Retrograde transport of Ad to the s

Retrograde transport of Ad to the spinal cord after TA muscle injection is inefficient
Studies in rats have shown that injection of muscle with Ad can lead to efficient retrograde transport of the virus to motor neuron cell bodies in the spinal cord (Baumgartner and Shine, 1998, Ghadge et al., 1995 and Nakajima et al., 2008). Retrograde transport has also been observed for a number of different viral vectors including adeno-associated virus (Bockstael et al., 2011) and lentivirus (Hirano et al., 2013). To determine if our modified viruses demonstrated altered retrograde transport, we injected TA muscle with 5×1012 VP/kg of the various viruses in a solution containing Texas-Red conjugated Dextran. Dextran is taken up by motor neurons, which would fluoresce red, and allows us to identify the appropriate region of the spinal cord for β-gal staining (Nance and Burns, 1990). Spinal cords from treated mice were sectioned until fluorescent motor neurons were visible (Fig. 6A), and the next adjacent section was stained with X-gal to visualise the efficiency of Ad transduction. As shown in Fig. 6B, we only observed sparse and sporadic expression of β-gal in motor neurons, regardless of virus identity. These results suggest that the efficiency of uptake and retrograde transport of Ad in mice is low, and is not improved by reduced fibre size or the presence of a heparan sulphate proteoglycan binding region on the fibre knob. Given that Ad does not infect motor neuron-like cells in culture very efficiently (Fig. 2B), it is perhaps not surprising that the efficiency of uptake and transduction of motor neurons in vivo is low. An enhancement in motor neuron uptake may be achieved through introduction of peptide motifs into the Ad capsid that specifically target infection to neurons ( Poulin et al., 2011 and Terashima et al., 2009), but this has yet to be examined. Alternatively, canine adenovirus has shown an enhanced ability to infect neurons and undergo retrograde transport ( Soudais et al., 2001), suggesting it may be more amenable for the treatment of diseases of the motor neuron such as spinal muscular atrophy or amyotrophic lateral sclerosis ( Goulet et al., 2013a and San Sebastian et al., 2013).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ขนส่ง retrograde โฆษณาไปสันหลังหลังจากฉีดกล้ามเนื้อตาต่ำการศึกษาในหนูได้แสดงให้เห็นว่า การฉีดกล้ามเนื้อกับโฆษณาสามารถนำไปสู่ประสิทธิภาพขนส่ง retrograde ของไวรัสเพื่อร่างกายเซลล์ประสาทในสันหลัง (Baumgartner และขัด 1998, Ghadge และ al., 1995 และซัป et al., 2008) นอกจากนี้ยังได้พบ retrograde ขนส่งจำนวนแตกเวกเตอร์ไวรัส lentivirus (โน่ et al., 2013) และเชื่อมโยง adeno ไวรัส (Bockstael et al., 2011) กำหนดถ้าไวรัสของเราแก้ไขสาธิต retrograde ขนเปลี่ยน เราฉีดกล้ามเนื้อตา ด้วย 5 × 1012 VP/กก. ของไวรัสต่าง ๆ ในโซลูชันที่ประกอบด้วยเท็กซัสแดงกลวงเดกซ์แทรน เดกซ์แทรนถูกใช้ไปกับมอเตอร์ neurons ซึ่งจะ fluoresce สีแดง และช่วยให้เราสามารถระบุขอบเขตที่เหมาะสมของสันหลังในβ gal ย้อมสี (Nance และไหม้ 1990) สายสไปนัลจากหนูบำบัดถูกจัดแบ่งเป็นส่วน ๆ neurons มอเตอร์เรืองแสงมองเห็น (Fig. 6A), และส่วนอยู่ติดกันถัดไปเป็นสี ด้วย X-กัลไป visualise ประสิทธิภาพของโฆษณา transduction ดังที่แสดงใน Fig. 6B เราเพียงสังเกตบ่อ และมีค่าของβ-กัลในมอเตอร์ neurons โดยตัวไวรัส ผลลัพธ์เหล่านี้แนะนำว่า ประสิทธิภาพการดูดซับและขนส่ง retrograde โฆษณาในหนูต่ำ และไม่ต้องปรับขนาดของเส้นใยลดลงหรือของภูมิภาครวมมซัลเฟต proteoglycan heparan บนปุ่มไฟเบอร์ ระบุว่า โฆษณาไม่ติดเชื้อเซลล์ประสาทเหมือนในวัฒนธรรมอย่างมีประสิทธิภาพ (Fig. 2B), ก็อาจจะไม่น่าแปลกใจว่า ประสิทธิภาพการดูดซับและ transduction ของ neurons มอเตอร์ในสัตว์ทดลองมีน้อย การเพิ่มประสิทธิภาพในการดูดซับประสาทอาจได้รับผ่านการแนะนำของเพปไทด์ความใน capsid โฆษณาที่กำหนดเป้าหมายการ neurons (Poulin et al., 2011 และ Terashima et al., 2009) การติดเชื้อเฉพาะ แต่นี้ยังสามารถตรวจสอบ หรือ adenovirus สุนัขได้แสดงความสามารถในการเพิ่มการติดเชื้อ neurons และรับขนส่ง retrograde (Soudais และ al., 2001), แนะนำมันอาจ amenable เพิ่มเติมสำหรับการรักษาโรคประสาทเช่นกล้ามเนื้อฝ่อสันหลังหรือ amyotrophic ด้านข้างเส้นโลหิตตีบ (Goulet et al., 2013a และซานเซบาสเตียน et al., 2013)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การขนส่งถอยหลังเข้าคลองของโฆษณาเพื่อไขสันหลังหลังฉีดกล้ามเนื้อ TA ไม่มีประสิทธิภาพ
การศึกษาในหนูที่ได้แสดงให้เห็นการฉีดของกล้ามเนื้อด้วยการโฆษณาที่สามารถนำไปสู่การขนส่งที่มีประสิทธิภาพถอยหลังเข้าคลองของไวรัสกับร่างกายมอเตอร์เซลล์ประสาทในไขสันหลัง (Baumgartner Shine และ 1998 Ghadge et al., 1995 และนากาจิมา et al., 2008) การขนส่งถอยหลังเข้าคลองยังได้รับการตั้งข้อสังเกตสำหรับจำนวนของพาหะของเชื้อไวรัสที่แตกต่างกันรวมทั้งไวรัส adeno ที่เกี่ยวข้อง (Bockstael et al., 2011) และ lentivirus (Hirano et al., 2013) เพื่อตรวจสอบว่าการแก้ไขไวรัสของเราแสดงให้เห็นถึงการเปลี่ยนแปลงการขนส่งถอยหลังเข้าคลองเราฉีดกล้ามเนื้อ TA 5 × 1,012 VP / กก. ของไวรัสต่างๆในการแก้ปัญหาที่มี Dextran ผันเท็กซัสแดง dextran ถูกนำขึ้นมาจากมอเตอร์เซลล์ซึ่งจะเรืองแสงสีแดงและช่วยให้เราสามารถระบุพื้นที่ที่เหมาะสมของเส้นประสาทไขสันหลังสำหรับการย้อมสีβ-แกลลอน (แนนซ์และเบิร์นส์, 1990) สายกระดูกสันหลังจากหนูได้รับการรักษาที่ถูกตัดจนมอเตอร์เซลล์เรืองแสงมองเห็นได้ (รูป. 6A) และส่วนที่อยู่ติดกันต่อไปที่ถูกย้อมด้วย X-gal เพื่อให้มองเห็นประสิทธิภาพของพลังงานโฆษณา ดังแสดงในรูป 6B เราเท่านั้นที่สังเกตเห็นการแสดงออกเบาบางและเป็นระยะ ๆ ของβ-แกลลอนในมอเตอร์เซลล์โดยไม่คำนึงถึงตัวตนของไวรัส ผลการศึกษานี้แสดงให้เห็นว่ามีประสิทธิภาพในการดูดซึมและการขนส่งถอยหลังเข้าคลองของโฆษณาในหนูอยู่ในระดับต่ำและไม่ได้ปรับตัวดีขึ้นตามขนาดเส้นใยลดลงหรือการปรากฏตัวของซัลเฟต heparan proteoglycan ภูมิภาคมีผลผูกพันกับลูกบิดเส้นใย ระบุว่าโฆษณาไม่ได้ติดเชื้อมอเตอร์เซลล์ประสาทเหมือนในวัฒนธรรมอย่างมีประสิทธิภาพมาก (รูป. 2B) ก็อาจจะไม่น่าแปลกใจที่มีประสิทธิภาพในการดูดซึมและพลังงานของมอเตอร์เซลล์ในร่างกายอยู่ในระดับต่ำ เพิ่มประสิทธิภาพในการดูดซึมมอเตอร์เซลล์ประสาทอาจจะประสบความสำเร็จผ่านการแนะนำของลวดลายเปปไทด์เป็น capsid โฆษณาที่กำหนดเป้าหมายการติดเชื้อเซลล์ประสาท (Poulin et al., 2011 และ Terashima et al., 2009) แต่ตอนนี้ยังไม่ได้รับการตรวจสอบ อีกทางเลือกหนึ่ง adenovirus สุนัขได้แสดงให้เห็นความสามารถที่เพิ่มขึ้นที่จะติดเชื้อเซลล์ประสาทและการขนส่งได้รับการถอยหลังเข้าคลอง (Soudais et al., 2001) แสดงให้เห็นว่ามันอาจจะคล้อยมากขึ้นสำหรับการรักษาโรคของเซลล์ประสาทมอเตอร์เช่นกล้ามเนื้อลีบกระดูกสันหลังหรือเส้นโลหิตตีบด้านข้าง amyotrophic ( Goulet et al., 2013a และซานเซบาสเตียน et al., 2013)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ถอยหลังเข้าคลองขนส่งโฆษณาไปยังไขสันหลัง หลังจากฉีดกล้ามเนื้อทาไม่ได้ผล
การศึกษาในหนูแสดงให้เห็นว่าการฉีดกล้ามเนื้อกับโฆษณาสามารถนำไปสู่ประสิทธิภาพถอยหลังเข้าคลองขนส่งของไวรัสกับเซลล์ร่างกายเซลล์ประสาทสั่งการในไขสันหลัง ( รู้จักกันดี และท้า , 1998 , ghadge et al . , 1995 และนากาจิม่า et al . , 2008 )ขนส่งถอยหลังเข้าคลองยังได้รับการตรวจสอบสำหรับจำนวนของพาหะของไวรัสที่แตกต่างกันรวมทั้งสัมพันธ์ - Adeno ไวรัส ( bockstael et al . , 2011 ) และเลนติไวรัส ( Hirano et al . , 2013 ) เพื่อตรวจสอบว่าเราแก้ไขไวรัสแสดงให้เห็นถึงการเปลี่ยนแปลงขนส่งถอยหลังเข้าคลอง เราฉีดทากล้ามเนื้อ 5 × 1012 VP / kg ของไวรัสต่างๆในสารละลายที่มีเท็กซัสแดงและ dextran .เดกซ์แทรนเป็นขึ้นมา โดยเซลล์ประสาท ซึ่งจะเรืองแสงสีแดง และช่วยให้เราสามารถระบุพื้นที่ที่เหมาะสมของไขสันหลังสำหรับบีตา - gal staining ( แนนซี่และเผาไหม้ , 2533 ) ของไขสันหลัง จากหนูที่ถูกตัดจนเรืองแสงเซลล์ประสาท คือมองเห็นได้ ( รูปที่ 6 ) , และส่วนถัดไปติดกันเปื้อน x-gal ที่จะเห็นภาพการประสิทธิภาพของโฆษณาผ่าน . ดังแสดงในรูปที่แรง เราสังเกตโปร่งและมีประปราย การแสดงออกของบีตา - สาวในเซลล์ประสาท โดยไม่คำนึงถึงสถานะของไวรัส ผลลัพธ์เหล่านี้ชี้ให้เห็นว่า ประสิทธิภาพของการถอยหลังเข้าคลองขนส่งลงประกาศในหนูลง ไม่ใช่ดีขึ้น โดยลดขนาดหรือการปรากฏตัวของเส้นใยโปรตีนโอไกลแคน heparan ขุ่นผูกพันเขตบนเส้นใยลูกบิดระบุว่า โฆษณาไม่ติด มอเตอร์ เซลล์ เช่น เซลล์ในวัฒนธรรมมีประสิทธิภาพมาก ( รูปที่ 2B ) , มันอาจจะไม่น่าแปลกใจว่า ประสิทธิภาพของการใช้พลังงานของมอเตอร์และเซลล์ประสาทในร่างกายต่ำ การเพิ่มประสิทธิภาพในการดูดซึมของเซลล์ประสาทสั่งการได้ผ่านการแนะนำของเปปไทด์ลวดลายลงโฆษณาตราหน้าว่าโดยเฉพาะเป้าหมายการติดเชื้อไปยังเซลล์ประสาท ( พูแลน et al . ,2011 และเทราชิม่า et al . , 2009 ) แต่นี้ยังไม่ได้ถูกตรวจสอบ อีกวิธีหนึ่งคือ อะดีโนไวรัสสุนัขได้แสดงการปรับปรุงความสามารถที่จะติดเชื้อเซลล์ประสาท และผ่านขนส่งถอยหลังเข้าคลอง ( soudais et al . , 2001 ) แนะนำมันอาจจะยอมรับมากขึ้นสำหรับการรักษาของโรคเซลล์ประสาทมอเตอร์ เช่น การเสื่อมของกล้ามเนื้อกระดูกสันหลังหรือโรคเอแอลเอส ( goulet et al . ,ที่มีมากกว่าและซานเซบาสเตียน et al . , 2013 )