Klebsiella pneumoniae naturally pro

Klebsiella pneumoniae naturally produces relatively large amounts of 1,3-propanediol (1,3-PD) and 2,3-butanediol (2,3-BD) along with various byproducts using glycerol as a carbon source. The ldhA and mdh genes in K. pneumoniae were deleted based on its in silico gene knockout simulation with the criteria of maximizing 1,3-PD and 2,3-BD production and minimizing byproducts formation and cell growth retardation. In addition, the agitation speed, which is known to strongly affect 1,3-PD and 2,3-BD production in Klebsiella strains, was optimized. The K. pneumoniae ΔldhA Δmdh strain produced 125 g/L of Klebsiella pneumoniae KCTC12133BP was used as a hostfor the development of various knockout mutant strainsin this study. In-frame deletions were carried out basedon homologous recombination using overlap polymerasechain reaction (PCR) products. The overlap product of thetwo fragments, which consisted of ~500 bp upstream anddownstream of the target gene, was amplified and overlapped by PCR. The fragment was cloned in a chloramphenicol-resistant pKGS plasmid (Kim et al. 2013) containing a sacB counter-selection marker. The plasmid wastransformed into competent cells of the K. pneumoniaestrain by electroporation. The colonies were then selectedin Luria–Bertani (LB) plates at 42 °C with chloramphenicol (25 mg/L), and the integrated cassette was cured bysacB expression under sucrose pressure. Integration andexcision were confirmed in all mutants by PCR screeningusing genome-specific primers.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Klebsiella pneumoniae ผลิต 1,3-propanediol (1,3-PD) และ 2,3-butanediol (2,3-BD) ในปริมาณค่อนข้างมากโดยธรรมชาติพร้อมกับผลพลอยได้ต่างๆโดยใช้กลีเซอรอลเป็นแหล่งคาร์บอน ยีน ldhA และ mdh ใน K. pneumoniae ถูกลบออกตามการจำลองการทำให้ล้มลงของยีนซิลิโก ด้วยเกณฑ์ในการเพิ่มการผลิต 1,3-PD และ 2,3-BD ให้สูงสุด และลดการสร้างผลพลอยได้และการชะลอการเจริญเติบโตของเซลล์ นอกจากนี้ความเร็วของการกวนซึ่งทราบกันว่าส่งผลกระทบอย่างรุนแรงต่อการผลิต 1,3-PD และ 2,3- BD ในสายพันธุ์ Klebsiella ได้รับการปรับให้เหมาะสม สายพันธุ์ K. pneumoniae ΔldhA Δmdh ผลิต Klebsiella pneumoniae KCTC12133BP ได้ 125 กรัม/ลิตรถูกใช้เป็นเจ้าภาพในการพัฒนาสายพันธุ์กลายพันธุ์ที่น่าพิศวงต่างๆในการศึกษานี้ การลบออกในเฟรมถูกดำเนินการตามการรวมตัวซ้ำแบบโฮโมโลกัสโดยใช้ผลิตภัณฑ์ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรสที่ทับซ้อนกัน (PCR) ผลิตภัณฑ์ที่ทับซ้อนกันของทั้งสองส่วน ซึ่งประกอบด้วย ~ 500 bp ต้นน้ำและปลายน้ำของยีนเป้าหมาย ถูกขยายและทับซ้อนกันโดย PCR ชิ้นส่วนถูกโคลนในพลาสมิด pKGS ที่ทนต่อคลอแรมเฟนิคอล (Kim et al. 2013) ซึ่งมีเครื่องหมายการเลือกตัวนับ sacB พลาสมิดถูกเปลี่ยนเป็นเซลล์ที่มีความสามารถของสายพันธุ์ K. pneumoniae โดยการใช้ไฟฟ้า จากนั้นโคโลนีจะถูกเลือกในเพลต Luria–Bertani (LB) ที่อุณหภูมิ 42 °C ด้วยคลอแรมเฟนิคอล (25 มก./ลิตร) และคาสเซ็ตต์แบบรวมถูกบ่มโดยการแสดงออกของ sacB ภายใต้ความดันซูโครส การบูรณาการและการตัดออกได้รับการยืนยันในสายพันธุ์กลายทั้งหมดโดยการคัดกรอง PCR โดยใช้ไพรเมอร์เฉพาะจีโนม

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

Klebsiella pneumoniae ผลิตตามธรรมชาติในปริมาณที่ค่อนข้างมาก 1,3-Propanediol (1,3-PD)
2,3-butanediol (2,3-BD) รวมทั้งผลพลอยได้หลากหลาย
โดยใช้กลีเซอรีนเป็นแหล่งคาร์บอน ldhA และ mdh ยีน
ใน Klebsiella pneumoniae ยีนที่ขึ้นอยู่กับในซิลิโคนจะถูกลบออก
การจำลองการเคาะโดยใช้การเพิ่ม 1,3-PD เป็นแนวทาง
และ 2, 3 - การผลิต BD และลดการก่อตัวของผลพลอยได้และการชะลอการเจริญเติบโตของเซลล์ นอกจากนี้
ความเร็วซึ่งเป็นที่รู้จักสำหรับผลกระทบที่รุนแรง 1,3-PD และ 2,3-
เพิ่มประสิทธิภาพการผลิต BD ของสายพันธุ์ Klebsiella นี่
สายพันธุ์ Klebsiella pneumoniae ΔldhAΔmdh ผลิต 125 กรัม / ลิตร
ใช้ Klebsiella pneumoniae KCTC12133BP เป็นเจ้าภาพ
สำหรับการพัฒนาสายพันธุ์ต่าง ๆ ของการกลายพันธุ์
ในการศึกษาครั้งนี้ การลบในเฟรมจะขึ้นอยู่กับ
การใช้ polymerase ที่ทับซ้อนกันสำหรับการปรับโครงสร้าง isosogenic
ผลิตภัณฑ์ปฏิกิริยาลูกโซ่ (PCR) ผลิตภัณฑ์ที่ทับซ้อนกัน
สองส่วนประกอบด้วยต้นน้ำประมาณ 500bp และ
ที่ปลายน้ำของยีนเป้าหมาย

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

Klebsiella pneumoniaeผลิตปริมาณ1,3-โพรพิลีนไกลคอล( 1,3-PD )ตามธรรมชาติ
2,3-บิวทานอล(2,3-BD)และผลพลอยได้ต่างๆ
ใช้กลีเซอรอลเป็นแหล่งคาร์บอน ยีน ldha และ mdh
ใน klebsiella pneumoniae ขึ้นอยู่กับยีนคอมพิวเตอร์ของมันถูกลบออก
การจําลองการเคาะด้วยเกณฑ์การเพิ่มประสิทธิภาพ1,3-PD
และผลิต2,3-BDและลดผลพลอยได้จากการก่อตัวและการเจริญเติบโตของเซลล์ นอกจากนี้ความผันผวน
อย่างที่รู้ ความเร็วมีผลกระทบอย่างมากกับ 1,3-pd และ 2,3-
เพิ่มประสิทธิภาพการผลิตBDในสายพันธุ์Klebsiella นี่
k.สายพันธุ์pneumoniaeδldhAδmdhผลิต125กรัม/ลิตร
KCTC 12133BP pneumoniaeใช้เป็นโฮสต์
ใช้ในการพัฒนาสายพันธุ์กลายพันธุ์ต่างๆที่เคาะออก
ในการศึกษานี้ การลบภายในกล่องจะขึ้นอยู่กับ
การรวมตัวของhomologousโดยใช้โพลีเมอร์ที่ทับซ้อนกัน
ผลิตภัณฑ์ปฏิกิริยาโซ่( PCR ) ของการทับซ้อนกัน
สองชิ้นจากต้นน้ําประมาณ500 bpและ
ขั้นตอนล่างของยีนเป้าหมายจะถูกขยายและทับซ้อนกันโดยPCR ชิ้นส่วนนี้ถูกโคลนนิ่งลงในพลาสมิดpKGSที่ทนต่อchloromycinซึ่งมีเครื่องหมายการคัดค้านsacB ( Kim et al.,2013 ) และพลาสมา
เปลี่ยนเป็นเซลล์ที่ตอบสนองต่อโรคKlebsiella pneumoniae
การกรองด้วยไฟฟ้าเจาะ และเลือกอาณานิคม
chloromycin ( 25มก. /ลิตร)ถูกเพิ่มลงในจานluria-bertaini ( LB )ที่อุณหภูมิ42องศาเซลเซียสและกล่องรวมจะถูกบ่มด้วยวิธีการดังต่อไปนี้
การแสดงออกของsacBภายใต้ความดันซูโครส การผสานรวมและ
การผ่าตัดได้รับการยืนยันโดยการตรวจคัดกรองPCRในกลายพันธุ์ทั้งหมด
ใช้ไพรเมอร์เฉพาะจีโนม