- ข้อความ
- ประวัติศาสตร์
(b). การยึดเกาะของ mouse แอนติ-ฮิวเ
(b). การยึดเกาะของ mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 โมโนโคลนอล antibodies clones 12H3 and
20E5 with full-length ฮิวเมน CD134 construct and various truncated ฮิวเมน
CD134 constructs expressed on 293-F cell line (domain mapping)
In order to analyze the fine specificity of mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134
โมโนโคลนอล antibodies clones 12H3 and 20E5, the location of เอพิโทป(s) recognized 25 by mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 โมโนโคลนอล antibodies clones 12H3 and 20E5 was
determined by domain mapping. The ability of mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134
โมโนโคลนอล antibodies clones 12H3 and 20E5 to bind to truncated ฮิวเมน CD134
constructs, expressed on the surface of (HEK-derived) 297-F cells, was determined
by FACS analysis.
30 Based on literature (Swiss-Prot: P43489.1; Latza et al. Eur J Immunol 1994;
24: 677-683; Bodmer et al. Trends Biochem Sci 2002; 27: 19-26; Compaan et al.
Structure 2006; 14: 1321-1330; US Patent Publ. No. 2011/0028688 Al), ซิสเทอีน-
rich domains (CRD) and a hingelike structure in the ภายนอกเซลล์ region of ฮิวเมน
CD134 were identified. CRDs are coded CRD1, CRD2, (truncated) CRD3,
(truncated) CRD4 (see รูป 20). CRDs contain topologically distinct types of
modules, called an A-module and a B-module (see also รูป 20). A modules are C-
shaped structures, and B-modules are S-shaped structures. A typical CRD คือ
5 usually composed of A1-B2-modules หรือ A2-B1-modules (or, less frequently, a
different pair of modules, like Al-B1) with 6 conserved ซิสเทอีน residues, โดยที่
the numeral denotes the number of disulphide bridges within each module (see also
รูป 20). As shown in รูป 20, 5 different ฮิวเมน CD134 constructs were
generated and expressed: (1) full-length ฮิวเมน CD134 construct, which starts with 10 N-terminal CRD1 (i.e., CRD1 Al-B2-module covers amino acids 29-65), and
therefore denoted as `CRD1', and ประกอบรวมด้วยd amino acids 1-277 (see SEQ ID NO. 1),
(2) `CRD2' construct, which starts with N-terminal CRD2 (i.e., CRD2 Al B2-module
covers amino acids 66-107), and ประกอบรวมด้วยd amino acids 66-277 linked to signal
peptide amino acids 1-28 (see SEQ ID NO. 30), (3) `CRD3' construct, which starts 15 with N terminal CRD3 (i.e., CRD3 A1-Bl-module covers amino acids 108-146
(according to Compaan et al. Structure 2006; 14: 1321-1330) หรือ truncated CRD3
Al-module covers amino acids 108-126 (according to Latza et al. Eur J Immunol
1994; 24: 677-683)), and ประกอบรวมด้วยd amino acids 108-277 linked to signal peptide
amino acids 1-28 (see SEQ ID NO. 31), (4) `CRD4' construct, which consists of N-
20 terminal CRD4 หรือ CRD3 subdomain B1 module/truncated CRD4 Al-module (i.e.,
CRD4 Al-B1-module covers amino acids 127 167 (Latza et al. Eur J Immunol 1994;
24: 677-683) หรือ a combination (not shown in รูป 20) of CRD3 subdomain Bl-
module with truncated CRD4 Al-module covers amino acids 127-146 with amino
acids 147-167, ตามลำดับ (Compaan et al. Structure 2006; 14: 1321-1330)), and 25 ประกอบรวมด้วยd amino acids 127-277 linked to signal peptide amino acids 1-28 (see SEQ
ID NO. 32), and (5) 'truncated (tc) CRD4' construct, which consists of N-terminal
truncated CRD4 หรือ CRD4 subdomain B1-module (i.e., truncated CRD4 Al module
covers amino acids 147-167 (Compaan et al. Structure 2006; 14: 1321-1330) หรือ
CRD4 subdomain B 1-module (not shown in รูป 20; Latza et al. Eur J Immunol 30 1994; 24: 677-683) covers amino acids 147-167), and ประกอบรวมด้วยd amino acids 147-
277 linked to signal peptide amino acids 1-28 (see SEQ ID NO. 33). By assembly
PCR using AccuprimeTM Pfx DNA Polymerase (Invitrogen), these 5 ฮิวเมน CD134
constructs were generated using primers shown in the following table:
* Primer No. according to Bioceros internal coding system 15
Briefly, cDNA encoding amino acids 1-28 of signal peptide and cDNA
encoding amino acids 66-277 of ฮิวเมน CD134 were amplified using ตามลำดับ
primer pair 362/365 and 364/363 in a PCR reaction with full-length ฮิวเมน CD134
as a template. Subsequently, `CRD2' คอนสตรัคต์ was generated by using these two 20 PCR products in an assembly PCR using primer pair 362/363. The cDNA encoding
`CRD2' คอนสตรัคต์ was subcloned into a pcDNA3.1-derived expression plasmid using
suitable restriction sites. Similarly, `CRD3' คอนสตรัคต์ (amino acids 1-28 of signal
peptide linked to amino acids 108-277 of ฮิวเมน CD134), `CRD4' คอนสตรัคต์ (amino
acids 1-28 of signal peptide linked to amino acid 127 -277), and 'truncated CRD4' 25 คอนสตรัคต์ (amino acids 1-28 of signal peptide linked to amino acid 147-277) were
generated and subcloned in pcDNA3.1-derived expression plasmids using the
corresponding primers shown in abovementioned table. Furthermore, full-length
ฮิวเมน CD134 (SEQ ID NO. 1) was also re-cloned in a pcDNA3.1-derived
expression plasmid.
30 Using the FreeStyleTM 293 Expression System (Invitrogen), FreeStyleTM
293-F cells (Invitrogen) were transiently transfected with the 5 generated variants of ฮิวเมน CD134. After 48-72h, surface ฮิวเมน CD134 expression on transfected cells was analyzed by FACS analysis. To this end, transfected cells were harvested
and put at 1-2x106 cells/mL in ice chilled PBS/BSA/NaN3. Cells were incubated
with 20.0 lig/mL mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 โมโนโคลนอล antibodies clones 12H3 and
20E5 for 30 minutes at 4°C. In parallel, 20.0 Rg/mL mouse IgGlic ไอโซไทป์ control
antibody (BD Biosciences) was used as a เนกาทีฟ control. After extensive washing 5 in PBS/BSA/NaN3, cells were subsequently incubated with 1:200 diluted PE-
conjugated goat แอนติ-mouse IgG (Fcy specific) antibodies (Jackson
ImmunoResearch) for 30 minutes at 4°C. After extensive washing in
PBS/BSA/NaN3, cells were fixed in 2% formaldehyde in PBS/BSA/NaN3 for 30
minutes at 4°C. การยึดเกาะของ antibodies was measured using โฟลไซโตเมทรี
10 (FACSCalibur; BD Biosciences).
As shown in รูป 21, both mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibodies clones
12H3 and 20E5 recognized full-length (denoted as `CRD l' คอนสตรัคต์) ฮิวเมน CD134
on transfected 293-F cells, whereas both mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibodies
clones 12H3 and 20E5 showed no binding on mock-transfected 293-F cells.
15 Moreover, mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibodies clones 12H3 and 20E5 recognized
truncated ฮิวเมน CD134 variants that lacked CRD1 and CRD1-CRD2 (denoted as
`CRD2' คอนสตรัคต์ and `CRD3' คอนสตรัคต์, ตามลำดับ) on transfected 293-F cells. In
contrast, การยึดเกาะของ mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 12H3 against
truncated ฮิวเมน CD134 variant that lacked CRD1-CRD2-truncated CRD3 Al
20 module (denoted as `CRD4' คอนสตรัคต์) was very weak, and การยึดเกาะของ mouse แอนติ-
ฮิวเมน CD134 antibody clone 12H3 against truncated ฮิวเมน CD134 variant that
lacked CRD1-CRD2-truncated CRD3 Al-module-CRD4 subdomain Al-module
(according to definition of Latza et al. Eur J Immunol 1994; 24: 677-683) หรือ
alternatively CRD1-CRD2-CRD3 Al B1 module (according to definition of
25 Compaan et al. Structure 2006; 14: 1321-1330; denoted as `tcCRD4' คอนสตรัคต์) was
completely absent, whereas mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 20E5 showed
a strong binding against truncated ฮิวเมน CD134 variant that lacked CRD1-
CRD2-truncated CRD3 Al-module (denoted as `CRD4' คอนสตรัคต์) and against
truncated ฮิวเมน CD134 variant that lacked CRD1-CRD2-truncated CRD3 Al-
30 module-CRD4 subdomain Al-module (according to definition of Latza et al. Eur J
Immunol 1994; 24: 677 683) หรือ alternatively CRD1-CRD2-CRD3 Al-B1-module
(according to definition of Compaan et al. Structure 2006; 14: 1321-1330; denoted
as `tcCRD4' คอนสตรัคต์).
These results demonstrated that mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibodies
clones 12H3 and 20E5 specifically recognized ฮิวเมน CD134 (comparison of full-
length ฮิวเมน CD134 transfection vs mock transfection). Furthermore, these
results demonstrated that mouse anti ฮิวเมน CD134 antibodies clones 12H3 and 5 20E5 seemed to recognize dissimilar ฮิวเมน CD134 เอพิโทป, which คือ evidenced by
respective lack of binding (using clone 12H3) vs strong binding (using clone 20E5)
with truncated ฮิวเมน CD134 variant that lacked CRD1 CRD2-truncated CRD3
Al-module (denoted as `CRD4' คอนสตรัคต์) and with truncated ฮิวเมน CD134
variant that lacked CRD1-CRD2-truncated CRD3 A1-module-CRD4 subdomain Al-
10 module (according to definition of Latza et al. Eur J Immunol 1994; 24: 677 683) or
alternatively CRD1-CRD2-CRD3 Al-B1-module (according to definition of
Compaan et al. Structure 2006; 14: 1321-1330; denoted as `tcCRD4' คอนสตรัคต์).
These results demonstrated that mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 12H3
did not seem to recognize a ฮิวเมน CD134 เอพิโทป in CRD1 and CRD2, and mouse 15 แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 20E5 did not seem to recognize a ฮิวเมน CD134
เอพิโทป in CRD1, CRD2, and truncated CRD3 A1-module-CRD4 subdomain Al-
module (according to definition of Latza et al. Eur J Immunol 1994; 24: 677-683) หรือ
alternatively CRD1-CRD2-CRD3 Al B1 module (according to definition of
Compaan et al. Structure 2006; 14: 1321-1330).
20E5 with full-length ฮิวเมน CD134 construct and various truncated ฮิวเมน
CD134 constructs expressed on 293-F cell line (domain mapping)
In order to analyze the fine specificity of mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134
โมโนโคลนอล antibodies clones 12H3 and 20E5, the location of เอพิโทป(s) recognized 25 by mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 โมโนโคลนอล antibodies clones 12H3 and 20E5 was
determined by domain mapping. The ability of mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134
โมโนโคลนอล antibodies clones 12H3 and 20E5 to bind to truncated ฮิวเมน CD134
constructs, expressed on the surface of (HEK-derived) 297-F cells, was determined
by FACS analysis.
30 Based on literature (Swiss-Prot: P43489.1; Latza et al. Eur J Immunol 1994;
24: 677-683; Bodmer et al. Trends Biochem Sci 2002; 27: 19-26; Compaan et al.
Structure 2006; 14: 1321-1330; US Patent Publ. No. 2011/0028688 Al), ซิสเทอีน-
rich domains (CRD) and a hingelike structure in the ภายนอกเซลล์ region of ฮิวเมน
CD134 were identified. CRDs are coded CRD1, CRD2, (truncated) CRD3,
(truncated) CRD4 (see รูป 20). CRDs contain topologically distinct types of
modules, called an A-module and a B-module (see also รูป 20). A modules are C-
shaped structures, and B-modules are S-shaped structures. A typical CRD คือ
5 usually composed of A1-B2-modules หรือ A2-B1-modules (or, less frequently, a
different pair of modules, like Al-B1) with 6 conserved ซิสเทอีน residues, โดยที่
the numeral denotes the number of disulphide bridges within each module (see also
รูป 20). As shown in รูป 20, 5 different ฮิวเมน CD134 constructs were
generated and expressed: (1) full-length ฮิวเมน CD134 construct, which starts with 10 N-terminal CRD1 (i.e., CRD1 Al-B2-module covers amino acids 29-65), and
therefore denoted as `CRD1', and ประกอบรวมด้วยd amino acids 1-277 (see SEQ ID NO. 1),
(2) `CRD2' construct, which starts with N-terminal CRD2 (i.e., CRD2 Al B2-module
covers amino acids 66-107), and ประกอบรวมด้วยd amino acids 66-277 linked to signal
peptide amino acids 1-28 (see SEQ ID NO. 30), (3) `CRD3' construct, which starts 15 with N terminal CRD3 (i.e., CRD3 A1-Bl-module covers amino acids 108-146
(according to Compaan et al. Structure 2006; 14: 1321-1330) หรือ truncated CRD3
Al-module covers amino acids 108-126 (according to Latza et al. Eur J Immunol
1994; 24: 677-683)), and ประกอบรวมด้วยd amino acids 108-277 linked to signal peptide
amino acids 1-28 (see SEQ ID NO. 31), (4) `CRD4' construct, which consists of N-
20 terminal CRD4 หรือ CRD3 subdomain B1 module/truncated CRD4 Al-module (i.e.,
CRD4 Al-B1-module covers amino acids 127 167 (Latza et al. Eur J Immunol 1994;
24: 677-683) หรือ a combination (not shown in รูป 20) of CRD3 subdomain Bl-
module with truncated CRD4 Al-module covers amino acids 127-146 with amino
acids 147-167, ตามลำดับ (Compaan et al. Structure 2006; 14: 1321-1330)), and 25 ประกอบรวมด้วยd amino acids 127-277 linked to signal peptide amino acids 1-28 (see SEQ
ID NO. 32), and (5) 'truncated (tc) CRD4' construct, which consists of N-terminal
truncated CRD4 หรือ CRD4 subdomain B1-module (i.e., truncated CRD4 Al module
covers amino acids 147-167 (Compaan et al. Structure 2006; 14: 1321-1330) หรือ
CRD4 subdomain B 1-module (not shown in รูป 20; Latza et al. Eur J Immunol 30 1994; 24: 677-683) covers amino acids 147-167), and ประกอบรวมด้วยd amino acids 147-
277 linked to signal peptide amino acids 1-28 (see SEQ ID NO. 33). By assembly
PCR using AccuprimeTM Pfx DNA Polymerase (Invitrogen), these 5 ฮิวเมน CD134
constructs were generated using primers shown in the following table:
* Primer No. according to Bioceros internal coding system 15
Briefly, cDNA encoding amino acids 1-28 of signal peptide and cDNA
encoding amino acids 66-277 of ฮิวเมน CD134 were amplified using ตามลำดับ
primer pair 362/365 and 364/363 in a PCR reaction with full-length ฮิวเมน CD134
as a template. Subsequently, `CRD2' คอนสตรัคต์ was generated by using these two 20 PCR products in an assembly PCR using primer pair 362/363. The cDNA encoding
`CRD2' คอนสตรัคต์ was subcloned into a pcDNA3.1-derived expression plasmid using
suitable restriction sites. Similarly, `CRD3' คอนสตรัคต์ (amino acids 1-28 of signal
peptide linked to amino acids 108-277 of ฮิวเมน CD134), `CRD4' คอนสตรัคต์ (amino
acids 1-28 of signal peptide linked to amino acid 127 -277), and 'truncated CRD4' 25 คอนสตรัคต์ (amino acids 1-28 of signal peptide linked to amino acid 147-277) were
generated and subcloned in pcDNA3.1-derived expression plasmids using the
corresponding primers shown in abovementioned table. Furthermore, full-length
ฮิวเมน CD134 (SEQ ID NO. 1) was also re-cloned in a pcDNA3.1-derived
expression plasmid.
30 Using the FreeStyleTM 293 Expression System (Invitrogen), FreeStyleTM
293-F cells (Invitrogen) were transiently transfected with the 5 generated variants of ฮิวเมน CD134. After 48-72h, surface ฮิวเมน CD134 expression on transfected cells was analyzed by FACS analysis. To this end, transfected cells were harvested
and put at 1-2x106 cells/mL in ice chilled PBS/BSA/NaN3. Cells were incubated
with 20.0 lig/mL mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 โมโนโคลนอล antibodies clones 12H3 and
20E5 for 30 minutes at 4°C. In parallel, 20.0 Rg/mL mouse IgGlic ไอโซไทป์ control
antibody (BD Biosciences) was used as a เนกาทีฟ control. After extensive washing 5 in PBS/BSA/NaN3, cells were subsequently incubated with 1:200 diluted PE-
conjugated goat แอนติ-mouse IgG (Fcy specific) antibodies (Jackson
ImmunoResearch) for 30 minutes at 4°C. After extensive washing in
PBS/BSA/NaN3, cells were fixed in 2% formaldehyde in PBS/BSA/NaN3 for 30
minutes at 4°C. การยึดเกาะของ antibodies was measured using โฟลไซโตเมทรี
10 (FACSCalibur; BD Biosciences).
As shown in รูป 21, both mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibodies clones
12H3 and 20E5 recognized full-length (denoted as `CRD l' คอนสตรัคต์) ฮิวเมน CD134
on transfected 293-F cells, whereas both mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibodies
clones 12H3 and 20E5 showed no binding on mock-transfected 293-F cells.
15 Moreover, mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibodies clones 12H3 and 20E5 recognized
truncated ฮิวเมน CD134 variants that lacked CRD1 and CRD1-CRD2 (denoted as
`CRD2' คอนสตรัคต์ and `CRD3' คอนสตรัคต์, ตามลำดับ) on transfected 293-F cells. In
contrast, การยึดเกาะของ mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 12H3 against
truncated ฮิวเมน CD134 variant that lacked CRD1-CRD2-truncated CRD3 Al
20 module (denoted as `CRD4' คอนสตรัคต์) was very weak, and การยึดเกาะของ mouse แอนติ-
ฮิวเมน CD134 antibody clone 12H3 against truncated ฮิวเมน CD134 variant that
lacked CRD1-CRD2-truncated CRD3 Al-module-CRD4 subdomain Al-module
(according to definition of Latza et al. Eur J Immunol 1994; 24: 677-683) หรือ
alternatively CRD1-CRD2-CRD3 Al B1 module (according to definition of
25 Compaan et al. Structure 2006; 14: 1321-1330; denoted as `tcCRD4' คอนสตรัคต์) was
completely absent, whereas mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 20E5 showed
a strong binding against truncated ฮิวเมน CD134 variant that lacked CRD1-
CRD2-truncated CRD3 Al-module (denoted as `CRD4' คอนสตรัคต์) and against
truncated ฮิวเมน CD134 variant that lacked CRD1-CRD2-truncated CRD3 Al-
30 module-CRD4 subdomain Al-module (according to definition of Latza et al. Eur J
Immunol 1994; 24: 677 683) หรือ alternatively CRD1-CRD2-CRD3 Al-B1-module
(according to definition of Compaan et al. Structure 2006; 14: 1321-1330; denoted
as `tcCRD4' คอนสตรัคต์).
These results demonstrated that mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibodies
clones 12H3 and 20E5 specifically recognized ฮิวเมน CD134 (comparison of full-
length ฮิวเมน CD134 transfection vs mock transfection). Furthermore, these
results demonstrated that mouse anti ฮิวเมน CD134 antibodies clones 12H3 and 5 20E5 seemed to recognize dissimilar ฮิวเมน CD134 เอพิโทป, which คือ evidenced by
respective lack of binding (using clone 12H3) vs strong binding (using clone 20E5)
with truncated ฮิวเมน CD134 variant that lacked CRD1 CRD2-truncated CRD3
Al-module (denoted as `CRD4' คอนสตรัคต์) and with truncated ฮิวเมน CD134
variant that lacked CRD1-CRD2-truncated CRD3 A1-module-CRD4 subdomain Al-
10 module (according to definition of Latza et al. Eur J Immunol 1994; 24: 677 683) or
alternatively CRD1-CRD2-CRD3 Al-B1-module (according to definition of
Compaan et al. Structure 2006; 14: 1321-1330; denoted as `tcCRD4' คอนสตรัคต์).
These results demonstrated that mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 12H3
did not seem to recognize a ฮิวเมน CD134 เอพิโทป in CRD1 and CRD2, and mouse 15 แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 20E5 did not seem to recognize a ฮิวเมน CD134
เอพิโทป in CRD1, CRD2, and truncated CRD3 A1-module-CRD4 subdomain Al-
module (according to definition of Latza et al. Eur J Immunol 1994; 24: 677-683) หรือ
alternatively CRD1-CRD2-CRD3 Al B1 module (according to definition of
Compaan et al. Structure 2006; 14: 1321-1330).
0/5000
(ข) . การยึดเกาะของเมาส์แอนติฮิวเมน CD134 โมโนโคลนอลแอนตี้ clones 12H 3 และ20E5 กับฮิวเมนปราศจาก CD134 สร้างต่าง ๆ ตัดฮิวเมนโครงสร้าง CD134 แสดงบรรทัด 293 F เซลล์ (โดเมนแม็ป)เพื่อวิเคราะห์ specificity ดีของเมาส์แอนติ-ฮิวเมน CD134แอนตี้โมโนโคลนอล clones 12H 3 และ 20E5, เอพิโทป(s) สถานที่รู้จัก 25 โดยเมาส์แอนติฮิวเมน CD134 โมโนโคลนอลแอนตี้ clones 12 H 3 และ 20E5 ถูก กำหนด โดยโดเมนการแม็ป ความสามารถของเมาส์แอนติ-ฮิวเมน CD134 แอนตี้โมโนโคลนอล clones 12H 3 และ 20E5 ผูกกับฮิวเมนตัด CD134 กำหนดโครงสร้าง แสดงบนพื้นผิวของเซลล์ 297-F (มา HEK) โดยการวิเคราะห์ FACSยึดเอกสารประกอบการ 30 (Prot สวิส: P43489.1 Latza et al. Eur J Immunol 199424:677-683 วิทยาศาสตร์วิศวกรรม Biochem แนวโน้ม Bodmer et al. 2002 27:19-26 Compaan et alปี 2006 โครงสร้าง 14:1321-1330 สหรัฐอเมริกาสิทธิบัตรหมายเลข Publ. 2011/0028688 Al), ซิสเทอีน -โดเมนรวย (CRD) และโครงสร้าง hingelike ในแคว้นภายนอกเซลล์ฮิวเมนมีระบุ CD134 CRDs มีรหัส CRD1, CRD2, CRD3 (ตัด)(ตัด) CRD4 (ดูรูปที่ 20) CRDs ประกอบด้วย topologically ประเภทของmodules, called an A-module and a B-module (see also รูป 20). A modules are C- shaped structures, and B-modules are S-shaped structures. A typical CRD คือ 5 usually composed of A1-B2-modules หรือ A2-B1-modules (or, less frequently, a different pair of modules, like Al-B1) with 6 conserved ซิสเทอีน residues, โดยที่ the numeral denotes the number of disulphide bridges within each module (see also รูป 20). As shown in รูป 20, 5 different ฮิวเมน CD134 constructs were generated and expressed: (1) full-length ฮิวเมน CD134 construct, which starts with 10 N-terminal CRD1 (i.e., CRD1 Al-B2-module covers amino acids 29-65), andtherefore denoted as `CRD1', and ประกอบรวมด้วยd amino acids 1-277 (see SEQ ID NO. 1),(2) `CRD2' construct, which starts with N-terminal CRD2 (i.e., CRD2 Al B2-module covers amino acids 66-107), and ประกอบรวมด้วยd amino acids 66-277 linked to signal peptide amino acids 1-28 (see SEQ ID NO. 30), (3) `CRD3' construct, which starts 15 with N terminal CRD3 (i.e., CRD3 A1-Bl-module covers amino acids 108-146 (according to Compaan et al. Structure 2006; 14: 1321-1330) หรือ truncated CRD3 Al-module covers amino acids 108-126 (according to Latza et al. Eur J Immunol 1994; 24: 677-683)), and ประกอบรวมด้วยd amino acids 108-277 linked to signal peptide amino acids 1-28 (see SEQ ID NO. 31), (4) `CRD4' construct, which consists of N-
20 terminal CRD4 หรือ CRD3 subdomain B1 module/truncated CRD4 Al-module (i.e.,
CRD4 Al-B1-module covers amino acids 127 167 (Latza et al. Eur J Immunol 1994;
24: 677-683) หรือ a combination (not shown in รูป 20) of CRD3 subdomain Bl-
module with truncated CRD4 Al-module covers amino acids 127-146 with amino
acids 147-167, ตามลำดับ (Compaan et al. Structure 2006; 14: 1321-1330)), and 25 ประกอบรวมด้วยd amino acids 127-277 linked to signal peptide amino acids 1-28 (see SEQ
ID NO. 32), and (5) 'truncated (tc) CRD4' construct, which consists of N-terminal
truncated CRD4 หรือ CRD4 subdomain B1-module (i.e., truncated CRD4 Al module
covers amino acids 147-167 (Compaan et al. Structure 2006; 14: 1321-1330) หรือ
CRD4 subdomain B 1-module (not shown in รูป 20; Latza et al. Eur J Immunol 30 1994; 24: 677-683) covers amino acids 147-167), and ประกอบรวมด้วยd amino acids 147-
277 linked to signal peptide amino acids 1-28 (see SEQ ID NO. 33). By assembly
PCR using AccuprimeTM Pfx DNA Polymerase (Invitrogen), these 5 ฮิวเมน CD134
constructs were generated using primers shown in the following table:
* Primer No. according to Bioceros internal coding system 15
Briefly, cDNA encoding amino acids 1-28 of signal peptide and cDNA
encoding amino acids 66-277 of ฮิวเมน CD134 were amplified using ตามลำดับ
primer pair 362/365 and 364/363 in a PCR reaction with full-length ฮิวเมน CD134
as a template. Subsequently, `CRD2' คอนสตรัคต์ was generated by using these two 20 PCR products in an assembly PCR using primer pair 362/363. The cDNA encoding
`CRD2' คอนสตรัคต์ was subcloned into a pcDNA3.1-derived expression plasmid using
suitable restriction sites. Similarly, `CRD3' คอนสตรัคต์ (amino acids 1-28 of signal
peptide linked to amino acids 108-277 of ฮิวเมน CD134), `CRD4' คอนสตรัคต์ (amino
acids 1-28 of signal peptide linked to amino acid 127 -277), and 'truncated CRD4' 25 คอนสตรัคต์ (amino acids 1-28 of signal peptide linked to amino acid 147-277) were
generated and subcloned in pcDNA3.1-derived expression plasmids using the
corresponding primers shown in abovementioned table. Furthermore, full-length
ฮิวเมน CD134 (SEQ ID NO. 1) was also re-cloned in a pcDNA3.1-derived
expression plasmid.
30 Using the FreeStyleTM 293 Expression System (Invitrogen), FreeStyleTM
293-F cells (Invitrogen) were transiently transfected with the 5 generated variants of ฮิวเมน CD134. After 48-72h, surface ฮิวเมน CD134 expression on transfected cells was analyzed by FACS analysis. To this end, transfected cells were harvested
and put at 1-2x106 cells/mL in ice chilled PBS/BSA/NaN3. Cells were incubated
with 20.0 lig/mL mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 โมโนโคลนอล antibodies clones 12H3 and
20E5 for 30 minutes at 4°C. In parallel, 20.0 Rg/mL mouse IgGlic ไอโซไทป์ control
antibody (BD Biosciences) was used as a เนกาทีฟ control. After extensive washing 5 in PBS/BSA/NaN3, cells were subsequently incubated with 1:200 diluted PE-
conjugated goat แอนติ-mouse IgG (Fcy specific) antibodies (Jackson
ImmunoResearch) for 30 minutes at 4°C. After extensive washing in
PBS/BSA/NaN3, cells were fixed in 2% formaldehyde in PBS/BSA/NaN3 for 30
minutes at 4°C. การยึดเกาะของ antibodies was measured using โฟลไซโตเมทรี
10 (FACSCalibur; BD Biosciences).
As shown in รูป 21, both mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibodies clones
12H3 and 20E5 recognized full-length (denoted as `CRD l' คอนสตรัคต์) ฮิวเมน CD134
on transfected 293-F cells, whereas both mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibodies
clones 12H3 and 20E5 showed no binding on mock-transfected 293-F cells.
15 Moreover, mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibodies clones 12H3 and 20E5 recognized
truncated ฮิวเมน CD134 variants that lacked CRD1 and CRD1-CRD2 (denoted as
`CRD2' คอนสตรัคต์ and `CRD3' คอนสตรัคต์, ตามลำดับ) on transfected 293-F cells. In
contrast, การยึดเกาะของ mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 12H3 against
truncated ฮิวเมน CD134 variant that lacked CRD1-CRD2-truncated CRD3 Al
20 module (denoted as `CRD4' คอนสตรัคต์) was very weak, and การยึดเกาะของ mouse แอนติ-
ฮิวเมน CD134 antibody clone 12H3 against truncated ฮิวเมน CD134 variant that
lacked CRD1-CRD2-truncated CRD3 Al-module-CRD4 subdomain Al-module
(according to definition of Latza et al. Eur J Immunol 1994; 24: 677-683) หรือ
alternatively CRD1-CRD2-CRD3 Al B1 module (according to definition of
25 Compaan et al. Structure 2006; 14: 1321-1330; denoted as `tcCRD4' คอนสตรัคต์) was
completely absent, whereas mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 20E5 showed
a strong binding against truncated ฮิวเมน CD134 variant that lacked CRD1-
CRD2-truncated CRD3 Al-module (denoted as `CRD4' คอนสตรัคต์) and against
truncated ฮิวเมน CD134 variant that lacked CRD1-CRD2-truncated CRD3 Al-
30 module-CRD4 subdomain Al-module (according to definition of Latza et al. Eur J
Immunol 1994; 24: 677 683) หรือ alternatively CRD1-CRD2-CRD3 Al-B1-module
(according to definition of Compaan et al. Structure 2006; 14: 1321-1330; denoted
as `tcCRD4' คอนสตรัคต์).
These results demonstrated that mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibodies
clones 12H3 and 20E5 specifically recognized ฮิวเมน CD134 (comparison of full-
length ฮิวเมน CD134 transfection vs mock transfection). Furthermore, these
results demonstrated that mouse anti ฮิวเมน CD134 antibodies clones 12H3 and 5 20E5 seemed to recognize dissimilar ฮิวเมน CD134 เอพิโทป, which คือ evidenced by
respective lack of binding (using clone 12H3) vs strong binding (using clone 20E5)
with truncated ฮิวเมน CD134 variant that lacked CRD1 CRD2-truncated CRD3
Al-module (denoted as `CRD4' คอนสตรัคต์) and with truncated ฮิวเมน CD134
variant that lacked CRD1-CRD2-truncated CRD3 A1-module-CRD4 subdomain Al-
10 module (according to definition of Latza et al. Eur J Immunol 1994; 24: 677 683) or
alternatively CRD1-CRD2-CRD3 Al-B1-module (according to definition of
Compaan et al. Structure 2006; 14: 1321-1330; denoted as `tcCRD4' คอนสตรัคต์).
These results demonstrated that mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 12H3
did not seem to recognize a ฮิวเมน CD134 เอพิโทป in CRD1 and CRD2, and mouse 15 แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 20E5 did not seem to recognize a ฮิวเมน CD134
เอพิโทป in CRD1, CRD2, and truncated CRD3 A1-module-CRD4 subdomain Al-
module (according to definition of Latza et al. Eur J Immunol 1994; 24: 677-683) หรือ
alternatively CRD1-CRD2-CRD3 Al B1 module (according to definition of
Compaan et al. Structure 2006; 14: 1321-1330).
20 terminal CRD4 หรือ CRD3 subdomain B1 module/truncated CRD4 Al-module (i.e.,
CRD4 Al-B1-module covers amino acids 127 167 (Latza et al. Eur J Immunol 1994;
24: 677-683) หรือ a combination (not shown in รูป 20) of CRD3 subdomain Bl-
module with truncated CRD4 Al-module covers amino acids 127-146 with amino
acids 147-167, ตามลำดับ (Compaan et al. Structure 2006; 14: 1321-1330)), and 25 ประกอบรวมด้วยd amino acids 127-277 linked to signal peptide amino acids 1-28 (see SEQ
ID NO. 32), and (5) 'truncated (tc) CRD4' construct, which consists of N-terminal
truncated CRD4 หรือ CRD4 subdomain B1-module (i.e., truncated CRD4 Al module
covers amino acids 147-167 (Compaan et al. Structure 2006; 14: 1321-1330) หรือ
CRD4 subdomain B 1-module (not shown in รูป 20; Latza et al. Eur J Immunol 30 1994; 24: 677-683) covers amino acids 147-167), and ประกอบรวมด้วยd amino acids 147-
277 linked to signal peptide amino acids 1-28 (see SEQ ID NO. 33). By assembly
PCR using AccuprimeTM Pfx DNA Polymerase (Invitrogen), these 5 ฮิวเมน CD134
constructs were generated using primers shown in the following table:
* Primer No. according to Bioceros internal coding system 15
Briefly, cDNA encoding amino acids 1-28 of signal peptide and cDNA
encoding amino acids 66-277 of ฮิวเมน CD134 were amplified using ตามลำดับ
primer pair 362/365 and 364/363 in a PCR reaction with full-length ฮิวเมน CD134
as a template. Subsequently, `CRD2' คอนสตรัคต์ was generated by using these two 20 PCR products in an assembly PCR using primer pair 362/363. The cDNA encoding
`CRD2' คอนสตรัคต์ was subcloned into a pcDNA3.1-derived expression plasmid using
suitable restriction sites. Similarly, `CRD3' คอนสตรัคต์ (amino acids 1-28 of signal
peptide linked to amino acids 108-277 of ฮิวเมน CD134), `CRD4' คอนสตรัคต์ (amino
acids 1-28 of signal peptide linked to amino acid 127 -277), and 'truncated CRD4' 25 คอนสตรัคต์ (amino acids 1-28 of signal peptide linked to amino acid 147-277) were
generated and subcloned in pcDNA3.1-derived expression plasmids using the
corresponding primers shown in abovementioned table. Furthermore, full-length
ฮิวเมน CD134 (SEQ ID NO. 1) was also re-cloned in a pcDNA3.1-derived
expression plasmid.
30 Using the FreeStyleTM 293 Expression System (Invitrogen), FreeStyleTM
293-F cells (Invitrogen) were transiently transfected with the 5 generated variants of ฮิวเมน CD134. After 48-72h, surface ฮิวเมน CD134 expression on transfected cells was analyzed by FACS analysis. To this end, transfected cells were harvested
and put at 1-2x106 cells/mL in ice chilled PBS/BSA/NaN3. Cells were incubated
with 20.0 lig/mL mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 โมโนโคลนอล antibodies clones 12H3 and
20E5 for 30 minutes at 4°C. In parallel, 20.0 Rg/mL mouse IgGlic ไอโซไทป์ control
antibody (BD Biosciences) was used as a เนกาทีฟ control. After extensive washing 5 in PBS/BSA/NaN3, cells were subsequently incubated with 1:200 diluted PE-
conjugated goat แอนติ-mouse IgG (Fcy specific) antibodies (Jackson
ImmunoResearch) for 30 minutes at 4°C. After extensive washing in
PBS/BSA/NaN3, cells were fixed in 2% formaldehyde in PBS/BSA/NaN3 for 30
minutes at 4°C. การยึดเกาะของ antibodies was measured using โฟลไซโตเมทรี
10 (FACSCalibur; BD Biosciences).
As shown in รูป 21, both mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibodies clones
12H3 and 20E5 recognized full-length (denoted as `CRD l' คอนสตรัคต์) ฮิวเมน CD134
on transfected 293-F cells, whereas both mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibodies
clones 12H3 and 20E5 showed no binding on mock-transfected 293-F cells.
15 Moreover, mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibodies clones 12H3 and 20E5 recognized
truncated ฮิวเมน CD134 variants that lacked CRD1 and CRD1-CRD2 (denoted as
`CRD2' คอนสตรัคต์ and `CRD3' คอนสตรัคต์, ตามลำดับ) on transfected 293-F cells. In
contrast, การยึดเกาะของ mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 12H3 against
truncated ฮิวเมน CD134 variant that lacked CRD1-CRD2-truncated CRD3 Al
20 module (denoted as `CRD4' คอนสตรัคต์) was very weak, and การยึดเกาะของ mouse แอนติ-
ฮิวเมน CD134 antibody clone 12H3 against truncated ฮิวเมน CD134 variant that
lacked CRD1-CRD2-truncated CRD3 Al-module-CRD4 subdomain Al-module
(according to definition of Latza et al. Eur J Immunol 1994; 24: 677-683) หรือ
alternatively CRD1-CRD2-CRD3 Al B1 module (according to definition of
25 Compaan et al. Structure 2006; 14: 1321-1330; denoted as `tcCRD4' คอนสตรัคต์) was
completely absent, whereas mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 20E5 showed
a strong binding against truncated ฮิวเมน CD134 variant that lacked CRD1-
CRD2-truncated CRD3 Al-module (denoted as `CRD4' คอนสตรัคต์) and against
truncated ฮิวเมน CD134 variant that lacked CRD1-CRD2-truncated CRD3 Al-
30 module-CRD4 subdomain Al-module (according to definition of Latza et al. Eur J
Immunol 1994; 24: 677 683) หรือ alternatively CRD1-CRD2-CRD3 Al-B1-module
(according to definition of Compaan et al. Structure 2006; 14: 1321-1330; denoted
as `tcCRD4' คอนสตรัคต์).
These results demonstrated that mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibodies
clones 12H3 and 20E5 specifically recognized ฮิวเมน CD134 (comparison of full-
length ฮิวเมน CD134 transfection vs mock transfection). Furthermore, these
results demonstrated that mouse anti ฮิวเมน CD134 antibodies clones 12H3 and 5 20E5 seemed to recognize dissimilar ฮิวเมน CD134 เอพิโทป, which คือ evidenced by
respective lack of binding (using clone 12H3) vs strong binding (using clone 20E5)
with truncated ฮิวเมน CD134 variant that lacked CRD1 CRD2-truncated CRD3
Al-module (denoted as `CRD4' คอนสตรัคต์) and with truncated ฮิวเมน CD134
variant that lacked CRD1-CRD2-truncated CRD3 A1-module-CRD4 subdomain Al-
10 module (according to definition of Latza et al. Eur J Immunol 1994; 24: 677 683) or
alternatively CRD1-CRD2-CRD3 Al-B1-module (according to definition of
Compaan et al. Structure 2006; 14: 1321-1330; denoted as `tcCRD4' คอนสตรัคต์).
These results demonstrated that mouse แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 12H3
did not seem to recognize a ฮิวเมน CD134 เอพิโทป in CRD1 and CRD2, and mouse 15 แอนติ-ฮิวเมน CD134 antibody clone 20E5 did not seem to recognize a ฮิวเมน CD134
เอพิโทป in CRD1, CRD2, and truncated CRD3 A1-module-CRD4 subdomain Al-
module (according to definition of Latza et al. Eur J Immunol 1994; 24: 677-683) หรือ
alternatively CRD1-CRD2-CRD3 Al B1 module (according to definition of
Compaan et al. Structure 2006; 14: 1321-1330).
การแปล กรุณารอสักครู่..
(ข) การยึดเกาะของเมาส์แอนติ - ฮิวเมน CD134 โมโนโคลนอลโคลนแอนติบอดี 12H3 และ
20E5 ที่มีความยาวเต็มรูปแบบฮิวเมน CD134 สร้างต่าง ๆ ที่ถูกตัดทอนฮิวเมน
CD134 โครงสร้างแสดงบน 293-F สายพันธุ์ของเซลล์ (การทำแผนที่โดเมน)
เพื่อที่จะวิเคราะห์ความจำเพาะที่ดีของเมาส์แอนติ - ฮิวเมน CD134
โมโนโคลนอลโคลนแอนติบอดี 12H3 และ 20E5, สถานที่ตั้งของเอพิโทป (s) ได้รับการยอมรับ 25 โดยใช้เมาส์แอนติ - ฮิวเมน CD134 โมโน โคลนอลแอนติบอดีโคลน 12H3 และ 20E5
ถูกกำหนดโดยการทำแผนที่โดเมน ความสามารถของเมาส์แอนติ - ฮิวเมน CD134
โมโนโคลนอลโคลนแอนติบอดี 12H3 และ 20E5 ผูกกับตัดทอนฮิวเมน CD134
สร้างแสดงบนพื้นผิวของ (HEK มา) เซลล์ 297-F
ที่ถูกกำหนดโดยมาซึ่ง. การวิเคราะห์
30 จากวรรณกรรม (สวิส Prot: P43489.1; Latza et al, Eur J Immunol 1994.
24: 677-683; Bodmer et al, แนวโน้ม Biochem วิทย์ 2002; 27:.. 19-26; Compaan et al,
โครงสร้าง 2006; 14:. 1321-1330; สิทธิบัตรสหรัฐอเมริกาเลขที่ Publ 2011/0028688 อัล), ซิสเทอีน -
โดเมนที่อุดมไปด้วย (CRD) และโครงสร้าง hingelike ในภูมิภาคภายนอกเซลล์ของฮิวเมนCD134 ถูกระบุ CRDs จะเขียน CRD1, CRD2 (ตัด) CRD3, (ตัด) CRD4 (ดูรูปที่ 20) CRDs มีประเภทที่แตกต่างทอพอโลยีของโมดูลที่เรียกว่าA-โมดูลและ B-โมดูล (ดูรูปที่ 20) โมดูล C- มีโครงสร้างที่มีรูปร่างและB โมดูลจะมีโครงสร้างเป็นรูปตัว S ทั่วไป CRD คือ5 มักจะประกอบด้วย A1-B2 โมดูลหรือ A2-B1 โมดูล (หรือน้อยเป็นคู่ที่แตกต่างกันของโมดูลเช่นAl-B1) มี 6 อนุรักษ์ซิสเทอีนตกค้างโดยที่เลขหมายถึงจำนวนสะพาน disulphide ในแต่ละโมดูล (ดูรูปที่20) ดังแสดงในรูปที่ 20 แตกต่างกัน 5 ฮิวเมนโครงสร้าง CD134 ถูกสร้างขึ้นและแสดง(1) ยาวเต็มรูปแบบฮิวเมน CD134 สร้างซึ่งเริ่มต้นด้วย 10 CRD1 n- ขั้ว (เช่น CRD1 Al-B2 โมดูลครอบคลุมกรดอะมิโน 29-65) และแสดงจึงเป็น`CRD1 'และประกอบรวมด้วยกรดอะมิโนง 1-277 (ดูรหัส SEQ NO. 1), (2)` CRD2' สร้างซึ่งเริ่มต้นด้วย CRD2 n- ขั้ว (เช่น CRD2 อัลบี 2 โมดูลครอบคลุมกรดอะมิโน66-107) และประกอบรวมด้วยกรดอะมิโนง 66-277 สัญญาณที่เชื่อมโยงกับกรดอะมิโนเปปไทด์1-28 (ดูรหัส SEQ NO. 30), (3) `CRD3 'สร้างซึ่ง เริ่มต้นด้วย 15 ไม่มีขั้ว CRD3 (เช่น CRD3 A1-Bl โมดูลครอบคลุมกรดอะมิโน 108-146 (ตาม Compaan et al, โครงสร้าง 2006; 14:. 1321-1330) หรือตัดทอน CRD3 อัลโมดูลครอบคลุมกรดอะมิโน 108-126 ( ตาม Latza et al, Eur J Immunol. 1994; 24: 677-683)) และประกอบรวมด้วยกรดอะมิโนง 108-277 ที่เชื่อมโยงกับสัญญาณเปปไทด์. กรดอะมิโนที่ 1-28 (ดูรหัส SEQ NO 31), (4) `CRD4 'สร้างซึ่งประกอบด้วย N-20 ขั้ว CRD4 หรือ CRD3 ย่อยโมดูล B1 / ตัด CRD4 อัลโมดูล (เช่นCRD4 Al-B1 โมดูลครอบคลุมกรดอะมิโน 127 167 (Latza et al, Eur J Immunol 1994; 24: 677-683) หรือการรวมกัน (ไม่ได้แสดงในรูปที่ 20) ของ CRD3 ย่อย Bl- โมดูลที่ถูกตัดทอน CRD4 อัลโมดูลครอบคลุมกรดอะมิโนที่มี 127-146 อะมิโนกรด147-167, ตามลำดับ (Compaan . et al, โครงสร้าง 2006; 14: 1321-1330)) และ 25 ประกอบรวมด้วยกรดอะมิโนง 127-277 ที่เชื่อมโยงกับสัญญาณอะมิโนเปปไทด์กรด 1-28 (ดู SEQ ID NO 32) และ (5) 'ที่ถูกตัดทอน (. TC) CRD4 'สร้างซึ่งประกอบด้วย n- ขั้วที่ถูกตัดทอนหรือCRD4 CRD4 ย่อย B1 โมดูล (เช่นตัดโมดูลอัล CRD4 ครอบคลุมกรดอะมิโน 147-167 (Compaan et al, โครงสร้าง 2006; 14:. 1321-1330) หรือโดเมนย่อยCRD4 บี 1 โมดูล (ไม่ปรากฏในรูป 20; Latza et al, Eur J Immunol 30 1994; 24:. 677-683) ครอบคลุมกรดอะมิโน 147-167) และประกอบรวมด้วยกรดอะมิโนง 147- 277 ที่เชื่อมโยงกับอะมิโนเปปไทด์ส่งสัญญาณ กรด 1-28 (ดูรหัส SEQ NO. 33) โดยการชุมนุมPCR โดยใช้ดีเอ็นเอ AccuprimeTM PFX โพลิเมอร์ (Invitrogen) 5 เหล่านี้ฮิวเมน CD134 โครงสร้างที่ถูกสร้างขึ้นโดยใช้ไพรเมอร์ที่แสดงในตารางต่อไปนี้: * จำนวนรองพื้นตามระบบการเข้ารหัสภายใน 15 Bioceros สั้น ๆ , การเข้ารหัส cDNA กรดอะมิโนที่ 1-28 ของ เปปไทด์ของสัญญาณและยีนเข้ารหัสกรดอะมิโน66-277 ของฮิวเมน CD134 ถูกขยายตามลำดับโดยใช้คู่ไพรเมอร์362/365 และ 364/363 ในปฏิกิริยา PCR ที่มีความยาวเต็มฮิวเมน CD134 เป็นแม่แบบ ต่อจากนั้น `CRD2 'คอนสตรัคต์ที่ถูกสร้างขึ้นโดยใช้ทั้งสอง 20 ผลิตภัณฑ์ PCR ในการชุมนุม PCR โดยใช้คู่ไพรเมอร์ 362/363 ยีนเข้ารหัส`CRD2 'คอนสตรัคต์ได้ subcloned เป็นพลาสมิดแสดงออก pcDNA3.1 ที่ได้มาจากการใช้เว็บไซต์ข้อจำกัด ที่เหมาะสม ในทำนองเดียวกัน `CRD3 'คอนสตรัคต์ (กรดอะมิโนที่ 1-28 ของสัญญาณเปปไทด์ที่เชื่อมโยงกับกรดอะมิโน108-277 ของฮิวเมน CD134)` CRD4' คอนสตรัคต์ (อะมิโนกรด1-28 ของสัญญาณเปปไทด์ เชื่อมโยงกับกรดอะมิโน 127 -277) และ 'ตัด CRD4 25 คอนสตรัคต์ (กรดอะมิโนที่ 1-28 ของสัญญาณเปปไทด์ที่เชื่อมโยงกับกรดอะมิโน 147-277) ถูกสร้างขึ้นและsubcloned ในการแสดงออก pcDNA3.1 พลาสมิดที่ได้มาจากการใช้ไพรเมอร์ที่สอดคล้องกันที่แสดงในตารางข้างต้น นอกจากนี้ยาวเต็มรูปแบบฮิวเมน CD134 (ID SEQ NO. 1) ยังเป็นโคลนอีกครั้งใน pcDNA3.1 ที่ได้มาจากพลาสมิดแสดงออก. 30 การใช้ FreeStyleTM 293 ระบบการแสดงออก (Invitrogen) FreeStyleTM เซลล์ 293-F (Invitrogen) ถูก transfected transiently กับสายพันธุ์ที่ 5 สร้างของฮิวเมน CD134 หลังจาก 48-72h พื้นผิวฮิวเมนแสดงออก CD134 เซลล์ transfected ได้รับการวิเคราะห์โดยการวิเคราะห์มาซึ่ง ด้วยเหตุนี้เซลล์ transfected เก็บเกี่ยวและใส่ที่1-2x106 เซลล์ / มิลลิลิตรในน้ำแข็งแช่เย็นพีบีเอส / บีเอสเอ / NaN3 เซลล์ที่ถูกบ่มกับ 20.0 lig / mL เมาส์แอนติ - ฮิวเมน CD134 โมโนโคลนอลแอนติบอดีโคลน 12H3 และ 20E5 30 นาทีที่ 4 ° C ในแบบคู่ขนาน 20.0 Rg / mL เมาส์ IgGlic ไอโซไทป์ควบคุมแอนติบอดี(BD ชีววิทยาศาสตร์) ถูกนำมาใช้เป็นตัวควบคุมเนกาทีฟ หลังจากที่กว้างขวางซักผ้าที่ 5 ในพีบีเอส / บีเอสเอ / NaN3 เซลล์ถูกบ่มต่อมา 1: 200 ปรับลด PE- แพะผันแอนติ -mouse IgG (FCY เฉพาะ) แอนติบอดี (แจ็คสันImmunoResearch) เป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส หลังจากที่กว้างขวางในการซักผ้าพีบีเอส / บีเอสเอ / NaN3 เซลล์ได้รับการแก้ไขในไฮด์ 2% ในพีบีเอส / บีเอสเอ / NaN3 30 นาทีที่ 4 ° C การยึดเกาะของแอนติบอดีที่ได้รับการวัดโดยใช้โฟลไซโตเมทรี10 (FACSCalibur; BD ชีววิทยาศาสตร์). ดังแสดงในรูปที่ 21 ทั้งเมาส์แอนติ - ฮิวเมน CD134 โคลนแอนติบอดี12H3 และ 20E5 ได้รับการยอมรับยาวเต็มรูปแบบ (แสดงเป็น `CRD ลิตร 'คอนสตรัคต์) ฮิวเมน CD134 ใน transfected เซลล์ 293-F ในขณะที่ทั้งสองเมาส์แอนติ - ฮิวเมน CD134 แอนติบอดี. โคลน 12H3 และ 20E5 พบว่าไม่มีผลผูกพันกับจำลอง transfected เซลล์ 293-F 15 นอกจากนี้เมาส์แอนติ - ฮิวเมน CD134 โคลนแอนติบอดี 12H3 และ 20E5 ได้รับการยอมรับที่ถูกตัดทอนฮิวเมนพันธุ์CD134 ที่ขาด CRD1 และ CRD1-CRD2 (แสดงเป็น`CRD2 'คอนสตรัคต์และ` CRD3' คอนสตรัคต์ , ตามลำดับ) ในเซลล์ transfected 293-F ในทางตรงกันข้ามการยึดเกาะของเมาส์แอนติ - ฮิวเมนแอนติบอดีโคลน CD134 12H3 กับตัวแปรที่ถูกตัดทอนฮิวเมนCD134 ที่ขาด CRD1-CRD2-ตัด CRD3 อัล20 โมดูล (แสดงเป็น `CRD4 'คอนสตรัคต์) เป็น อ่อนแอมากและการยึดเกาะของเมาส์แอนติ - ฮิวเมนแอนติบอดีโคลน CD134 12H3 กับตัวแปรที่ถูกตัดทอนฮิวเมน CD134 ที่ขาดCRD1-CRD2-ตัด CRD3 อัลโมดูล CRD4 ย่อยอัลโมดูล(ตามคำนิยามของ Latza . et al, Eur J Immunol 1994; 24: 677-683) หรืออีกทางเลือกหนึ่งCRD1-CRD2-CRD3 อัลโมดูล B1 (ตามคำนิยามของ25 Compaan et al, โครงสร้าง 2006; 14:. 1321-1330; แสดงเป็น `tcCRD4 'คอนสต รัคต์) เป็นขาดอย่างสมบูรณ์ขณะที่เมาส์แอนติ- ฮิวเมนแอนติบอดีโคลน CD134 20E5 แสดงให้เห็นว่ามีความแข็งแกร่งที่มีผลผูกพันกับตัดทอนฮิวเมนCD134 ตัวแปรที่ขาด CRD1- CRD2-ตัด CRD3 อัลโมดูล (แสดงเป็น `CRD4 'คอน สตรัคต์) และต่อต้านตัดฮิวเมนCD134 ตัวแปรที่ขาด CRD1-CRD2-ตัด CRD3 Al- 30 โมดูลย่อย CRD4 อัลโมดูล (ตามคำนิยามของ Latza et al, Eur J. Immunol 1994; 24: 677 683) หรืออีกทางเลือกหนึ่ง CRD1-CRD2-CRD3 Al-B1 โมดูล(ตามคำนิยามของ Compaan et al, โครงสร้าง 2006 14: 1321-1330; เขียนแทน. เป็น `tcCRD4 'คอนสตรัคต์) ผลการศึกษานี้แสดงให้เห็นว่าเมาส์แอนติ - ฮิวเมน CD134 แอนติบอดีโคลน12H3 และได้รับการยอมรับโดยเฉพาะ 20E5 ฮิวเมน CD134 (เปรียบเทียบเต็มความยาวของฮิวเมนtransfection CD134 เทียบ transfection จำลอง ) นอกจากนี้เหล่านี้ผลการแสดงให้เห็นว่าเมาส์ต่อต้านฮิวเมน CD134 โคลนแอนติบอดี 12H3 และ 5 20E5 ดูเหมือนจะรับรู้ที่แตกต่างกันฮิวเมน CD134 เอพิโทปซึ่งคือหลักฐานโดยขาดตามลำดับของผลผูกพัน(โดยใช้การโคลนนิ่ง 12H3) เทียบกับที่แข็งแกร่งมีผลผูกพัน (โดยใช้การโคลนนิ่ง 20E5) กับตัดทอนฮิวเมน CD134 ตัวแปรที่ขาด CRD1 CRD2-ตัด CRD3 อัลโมดูล (แสดงเป็น `CRD4 'คอนสตรัคต์) และมีการตัดทอนฮิวเมน CD134 ตัวแปรที่ขาด CRD1-CRD2-ตัด CRD3 A1 โมดูล -CRD4 ย่อย Al- 10 โมดูล (ตามคำนิยามของ Latza et al, Eur J Immunol 1994; 24:. 677 683) หรืออีกทางเลือกหนึ่งCRD1-CRD2-CRD3 Al-B1 โมดูล (ตามคำนิยามของCompaan et al, โครงสร้าง 2006. 14: 1321-1330; แสดงเป็น `tcCRD4 'คอนสตรัคต์). ผลการศึกษานี้แสดงให้เห็นว่าเมาส์แอนติ - ฮิวเมนแอนติบอดีโคลน CD134 12H3 ไม่ได้ดูเหมือนจะรู้จักฮิวเมน CD134 เอพิโทปใน CRD1 และ CRD2 และเมาส์ 15 แอนติ - ฮิวเมนแอนติบอดีโคลน CD134 20E5 ไม่ได้ดูเหมือนจะรู้จักฮิวเมน CD134 เอพิโทปใน CRD1, CRD2 และตัดทอน CRD3 A1-โมดูลย่อย CRD4 Al- โมดูล (ตาม ความหมายของ Latza et al, Eur J Immunol 1994; 24: 677-683) หรืออีกทางเลือกหนึ่งCRD1-CRD2-CRD3 อัลโมดูล B1 (ตามคำนิยามของCompaan et al, โครงสร้าง 2006; 14:. 1321-1330)
20E5 ที่มีความยาวเต็มรูปแบบฮิวเมน CD134 สร้างต่าง ๆ ที่ถูกตัดทอนฮิวเมน
CD134 โครงสร้างแสดงบน 293-F สายพันธุ์ของเซลล์ (การทำแผนที่โดเมน)
เพื่อที่จะวิเคราะห์ความจำเพาะที่ดีของเมาส์แอนติ - ฮิวเมน CD134
โมโนโคลนอลโคลนแอนติบอดี 12H3 และ 20E5, สถานที่ตั้งของเอพิโทป (s) ได้รับการยอมรับ 25 โดยใช้เมาส์แอนติ - ฮิวเมน CD134 โมโน โคลนอลแอนติบอดีโคลน 12H3 และ 20E5
ถูกกำหนดโดยการทำแผนที่โดเมน ความสามารถของเมาส์แอนติ - ฮิวเมน CD134
โมโนโคลนอลโคลนแอนติบอดี 12H3 และ 20E5 ผูกกับตัดทอนฮิวเมน CD134
สร้างแสดงบนพื้นผิวของ (HEK มา) เซลล์ 297-F
ที่ถูกกำหนดโดยมาซึ่ง. การวิเคราะห์
30 จากวรรณกรรม (สวิส Prot: P43489.1; Latza et al, Eur J Immunol 1994.
24: 677-683; Bodmer et al, แนวโน้ม Biochem วิทย์ 2002; 27:.. 19-26; Compaan et al,
โครงสร้าง 2006; 14:. 1321-1330; สิทธิบัตรสหรัฐอเมริกาเลขที่ Publ 2011/0028688 อัล), ซิสเทอีน -
โดเมนที่อุดมไปด้วย (CRD) และโครงสร้าง hingelike ในภูมิภาคภายนอกเซลล์ของฮิวเมนCD134 ถูกระบุ CRDs จะเขียน CRD1, CRD2 (ตัด) CRD3, (ตัด) CRD4 (ดูรูปที่ 20) CRDs มีประเภทที่แตกต่างทอพอโลยีของโมดูลที่เรียกว่าA-โมดูลและ B-โมดูล (ดูรูปที่ 20) โมดูล C- มีโครงสร้างที่มีรูปร่างและB โมดูลจะมีโครงสร้างเป็นรูปตัว S ทั่วไป CRD คือ5 มักจะประกอบด้วย A1-B2 โมดูลหรือ A2-B1 โมดูล (หรือน้อยเป็นคู่ที่แตกต่างกันของโมดูลเช่นAl-B1) มี 6 อนุรักษ์ซิสเทอีนตกค้างโดยที่เลขหมายถึงจำนวนสะพาน disulphide ในแต่ละโมดูล (ดูรูปที่20) ดังแสดงในรูปที่ 20 แตกต่างกัน 5 ฮิวเมนโครงสร้าง CD134 ถูกสร้างขึ้นและแสดง(1) ยาวเต็มรูปแบบฮิวเมน CD134 สร้างซึ่งเริ่มต้นด้วย 10 CRD1 n- ขั้ว (เช่น CRD1 Al-B2 โมดูลครอบคลุมกรดอะมิโน 29-65) และแสดงจึงเป็น`CRD1 'และประกอบรวมด้วยกรดอะมิโนง 1-277 (ดูรหัส SEQ NO. 1), (2)` CRD2' สร้างซึ่งเริ่มต้นด้วย CRD2 n- ขั้ว (เช่น CRD2 อัลบี 2 โมดูลครอบคลุมกรดอะมิโน66-107) และประกอบรวมด้วยกรดอะมิโนง 66-277 สัญญาณที่เชื่อมโยงกับกรดอะมิโนเปปไทด์1-28 (ดูรหัส SEQ NO. 30), (3) `CRD3 'สร้างซึ่ง เริ่มต้นด้วย 15 ไม่มีขั้ว CRD3 (เช่น CRD3 A1-Bl โมดูลครอบคลุมกรดอะมิโน 108-146 (ตาม Compaan et al, โครงสร้าง 2006; 14:. 1321-1330) หรือตัดทอน CRD3 อัลโมดูลครอบคลุมกรดอะมิโน 108-126 ( ตาม Latza et al, Eur J Immunol. 1994; 24: 677-683)) และประกอบรวมด้วยกรดอะมิโนง 108-277 ที่เชื่อมโยงกับสัญญาณเปปไทด์. กรดอะมิโนที่ 1-28 (ดูรหัส SEQ NO 31), (4) `CRD4 'สร้างซึ่งประกอบด้วย N-20 ขั้ว CRD4 หรือ CRD3 ย่อยโมดูล B1 / ตัด CRD4 อัลโมดูล (เช่นCRD4 Al-B1 โมดูลครอบคลุมกรดอะมิโน 127 167 (Latza et al, Eur J Immunol 1994; 24: 677-683) หรือการรวมกัน (ไม่ได้แสดงในรูปที่ 20) ของ CRD3 ย่อย Bl- โมดูลที่ถูกตัดทอน CRD4 อัลโมดูลครอบคลุมกรดอะมิโนที่มี 127-146 อะมิโนกรด147-167, ตามลำดับ (Compaan . et al, โครงสร้าง 2006; 14: 1321-1330)) และ 25 ประกอบรวมด้วยกรดอะมิโนง 127-277 ที่เชื่อมโยงกับสัญญาณอะมิโนเปปไทด์กรด 1-28 (ดู SEQ ID NO 32) และ (5) 'ที่ถูกตัดทอน (. TC) CRD4 'สร้างซึ่งประกอบด้วย n- ขั้วที่ถูกตัดทอนหรือCRD4 CRD4 ย่อย B1 โมดูล (เช่นตัดโมดูลอัล CRD4 ครอบคลุมกรดอะมิโน 147-167 (Compaan et al, โครงสร้าง 2006; 14:. 1321-1330) หรือโดเมนย่อยCRD4 บี 1 โมดูล (ไม่ปรากฏในรูป 20; Latza et al, Eur J Immunol 30 1994; 24:. 677-683) ครอบคลุมกรดอะมิโน 147-167) และประกอบรวมด้วยกรดอะมิโนง 147- 277 ที่เชื่อมโยงกับอะมิโนเปปไทด์ส่งสัญญาณ กรด 1-28 (ดูรหัส SEQ NO. 33) โดยการชุมนุมPCR โดยใช้ดีเอ็นเอ AccuprimeTM PFX โพลิเมอร์ (Invitrogen) 5 เหล่านี้ฮิวเมน CD134 โครงสร้างที่ถูกสร้างขึ้นโดยใช้ไพรเมอร์ที่แสดงในตารางต่อไปนี้: * จำนวนรองพื้นตามระบบการเข้ารหัสภายใน 15 Bioceros สั้น ๆ , การเข้ารหัส cDNA กรดอะมิโนที่ 1-28 ของ เปปไทด์ของสัญญาณและยีนเข้ารหัสกรดอะมิโน66-277 ของฮิวเมน CD134 ถูกขยายตามลำดับโดยใช้คู่ไพรเมอร์362/365 และ 364/363 ในปฏิกิริยา PCR ที่มีความยาวเต็มฮิวเมน CD134 เป็นแม่แบบ ต่อจากนั้น `CRD2 'คอนสตรัคต์ที่ถูกสร้างขึ้นโดยใช้ทั้งสอง 20 ผลิตภัณฑ์ PCR ในการชุมนุม PCR โดยใช้คู่ไพรเมอร์ 362/363 ยีนเข้ารหัส`CRD2 'คอนสตรัคต์ได้ subcloned เป็นพลาสมิดแสดงออก pcDNA3.1 ที่ได้มาจากการใช้เว็บไซต์ข้อจำกัด ที่เหมาะสม ในทำนองเดียวกัน `CRD3 'คอนสตรัคต์ (กรดอะมิโนที่ 1-28 ของสัญญาณเปปไทด์ที่เชื่อมโยงกับกรดอะมิโน108-277 ของฮิวเมน CD134)` CRD4' คอนสตรัคต์ (อะมิโนกรด1-28 ของสัญญาณเปปไทด์ เชื่อมโยงกับกรดอะมิโน 127 -277) และ 'ตัด CRD4 25 คอนสตรัคต์ (กรดอะมิโนที่ 1-28 ของสัญญาณเปปไทด์ที่เชื่อมโยงกับกรดอะมิโน 147-277) ถูกสร้างขึ้นและsubcloned ในการแสดงออก pcDNA3.1 พลาสมิดที่ได้มาจากการใช้ไพรเมอร์ที่สอดคล้องกันที่แสดงในตารางข้างต้น นอกจากนี้ยาวเต็มรูปแบบฮิวเมน CD134 (ID SEQ NO. 1) ยังเป็นโคลนอีกครั้งใน pcDNA3.1 ที่ได้มาจากพลาสมิดแสดงออก. 30 การใช้ FreeStyleTM 293 ระบบการแสดงออก (Invitrogen) FreeStyleTM เซลล์ 293-F (Invitrogen) ถูก transfected transiently กับสายพันธุ์ที่ 5 สร้างของฮิวเมน CD134 หลังจาก 48-72h พื้นผิวฮิวเมนแสดงออก CD134 เซลล์ transfected ได้รับการวิเคราะห์โดยการวิเคราะห์มาซึ่ง ด้วยเหตุนี้เซลล์ transfected เก็บเกี่ยวและใส่ที่1-2x106 เซลล์ / มิลลิลิตรในน้ำแข็งแช่เย็นพีบีเอส / บีเอสเอ / NaN3 เซลล์ที่ถูกบ่มกับ 20.0 lig / mL เมาส์แอนติ - ฮิวเมน CD134 โมโนโคลนอลแอนติบอดีโคลน 12H3 และ 20E5 30 นาทีที่ 4 ° C ในแบบคู่ขนาน 20.0 Rg / mL เมาส์ IgGlic ไอโซไทป์ควบคุมแอนติบอดี(BD ชีววิทยาศาสตร์) ถูกนำมาใช้เป็นตัวควบคุมเนกาทีฟ หลังจากที่กว้างขวางซักผ้าที่ 5 ในพีบีเอส / บีเอสเอ / NaN3 เซลล์ถูกบ่มต่อมา 1: 200 ปรับลด PE- แพะผันแอนติ -mouse IgG (FCY เฉพาะ) แอนติบอดี (แจ็คสันImmunoResearch) เป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส หลังจากที่กว้างขวางในการซักผ้าพีบีเอส / บีเอสเอ / NaN3 เซลล์ได้รับการแก้ไขในไฮด์ 2% ในพีบีเอส / บีเอสเอ / NaN3 30 นาทีที่ 4 ° C การยึดเกาะของแอนติบอดีที่ได้รับการวัดโดยใช้โฟลไซโตเมทรี10 (FACSCalibur; BD ชีววิทยาศาสตร์). ดังแสดงในรูปที่ 21 ทั้งเมาส์แอนติ - ฮิวเมน CD134 โคลนแอนติบอดี12H3 และ 20E5 ได้รับการยอมรับยาวเต็มรูปแบบ (แสดงเป็น `CRD ลิตร 'คอนสตรัคต์) ฮิวเมน CD134 ใน transfected เซลล์ 293-F ในขณะที่ทั้งสองเมาส์แอนติ - ฮิวเมน CD134 แอนติบอดี. โคลน 12H3 และ 20E5 พบว่าไม่มีผลผูกพันกับจำลอง transfected เซลล์ 293-F 15 นอกจากนี้เมาส์แอนติ - ฮิวเมน CD134 โคลนแอนติบอดี 12H3 และ 20E5 ได้รับการยอมรับที่ถูกตัดทอนฮิวเมนพันธุ์CD134 ที่ขาด CRD1 และ CRD1-CRD2 (แสดงเป็น`CRD2 'คอนสตรัคต์และ` CRD3' คอนสตรัคต์ , ตามลำดับ) ในเซลล์ transfected 293-F ในทางตรงกันข้ามการยึดเกาะของเมาส์แอนติ - ฮิวเมนแอนติบอดีโคลน CD134 12H3 กับตัวแปรที่ถูกตัดทอนฮิวเมนCD134 ที่ขาด CRD1-CRD2-ตัด CRD3 อัล20 โมดูล (แสดงเป็น `CRD4 'คอนสตรัคต์) เป็น อ่อนแอมากและการยึดเกาะของเมาส์แอนติ - ฮิวเมนแอนติบอดีโคลน CD134 12H3 กับตัวแปรที่ถูกตัดทอนฮิวเมน CD134 ที่ขาดCRD1-CRD2-ตัด CRD3 อัลโมดูล CRD4 ย่อยอัลโมดูล(ตามคำนิยามของ Latza . et al, Eur J Immunol 1994; 24: 677-683) หรืออีกทางเลือกหนึ่งCRD1-CRD2-CRD3 อัลโมดูล B1 (ตามคำนิยามของ25 Compaan et al, โครงสร้าง 2006; 14:. 1321-1330; แสดงเป็น `tcCRD4 'คอนสต รัคต์) เป็นขาดอย่างสมบูรณ์ขณะที่เมาส์แอนติ- ฮิวเมนแอนติบอดีโคลน CD134 20E5 แสดงให้เห็นว่ามีความแข็งแกร่งที่มีผลผูกพันกับตัดทอนฮิวเมนCD134 ตัวแปรที่ขาด CRD1- CRD2-ตัด CRD3 อัลโมดูล (แสดงเป็น `CRD4 'คอน สตรัคต์) และต่อต้านตัดฮิวเมนCD134 ตัวแปรที่ขาด CRD1-CRD2-ตัด CRD3 Al- 30 โมดูลย่อย CRD4 อัลโมดูล (ตามคำนิยามของ Latza et al, Eur J. Immunol 1994; 24: 677 683) หรืออีกทางเลือกหนึ่ง CRD1-CRD2-CRD3 Al-B1 โมดูล(ตามคำนิยามของ Compaan et al, โครงสร้าง 2006 14: 1321-1330; เขียนแทน. เป็น `tcCRD4 'คอนสตรัคต์) ผลการศึกษานี้แสดงให้เห็นว่าเมาส์แอนติ - ฮิวเมน CD134 แอนติบอดีโคลน12H3 และได้รับการยอมรับโดยเฉพาะ 20E5 ฮิวเมน CD134 (เปรียบเทียบเต็มความยาวของฮิวเมนtransfection CD134 เทียบ transfection จำลอง ) นอกจากนี้เหล่านี้ผลการแสดงให้เห็นว่าเมาส์ต่อต้านฮิวเมน CD134 โคลนแอนติบอดี 12H3 และ 5 20E5 ดูเหมือนจะรับรู้ที่แตกต่างกันฮิวเมน CD134 เอพิโทปซึ่งคือหลักฐานโดยขาดตามลำดับของผลผูกพัน(โดยใช้การโคลนนิ่ง 12H3) เทียบกับที่แข็งแกร่งมีผลผูกพัน (โดยใช้การโคลนนิ่ง 20E5) กับตัดทอนฮิวเมน CD134 ตัวแปรที่ขาด CRD1 CRD2-ตัด CRD3 อัลโมดูล (แสดงเป็น `CRD4 'คอนสตรัคต์) และมีการตัดทอนฮิวเมน CD134 ตัวแปรที่ขาด CRD1-CRD2-ตัด CRD3 A1 โมดูล -CRD4 ย่อย Al- 10 โมดูล (ตามคำนิยามของ Latza et al, Eur J Immunol 1994; 24:. 677 683) หรืออีกทางเลือกหนึ่งCRD1-CRD2-CRD3 Al-B1 โมดูล (ตามคำนิยามของCompaan et al, โครงสร้าง 2006. 14: 1321-1330; แสดงเป็น `tcCRD4 'คอนสตรัคต์). ผลการศึกษานี้แสดงให้เห็นว่าเมาส์แอนติ - ฮิวเมนแอนติบอดีโคลน CD134 12H3 ไม่ได้ดูเหมือนจะรู้จักฮิวเมน CD134 เอพิโทปใน CRD1 และ CRD2 และเมาส์ 15 แอนติ - ฮิวเมนแอนติบอดีโคลน CD134 20E5 ไม่ได้ดูเหมือนจะรู้จักฮิวเมน CD134 เอพิโทปใน CRD1, CRD2 และตัดทอน CRD3 A1-โมดูลย่อย CRD4 Al- โมดูล (ตาม ความหมายของ Latza et al, Eur J Immunol 1994; 24: 677-683) หรืออีกทางเลือกหนึ่งCRD1-CRD2-CRD3 อัลโมดูล B1 (ตามคำนิยามของCompaan et al, โครงสร้าง 2006; 14:. 1321-1330)
การแปล กรุณารอสักครู่..
( ข ) การยึดเกาะของเมาส์แอนติ - ฮิวเมน cd134 โมโนโคลนอลแอนติบอดีโคลน 12h3 และ
20e5 กับเต็มตัวฮิวเมน cd134 สร้างต่าง ๆ และตัดฮิวเมน
cd134 โครงสร้างที่แสดงในเซลล์ 293-f ( แผนที่โดเมน )
เพื่อวิเคราะห์ได้เฉพาะแอนติ - เมาส์ฮิวเมน cd134
โมโนโคลนอลแอนติบอดีโคลน และ 20e5 12h3 ,สถานที่ตั้งของเอพิโทป ( s ) ที่รู้จัก 25 โดยเมาส์แอนติ - ฮิวเมน cd134 โมโนโคลนอลแอนติบอดีโคลนและถูกกำหนดโดย 12h3 20e5
แผนที่โดเมน ความสามารถของแอนติ - เมาส์ฮิวเมน cd134
โมโนโคลนอลแอนติบอดีโคลนและ 12h3 20e5 ผูกปลายตัด ฮิวเมน cd134
โครงสร้าง ที่แสดงออกบนผิว ( hek มา ) 297-f เซลล์ถูกกำหนดโดยการวิเคราะห์ facs
.
30 ตามวรรณคดี ( สวิสก่อน : p43489.1 ; latza et al . Eur J immunol 1994 ;
24 : 677-683 ; bodmer et al . แนวโน้มเกี่ยวกับชีวเคมีวิทยาศาสตร์ 2002 ; 27 : 19-26 ; compaan et al .
โครงสร้าง 2006 ; 14 : 1321-1330 ; เราสิทธิบัตร PUBL . หมายเลข 2011 / 0028688 AL ) ซิสเทอีน -
รวยโดเมน ( CRD ) และโครงสร้าง hingelike ในภูมิภาคภายนอกเซลล์ของฮิวเมน
cd134 ระบุ . crds เขียน crd1 crd2 ( ตัด ) crd3 , , , crd4
( ตัด ) ( ดู 20 รูป ) crds ประกอบด้วย topologically แตกต่างกันประเภทของ
โมดูลที่เรียกว่า a-module และ b-module ( เห็นรูป 20 ) เป็นโมดูล C -
รูปร่าง โครงสร้าง และ b-modules รูปโครงสร้าง โดยทั่วไปความ (
5 มักจะประกอบด้วย a1-b2-modules ค็อค a2-b1-modules ( หรือน้อยกว่า ,
คู่ของโมดูลที่แตกต่างกัน เช่น al-b1 ) กับ 6 ปีซิสเทอีนตกค้าง , โดยที่
ตัวเลขแสดงจำนวน = สะพานภายในแต่ละโมดูล ( เห็น
รูป 20 ) แสดง 20 รูป cd134 , ฮิวเมนแตกต่างกัน 5 โครงสร้างถูก
สร้างและแสดง ( 1 ) เต็มตัวฮิวเมน cd134 สร้างซึ่งเริ่มต้นด้วย 10 ถูก crd1 ( เช่นcrd1 al-b2-module ครอบคลุมกรดอะมิโน 29-65 ) และ
ดังนั้นกล่าวคือเป็น ` crd1 ' และประกอบรวมด้วย D กรดอะมิโนเซียวเหล่งนึ่ง ( ดู seq id หมายเลข 1 )
( 2 ) ` crd2 ' สร้างกรดอะมิโน ซึ่งเริ่มต้นด้วย crd2 ( เช่น crd2 อัล B2
ครอบคลุมโมดูลกรดอะมิโน 66-107 ) และประกอบรวมด้วย D กรดอะมิโน 66-277 เชื่อมโยงสัญญาณ
เปปไทด์ กรดอะมิโน 1-28 ( ดู seq id หมายเลข 30 ) , ( 3 ) ` crd3 ' สร้างซึ่งจะเริ่ม 15 กับเทอร์มินัล crd3 ( เช่น crd3 A1 BL โมดูลครอบคลุมกรดอะมิโน 108-146
( ตาม compaan et al . โครงสร้าง 2006 ; 14 : 1321-1330 ) ค็อคตัดทอน crd3
อัลโมดูลครอบคลุมกรดอะมิโน 108-126 ( ตาม latza et al . immunol Eur J
1994 ; 24 : 677-683 ) และประกอบรวมด้วย D กรดอะมิโน 108-277 เชื่อมโยงสัญญาณเปปไทด์ กรดอะมิโน 1-28
( เห็น seq id หมายเลข 31 )( 4 ) ` crd4 ' สร้าง ซึ่งประกอบด้วย n -
20 สถานี crd4 ค็อค crd3 ย่อย B1 โมดูล / ตัด crd4 อัลโม ( I ,
crd4 al-b1-module ครอบคลุมกรดอะมิโน 127 167 ( latza et al . Eur J immunol 1994 ;
24 : 677-683 ) ค็อครวมกัน ( ไม่แสดงใน 20 รูป ) ของ crd3 ซับโดเมน BL -
โมดูลด้วยตัดทอน crd4 อัลโมดูลครอบคลุมกรดอะมิโน 127-146 กับอะมิโนกรด 147-167
,ตามลำดับ ( compaan et al . โครงสร้าง 2006 ; 14 : 1321-1330 ) และ 25 ประกอบรวมด้วย D กรดอะมิโน 127-277 เชื่อมโยงสัญญาณเปปไทด์ กรดอะมิโน 1-28 ( ดู seq
ID หมายเลข 32 ) และ ( 5 ) การสื่อสาร ( TC ) crd4 ' สร้าง ซึ่งประกอบด้วยกรดอะมิโน
ตัด crd4 ค็อค crd4 โมดูลย่อย B1 ( เช่น ตัด crd4 ล โมดูล
ครอบคลุมกรดอะมิโน 147-167 ( compaan et al .
20e5 กับเต็มตัวฮิวเมน cd134 สร้างต่าง ๆ และตัดฮิวเมน
cd134 โครงสร้างที่แสดงในเซลล์ 293-f ( แผนที่โดเมน )
เพื่อวิเคราะห์ได้เฉพาะแอนติ - เมาส์ฮิวเมน cd134
โมโนโคลนอลแอนติบอดีโคลน และ 20e5 12h3 ,สถานที่ตั้งของเอพิโทป ( s ) ที่รู้จัก 25 โดยเมาส์แอนติ - ฮิวเมน cd134 โมโนโคลนอลแอนติบอดีโคลนและถูกกำหนดโดย 12h3 20e5
แผนที่โดเมน ความสามารถของแอนติ - เมาส์ฮิวเมน cd134
โมโนโคลนอลแอนติบอดีโคลนและ 12h3 20e5 ผูกปลายตัด ฮิวเมน cd134
โครงสร้าง ที่แสดงออกบนผิว ( hek มา ) 297-f เซลล์ถูกกำหนดโดยการวิเคราะห์ facs
.
30 ตามวรรณคดี ( สวิสก่อน : p43489.1 ; latza et al . Eur J immunol 1994 ;
24 : 677-683 ; bodmer et al . แนวโน้มเกี่ยวกับชีวเคมีวิทยาศาสตร์ 2002 ; 27 : 19-26 ; compaan et al .
โครงสร้าง 2006 ; 14 : 1321-1330 ; เราสิทธิบัตร PUBL . หมายเลข 2011 / 0028688 AL ) ซิสเทอีน -
รวยโดเมน ( CRD ) และโครงสร้าง hingelike ในภูมิภาคภายนอกเซลล์ของฮิวเมน
cd134 ระบุ . crds เขียน crd1 crd2 ( ตัด ) crd3 , , , crd4
( ตัด ) ( ดู 20 รูป ) crds ประกอบด้วย topologically แตกต่างกันประเภทของ
โมดูลที่เรียกว่า a-module และ b-module ( เห็นรูป 20 ) เป็นโมดูล C -
รูปร่าง โครงสร้าง และ b-modules รูปโครงสร้าง โดยทั่วไปความ (
5 มักจะประกอบด้วย a1-b2-modules ค็อค a2-b1-modules ( หรือน้อยกว่า ,
คู่ของโมดูลที่แตกต่างกัน เช่น al-b1 ) กับ 6 ปีซิสเทอีนตกค้าง , โดยที่
ตัวเลขแสดงจำนวน = สะพานภายในแต่ละโมดูล ( เห็น
รูป 20 ) แสดง 20 รูป cd134 , ฮิวเมนแตกต่างกัน 5 โครงสร้างถูก
สร้างและแสดง ( 1 ) เต็มตัวฮิวเมน cd134 สร้างซึ่งเริ่มต้นด้วย 10 ถูก crd1 ( เช่นcrd1 al-b2-module ครอบคลุมกรดอะมิโน 29-65 ) และ
ดังนั้นกล่าวคือเป็น ` crd1 ' และประกอบรวมด้วย D กรดอะมิโนเซียวเหล่งนึ่ง ( ดู seq id หมายเลข 1 )
( 2 ) ` crd2 ' สร้างกรดอะมิโน ซึ่งเริ่มต้นด้วย crd2 ( เช่น crd2 อัล B2
ครอบคลุมโมดูลกรดอะมิโน 66-107 ) และประกอบรวมด้วย D กรดอะมิโน 66-277 เชื่อมโยงสัญญาณ
เปปไทด์ กรดอะมิโน 1-28 ( ดู seq id หมายเลข 30 ) , ( 3 ) ` crd3 ' สร้างซึ่งจะเริ่ม 15 กับเทอร์มินัล crd3 ( เช่น crd3 A1 BL โมดูลครอบคลุมกรดอะมิโน 108-146
( ตาม compaan et al . โครงสร้าง 2006 ; 14 : 1321-1330 ) ค็อคตัดทอน crd3
อัลโมดูลครอบคลุมกรดอะมิโน 108-126 ( ตาม latza et al . immunol Eur J
1994 ; 24 : 677-683 ) และประกอบรวมด้วย D กรดอะมิโน 108-277 เชื่อมโยงสัญญาณเปปไทด์ กรดอะมิโน 1-28
( เห็น seq id หมายเลข 31 )( 4 ) ` crd4 ' สร้าง ซึ่งประกอบด้วย n -
20 สถานี crd4 ค็อค crd3 ย่อย B1 โมดูล / ตัด crd4 อัลโม ( I ,
crd4 al-b1-module ครอบคลุมกรดอะมิโน 127 167 ( latza et al . Eur J immunol 1994 ;
24 : 677-683 ) ค็อครวมกัน ( ไม่แสดงใน 20 รูป ) ของ crd3 ซับโดเมน BL -
โมดูลด้วยตัดทอน crd4 อัลโมดูลครอบคลุมกรดอะมิโน 127-146 กับอะมิโนกรด 147-167
,ตามลำดับ ( compaan et al . โครงสร้าง 2006 ; 14 : 1321-1330 ) และ 25 ประกอบรวมด้วย D กรดอะมิโน 127-277 เชื่อมโยงสัญญาณเปปไทด์ กรดอะมิโน 1-28 ( ดู seq
ID หมายเลข 32 ) และ ( 5 ) การสื่อสาร ( TC ) crd4 ' สร้าง ซึ่งประกอบด้วยกรดอะมิโน
ตัด crd4 ค็อค crd4 โมดูลย่อย B1 ( เช่น ตัด crd4 ล โมดูล
ครอบคลุมกรดอะมิโน 147-167 ( compaan et al .
การแปล กรุณารอสักครู่..
ภาษาอื่น ๆ
การสนับสนุนเครื่องมือแปลภาษา: กรีก, กันนาดา, กาลิเชียน, คลิงออน, คอร์สิกา, คาซัค, คาตาลัน, คินยารวันดา, คีร์กิซ, คุชราต, จอร์เจีย, จีน, จีนดั้งเดิม, ชวา, ชิเชวา, ซามัว, ซีบัวโน, ซุนดา, ซูลู, ญี่ปุ่น, ดัตช์, ตรวจหาภาษา, ตุรกี, ทมิฬ, ทาจิก, ทาทาร์, นอร์เวย์, บอสเนีย, บัลแกเรีย, บาสก์, ปัญจาป, ฝรั่งเศส, พาชตู, ฟริเชียน, ฟินแลนด์, ฟิลิปปินส์, ภาษาอินโดนีเซี, มองโกเลีย, มัลทีส, มาซีโดเนีย, มาราฐี, มาลากาซี, มาลายาลัม, มาเลย์, ม้ง, ยิดดิช, ยูเครน, รัสเซีย, ละติน, ลักเซมเบิร์ก, ลัตเวีย, ลาว, ลิทัวเนีย, สวาฮิลี, สวีเดน, สิงหล, สินธี, สเปน, สโลวัก, สโลวีเนีย, อังกฤษ, อัมฮาริก, อาร์เซอร์ไบจัน, อาร์เมเนีย, อาหรับ, อิกโบ, อิตาลี, อุยกูร์, อุสเบกิสถาน, อูรดู, ฮังการี, ฮัวซา, ฮาวาย, ฮินดี, ฮีบรู, เกลิกสกอต, เกาหลี, เขมร, เคิร์ด, เช็ก, เซอร์เบียน, เซโซโท, เดนมาร์ก, เตลูกู, เติร์กเมน, เนปาล, เบงกอล, เบลารุส, เปอร์เซีย, เมารี, เมียนมา (พม่า), เยอรมัน, เวลส์, เวียดนาม, เอสเปอแรนโต, เอสโทเนีย, เฮติครีโอล, แอฟริกา, แอลเบเนีย, โคซา, โครเอเชีย, โชนา, โซมาลี, โปรตุเกส, โปแลนด์, โยรูบา, โรมาเนีย, โอเดีย (โอริยา), ไทย, ไอซ์แลนด์, ไอร์แลนด์, การแปลภาษา.
- in my opinion When I read this article I
- ไม่มีใครได้ทุกอย่างอย่างที่คิด
- มีคุณหมอประจำไหมคะ
- Thats cool. Im doing my degree now, part
- I'm trying to get a job
- ไปเลยลูกพี่
- ซอย
- ฉันเรียกน้องไปโรงเรียนอย่างเสียงดัง
- 18+ adults pictures!!! U like that?))
- สเปคไม่ถูกต้องตอนรับจะไม่ผ่าน
- observe and take nots
- เขาผอมไหม?
- ซอย
- The Real Aunt Molly
- เพราะระบบการศึกษาของมาเลดซียจัดอยู่ในระด
- แน่นอนมันทำให้ผมผ่อนคลายและสนุกสนานไปกับ
- When should I visit the Japan?
- ไปเลยลูกพี่
- เขาผอมไหม?
- ซ้าย ขวา กลาง
- แต่ละประเทศจะใช้ภาษาประจำชาติที่แตกต่างก
- สเปคไม่ถูกต้องตอนรับจะไม่ผ่าน
- Matrix
- I really enjoyed the Game of Thrones boo
