2.4. Techniques used in this work2.

2.4. Techniques used in this work
2.4.1. E- and EAC-rosette-formation tests
E- and EAC-rosette-formation tests [10] were used to
assess the general number of circulating T and B
lymphocytes (without determination of subfractions
such as CD4, CD8, etc). Peripheral blood
lymphocytes were isolated in Histopaque-1077 density
gradient (Sigma, USA) and washed three times in media
RPMI-1640 (SRCVB ‘Vector’, Russia). Sheep erythrocytes
(intact or processed with mice complement)
were used as agents for T or B rosette formation. The
calculated number of rosette-forming cells (for 200
lymphocytes) were converted into absolute number
considering the total number of leukocytes and the
percentage of blood lymphocytes and expressed as a
number109:l.
2.4.2. Lymphocyte proliferation assay
The inactivated EBO (2 h at 60°C) was dialyzed
against the culture medium (a complete RPMI-1640
medium) and at a dose of 2 mg:ml was used as a specific
antigen; tick-borne encephalitis vaccine (TBE) at a dose
of 2 mg:ml was used as a nonspecific antigen; concanavalin
A (conA; Sigma, USA) at a dose of 10 mg:ml
and pokeweed mitogen (PWM; Sigma, USA) at a dose
of 10 mg:ml were used as mitogens. Lymphocytes isolated
from heparinized blood in a Histopaque-1077
density gradient were incubated (106 cells:well) in flatbottomed
cultivation plates at 37°C over 78 h. 3Hthymidine
at a concentration of 2 mCi:well was added
12 h before the end of the incubation. On the completion
of the incubation, the plates were frozen and then
washed in a Cell Harvester unit (Flow, UK). The
radioactivity was counted in a toluene scintillator using
a Mark-III counter. Each assay was done in triplicate.
2.4.3. Interferon (IFN) -a
Interferon (IFN)-a in serum was determined using
the suppression of cytopathic effect of a test virus
(mouse encephalomyocarditis virus, EMC) in L-68 cell
culture. IFN unit was defined as a dilution that provides
a 50% protection of the cell monolayer from the
cytopathic effect of EMC [11].
2.4.4. Cytotoxic acti6ity of natural killers (NK)
Cytotoxic activity of natural killers (NK) was determined
through a toxicity test using the radioactive
3H-uridine precursor according to the technique described
earlier [12]. Human myeloleukemia cells K-562
were used as NK targets.
2.4.5. Tumor necrosis factor (TNF) -a
Tumor necrosis factor (TNF)-a concentration in
serum was determined using ELISA kit (Boehringer
Mannheim, Germany).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.4. เทคนิคที่ใช้ในการทำงานนี้2.4.1 การทดสอบ E - และ EAC-rosette-ผู้แต่งใช้ทดสอบ E - และ EAC-rosette-ก่อ [10]ประเมินทั่วไปจำนวนหมุนเวียน T และ Blymphocytes (โดยไม่มีกำหนด subfractionsเช่น CD4, CD8 ฯลฯ) เลือดอุปกรณ์ต่อพ่วงlymphocytes แยกต่างหากในความหนาแน่น Histopaque-1077การไล่ระดับสี (ซิก สหรัฐอเมริกา) และหินสามครั้งในสื่อRPMI-1640 (SRCVB 'เวกเตอร์' รัสเซีย) แกะ erythrocytes(เหมือนเดิม หรือประมวลผล ด้วยหนูส่วนเติมเต็ม)ใช้เป็นตัวแทนสำหรับก่อ rosette T หรือ B ที่คำนวณจำนวนเป็น rosette เซลล์ (สำหรับ 200lymphocytes) ได้ถูกแปลงเป็นจำนวนเต็มพิจารณาจำนวนของ leukocytes และเปอร์เซ็นต์ของเลือด lymphocytes และแสดงเป็นตัวหมายเลข 109:l2.4.2. lymphocyte การงอกวิเคราะห์EBO inactivated (h 2 ที่ 60° C) เป็น dialyzedกับสื่อวัฒนธรรม (แบบสมบูรณ์ RPMI-1640กลาง และที่ปริมาณของ 2 mg:ml ถูกใช้เป็นการเฉพาะตรวจหา วัคซีนโรคไข้สมองอักเสบ tick-borne (TBE) ในปริมาณ2 mg:ml ถูกใช้เป็นการตรวจหาเจาะจง concanavalin(ConA ซิก สหรัฐอเมริกา) ที่ปริมาณของ 10 mg:mlและ pokeweed mitogen (PWM ซิก สหรัฐอเมริกา) ที่ปริมาณของ 10 mg:ml ถูกใช้เป็น mitogens Lymphocytes ที่แยกต่างหากจากเลือด heparinized ใน Histopaque-1077incubated (106 เซลล์: ดี) ใน flatbottomed มีการไล่ระดับความหนาแน่นแผ่นปลูกที่ 37° C มากกว่า 78 h. 3Hthymidineที่ความเข้มข้นของ 2 mCi:well เพิ่มh 12 ก่อนที่จะสิ้นสุดของคณะทันตแพทยศาสตร์ที่ ในความสมบูรณ์ของคณะทันตแพทยศาสตร์ แผ่นถูกแช่แข็งแล้วล้างในเก็บเกี่ยวเซลล์หน่วย (กระแส UK) ที่radioactivity ถูกนับในโทลูอีน scintillator ใช้ตัว Mark III นับ ทดสอบแต่ละทำได้ใน triplicate2.4.3. อินเตอร์เฟียรอน (IFN) - ตัวอินเตอร์เฟียรอน (IFN) -เซรั่มในกำหนดใช้ปราบปรามของผลของไวรัสทดสอบ cytopathic(เมาส์ encephalomyocarditis ไวรัส EMC) ในเซลล์ L-68วัฒนธรรม IFN หน่วยถูกกำหนดเป็นแบบเจือจางที่ป้องกัน 50% ของ monolayer เซลล์จากการผล cytopathic ของ EMC [11]2.4.4 การ cytotoxic acti6ity ของยาธรรมชาติ (NK)กำหนดกิจกรรม cytotoxic ของยาธรรมชาติ (NK)ผ่านการทดสอบความเป็นพิษโดยใช้การสัมผัสกัมมันตภาพรังสีสารตั้งต้น 3H uridine ตามเทคนิคที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [12] Myeloleukemia มนุษย์เซลล์ K-562ได้ใช้เป็นเป้าหมายของ NK2.4.5. เนื้องอกการตายเฉพาะส่วนปัจจัย (TNF) - ตัวอัตราการตายเฉพาะส่วนเนื้องอก (TNF) -ความเข้มข้นในเซรั่มได้กำหนดใช้ ELISA ชุด (Boehringerมันน์ไฮม์ ประเทศเยอรมนี)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.4 เทคนิคที่ใช้ในงานนี้
2.4.1 E- และการทดสอบ EAC-ดอกกุหลาบก่อ
E- และการทดสอบ EAC-ดอกกุหลาบก่อ [10] ถูกนำมาใช้ในการ
ประเมินจำนวนทั่วไปของการไหลเวียนของ T และ B
lymphocytes (ไม่กำหนด subfractions
เช่น CD4 ?, CD8 ?, ฯลฯ ) เลือด
เซลล์เม็ดเลือดขาวที่แยกได้ในความหนาแน่น Histopaque-1077
ลาด (ซิกม่าสหรัฐอเมริกา) และล้างสามครั้งในสื่อ
RPMI-1640 (SRCVB 'เวกเตอร์, รัสเซีย) เม็ดเลือดแดงแกะ
(เหมือนเดิมหรือประมวลผลด้วยหนูเสริม)
ถูกนำมาใช้เป็นตัวแทน T หรือดอกกุหลาบก่อ B
คำนวณจำนวนของเซลล์ดอกกุหลาบขึ้นรูป (200
เซลล์เม็ดเลือดขาว) ได้รับการแปลงเป็นตัวเลขที่แน่นอน
พิจารณาจำนวนของเม็ดเลือดขาวและ
ร้อยละของเซลล์เม็ดเลือดขาวในเลือดและแสดงเป็น
จำนวน 109: ล.
2.4.2 เม็ดเลือดขาวการทดสอบการขยาย
การใช้งาน EBO (2 ชั่วโมงที่ 60 ° C) ถูก dialyzed
กับอาหารเลี้ยงเชื้อ (ที่สมบูรณ์ RPMI-1640
ขนาดกลาง) และขนาด 2 มิลลิกรัม: มล. ใช้เป็นที่เฉพาะเจาะจง
แอนติเจน; การฉีดวัคซีนป้องกันโรคไข้สมองอักเสบที่เกิดจากเห็บ (TBE) ขนาด
2 มิลลิกรัม: มล. ใช้เป็นแอนติเจนเชิญชม; concanavalin
(Cona; ซิกสหรัฐอเมริกา) ขนาด 10 มิลลิกรัม: มล.
และโปกวีด mitogen (PWM; ซิกสหรัฐอเมริกา) ในขนาด
10 มก.: มล. ใช้เป็น mitogens เซลล์เม็ดเลือดขาวที่แยกได้
จากเลือด heparinized ใน Histopaque-1077
ความหนาแน่นของการไล่ระดับสีถูกบ่ม (106 เซลล์: กัน) ใน flatbottomed
จานเพาะปลูกที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสนานกว่า 78 ชั่วโมง 3Hthymidine
ที่ความเข้มข้น 2 มิลลิ: ดีถูกเพิ่มเข้ามา
12 ชั่วโมงก่อนที่จะสิ้นสุดของการบ่ม เมื่อเสร็จสิ้น
ของการบ่มแผ่นถูกแช่แข็งแล้ว
ล้างในเครื่องเก็บเกี่ยวเซลล์ (การไหลของสหราชอาณาจักร)
กัมมันตภาพรังสีถูกนับใน scintillator โทลูอีนโดยใช้
เคาน์เตอร์มาร์ค-III ทดสอบแต่ละคนได้ทำในเพิ่มขึ้นสามเท่า.
2.4.3 interferon (IFN) -a
Interferon (IFN) -a ในซีรั่มที่ถูกกำหนดโดยใช้
การปราบปรามของผลกระทบของเชื้อไวรัส cytopathic ทดสอบ
(เมาส์ไวรัส encephalomyocarditis อีเอ็มซี) ในเซลล์ L-68
วัฒนธรรม หน่วย IFN ถูกกำหนดเป็นเจือจางที่ให้
ความคุ้มครอง 50% ของ monolayer เซลล์จาก
ผลกระทบของอีเอ็มซี cytopathic [11].
2.4.4 cytotoxic acti6ity ของฆาตกรธรรมชาติ (NK)
กิจกรรม Cytotoxic ของฆาตกรธรรมชาติ (NK) ก็ตัดสินใจที่
ผ่านการทดสอบความเป็นพิษโดยใช้สารกัมมันตรังสี
สารตั้งต้น 3H-uridine ตามเทคนิคที่อธิบายไว้
ก่อนหน้านี้ [12] เซลล์ myeloleukemia มนุษย์ K-562
ถูกนำมาใช้เป็นเป้าหมาย NK.
2.4.5 ปัจจัยเนื้อร้ายเนื้องอก (TNF) -a
ปัจจัยเนื้อร้ายเนื้องอก (TNF) ความเข้มข้นใน -a
ซีรั่มที่ถูกกำหนดโดยใช้ชุด ELISA (Boehringer
ไฮม์, เยอรมนี)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.4 . เทคนิคที่ใช้ในงานนี้
เครื่องมือกำจัดเพื่อย้าย . E - EAC Rosette และสร้างการทดสอบ
E - EAC rosette และรูปแบบการทดสอบ [ 10 ] ใช้
ประเมินทั่วไปจำนวนหมุนเวียน T และ B
ลิมโฟซัยต์ ( ไม่มีกำหนด subfractions
เช่น CD4  การศึกษา  ฯลฯ ) เม็ดเลือดขาวลิมโฟไซต์ถูกแยกความหนาแน่นความลาดชัน

histopaque-1077 ( Sigma , USA ) และล้างสามครั้งในสื่อ
rpmi-1640 ( srcvb ' ฟรี ' , รัสเซีย ) แกะเม็ดเลือดแดง
( เหมือนเดิมหรือประมวลผลกับหนูกว่า )
ถูกใช้เป็นตัวแทน T หรือบีเกิดดอกกุหลาบ .
คำนวณจำนวนเซลล์รูปดอกกุหลาบ ( 200
เม็ดเลือดขาว ) ถูกแปลงเป็นจำนวน สัมบูรณ์
พิจารณาจำนวนของเม็ดเลือดขาวและค่าเลือดและเม็ดเลือดขาว

แสดงเป็นหมายเลข  109 : L .
2.4.2 .โดยการใช้ไฮโดร ebo (
2 H 60 ° C ) คือซิ
กับสื่อวัฒนธรรม ( สมบูรณ์ rpmi-1640
ปานกลาง ) และในขนาด 2 มก. : มล ถูกใช้เป็นแอนติเจนที่เฉพาะเจาะจงรับวัคซีนป้องกันโรคไข้สมองอักเสบ
; ติ๊ก ( ทีบี ) ที่ปริมาณรังสี
2 มก. : ml ใช้ เป็นแอนติเจนจะถูกเจาะจง ;
( cona ; Sigma , USA ) ในขนาด 10 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร และปรากฎ pokeweed :
( PWM ; Sigma , USA ) ที่ปริมาณรังสี
10 มก. : มลใช้เป็น mitogens . ถูกแยกจากเลือดในกลุ่ม

histopaque-1077 ความหนาแน่นลาดถูกบ่ม ( 106 เซลล์ดี ) ในการ flatbottomed
แผ่น 37 °องศาเซลเซียสกว่า 78 ชั่วโมง 3hthymidine
ที่ความเข้มข้น 1 มิลลิคูรี : ดีเพิ่ม
12 ชั่วโมงก่อนที่จะสิ้นสุดของการบ่ม ในความสมบูรณ์
ของการบ่มเพาะ จานถูกแช่แข็งแล้ว
ล้างในเครื่องเก็บเกี่ยวเซลล์หน่วย ( UK ไหล )
กัมมันตภาพรังสีถูกนับในโทลูอีนโดยใช้เครื่องหมายเช่น
3 เคาน์เตอร์ แต่ละวิธีก็ทำทั้งสามใบ
2.4.3 . รอน ( IFN ) -
รอน ( IFN ) - ในซีรั่มมีการพิจารณาผลของการปราบปราม cytopathic

( เมาส์ encephalomyocarditis ทดสอบไวรัสไวรัส , EMC ) ในเซลล์เพาะเลี้ยง
l-68 .หน่วยหนึ่งถูกกำหนดเป็นสารที่ให้
50% คุ้มครองเซลล์อย่างจากผลของอีเอ็มซี cytopathic [ 11 ] .
2.4.4 . acti6ity เป็นพิษต่อเซลล์นักฆ่าตามธรรมชาติ ( NK )
พิษต่อเซลล์มะเร็งของนักฆ่าตามธรรมชาติ ( NK ) ตั้งใจ
ผ่านการทดสอบความเป็นพิษโดยใช้สารกัมมันตรังสี
3 H ยูริดีนสารตั้งต้นตามเทคนิคอธิบายไว้
ก่อนหน้านี้ [ 12 ] k-562
myeloleukemia เซลล์มนุษย์ใช้เป็นปุ๋ยเป้าหมาย .
2.4.5 . เนื้องอกเนื้อร้ายปัจจัย ( TNF ) -
เนื้องอกเนื้อร้ายปัจจัย ( TNF ) ความเข้มข้นใน
เซรั่มใช้วิเคราะห์ชุด ELISA (
Boehringer Mannheim , เยอรมัน )