านี้ไม่เพียง แต่แสดงให้เห็นว่า MaERF11 สามารถผูกกับ MaACS1 และส่งเสริม MaACO1 และ MaERF9 ผูกกับโปรโมเตอร์ MaACS1 แต่ยังชี้ให้เห็นว่า MaERF9 โดยตรงอาจเปิดใช้งานการถอดรหัสของ MaACS1 โดยการมีปฏิสัมพันธ์กับผู้ก่อการ MaACS1 นอกจากนี้ MaERF11 อาจทำหน้าที่เป็น repressors ถอดความจาก MaACS1 และ MaACO1 โดยการยับยั้งกิจกรรมโปรโมเตอร์ของพวกเขา

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ปฏิสัมพันธ์ของ maerf9 และ 11 กับโปรโมเตอร์ของ maacs1 และ maaco1

ในการศึกษา maacs1 ผลไม้กล้วยและ maaco1 ได้รับรายงานเป็นยีนหลักที่เกี่ยวข้องในวิถีการสังเคราะห์เอทิลีน . ในเปลือกและเนื้อ เยื่อกระดาษ และเป็น maacs1 maaco1 สุกและเอทิลีนกระตุ้นยีนในช่วงผลไม้สุก ( อินาบะ et al . , 2007 ) คล้ายคลึงกับรายงานก่อนหน้านี้การศึกษานี้ยังพบว่า maacs1 และ maaco1 เปลือกและเนื้อเยื่อมีการผลิตเอทิลีน และระดับผลการเรียนของตนเองเพิ่มขึ้นด้วยวิวัฒนาการเอทิลีนในช่วงผลไม้สุก ( ข้อมูลไม่แสดง ) เมื่อเร็ว ๆนี้หลาย TFS เช่นริน มะเขือเทศ leerf2 terf1 , ยาสูบและข้าว osderf1 ได้รับรายงานการศึกษาการแสดงออกของยีนในวิถีการสังเคราะห์เอทิลีน ( Ito et al . , 2008 ; Zhang et al . ,2009 ; วาน et al . , 2011 ; ฉิน et al . , 2012 ) ดังนั้น การศึกษาปัจจุบันตัดสินใจที่จะตรวจสอบว่า การเกิด maerf9 และสุก downregulated maerf11 สามารถควบคุม maacs1 maaco1 กล้วยและผลไม้สุก หนึ่งในยีสต์ลูกผสมจากยีสต์เถ้าแก่ทองหนึ่งระบบไฮบริดเป็นครั้งแรกที่ใช้เพื่อวัตถุประสงค์นี้โปรโมเตอร์ของ maacs1 และ maaco1 ถูกโคลนในด้านหน้าของนักข่าว aur1-c ยีน , ยีนต้านทานยาปฏิชีวนะเกี่ยวข้องริโอบาซิดิน เอต้านทานในยีสต์ ไม่มีฐานกิจกรรมของ maacs1 maaco1 โปรโมเตอร์และถูกตรวจพบในยีสต์ ( รูปที่ 4 ) หลังจากนักข่าวสายพันธุ์ y1h ถูกเปลี่ยนกับพลาสมิดพกเทป constitutively แสดง maerf9 อีกครั้งหนึ่งและ 11 ,เซลล์ยีสต์กับโปรโมเตอร์ maacs1 ขยายตัวดีในการแสดงตนของริโอบาซิดิน เอ ( ภาพ 4B ) ในขณะที่เซลล์ยีสต์กับ maaco1 การขยายตัวได้ดี เมื่อเปลี่ยน maerf11 Co กับโต้ง แต่อาจไม่ขยายตัวเมื่อ CO ( รูปแปลง ด้วย maerf9 4B ) ข้อสังเกตเหล่านี้บ่งชี้ว่า maerf11 สามารถผูกกับ maacs1 และโปรโมเตอร์ maaco1 ในขณะที่ maerf9 เท่านั้นที่ผูกกับ maacs1 โปรโมเตอร์ในยีสต์ถัดไป , ยาสูบชั่วคราว cotransformational ระบบใช้เพื่อเพิ่มเติม และยืนยัน maerf9 - 11 ผูกกับโปรโมเตอร์ของ maacs1 maaco1 และในสิ่งมีชีวิต โปรโมเตอร์เต็มตัวของ maacs1 maaco1 และใช้ไดรฟ์ของนักข่าว กัส และเปิดอ่าน และกรอบของ maerf9 - 11 กับ 35s ภายใต้การควบคุมของโปรโมเตอร์แต่ละการสร้างและกัสก็ร่วมด้วยและโอน 35s : maerf9 35s : maerf11 ตามลำดับ โดย Agrobacterium ค . ปฏิสัมพันธ์ของ maerf9 กับ maacs1 promoter มีผลในการเพิ่มประสิทธิภาพของกิจกรรม 3.27-fold กัส แต่ไม่มีการเปลี่ยนแปลงอย่างมีนัยสําคัญที่พบด้วย maaco1 โปรโมเตอร์ ( ภาพที่ 5 ) อย่างไรก็ตาม