A purification procedure for L-myo-

A purification procedure for L-myo-inositol-1-phosphate synthase (EC 5.5.1.4) from yeast is described. The method routinely produces enrichments of 500-fold with 20-40% yields. In addition, a procedure for obtaining highly specific and purified antibody against the protein is described. The molecular weight of the native enzyme as determined by gel filtration is approximately 240,000. A single subunit of approximately Mr = 62,000 is detected upon sodium dodecyl sulfate-gel electrophoresis of the purified enzyme. The purified antibody was used to assay crude extracts of wild type and inositol-requiring mutants for the presence of cross-reacting material. Mutant ino1-13 produces an inactive but fully cross-reacting protein of a molecular weight identical with the wild type enzyme subunit. Mutant ino1-16 produces low levels of a fully active enzyme which appears to be more susceptible to proteolytic degradation. Mutants representing other unlinked loci (ino2 and ino4) do not produce cross-reacting protein. Based on this analysis, the ino1 locus is identified as the structural gene for the enzyme. Furthermore, it is shown that the Mr = 62,000 subunit is largely absent from crude extracts prepared from wild type yeast grown in the presence of repressing concentrations of inositol.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

อธิบายขั้นตอนการทำให้บริสุทธิ์สำหรับ L-myo-ทอ-1-ฟอสเฟต synthase (EC 5.5.1.4) จากยีสต์ วิธีเป็นประจำก่อให้เกิด enrichments ของ 500-fold มีอัตราผลตอบแทน 20-40% นอกจากนี้ อธิบายขั้นตอนสำหรับการได้รับแอนติบอดีที่เฉพาะเจาะจง และมีความบริสุทธิ์สูงกับโปรตีน น้ำหนักโมเลกุลของเอนไซม์พื้นเมืองตามที่กำหนดโดยเจกรองได้ประมาณ 240,000 ย่อยหนึ่งของนายประมาณ = 62,000 ตรวจพบเมื่อโซเดียมซัลเฟตเจ dodecyl อิของเอนไซม์บริสุทธิ์ แอนติบอดีบริสุทธิ์ถูกใช้เพื่อสกัดน้ำมันดิบของป่าชนิดและสายพันธุ์ต้องการทอสำหรับการปรากฏตัวของวัสดุ cross-reacting assay Ino1-13 กลายพันธุ์ผลิตโปรตีนไม่ได้ใช้งาน แต่เต็ม cross-reacting ของน้ำหนักโมเลกุลเหมือนกับการย่อยเอนไซม์ชนิดป่า กลายพันธุ์ ino1-16 ผลิตเอนไซม์ใช้งานอยู่ทั้งหมดซึ่งดูเหมือนจะอ่อนแอมากขึ้นเพื่อลดการย่อยโปรตีนในระดับต่ำ การกลายพันธุ์ที่ตำแหน่งอ่อนแออื่น ๆ ไม่ได้เชื่อมโยง (ino2 และ ino4) เป็นตัวแทนไม่ได้ผลิตโปรตีน cross-reacting จากการวิเคราะห์นี้ ที ino1 จะถูกระบุเป็นยีนโครงสร้างสำหรับการทำงานของเอนไซม์ นอกจากนี้ มันแสดงให้เห็นว่า Mr = 62,000 ย่อยจะขาดส่วนใหญ่จากดิบสารสกัดจากยีสต์ป่าชนิดที่ปลูกในที่ที่มีชื่อความเข้มข้นของทอ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ขั้นตอนการทำให้บริสุทธิ์สำหรับ L-Myo-ทอ-1-ฟอสเฟตเทส (EC 5.5.1.4) จากยีสต์อธิบายไว้ วิธีการผลิตประจำ enrichments 500 เท่ามีอัตราผลตอบแทน 20-40% นอกจากนี้ยังมีขั้นตอนสำหรับการได้รับแอนติบอดีสูงที่เฉพาะเจาะจงและบริสุทธิ์กับโปรตีนอธิบาย น้ำหนักโมเลกุลของเอนไซม์พื้นเมืองตามที่กำหนดโดยการกรองเจลจะอยู่ที่ประมาณ 240,000 subunit เดียวประมาณ 62,000 นาย = เมื่อมีการตรวจพบโซเดียมโดเดซิลซัลเฟตข่าวคราวของเอนไซม์ แอนติบอดีบริสุทธิ์ถูกนำมาทดสอบสารสกัดจากประเภทป่ากลายพันธุ์และการทอที่ต้องใช้สำหรับการปรากฏตัวของวัสดุข้ามปฏิกิริยา ino1-13 Mutant ผลิตไม่ได้ใช้งาน แต่อย่างเต็มที่ข้ามปฏิกิริยาของโปรตีนน้ำหนักโมเลกุลเหมือนกันกับป่าประเภทเอนไซม์ subunit ino1-16 Mutant ผลิตระดับต่ำของเอนไซม์ที่ใช้งานได้อย่างเต็มที่ซึ่งจะปรากฏเป็นอ่อนแอมากขึ้นเพื่อการย่อยสลายโปรตีน กลายพันธุ์เป็นตัวแทนของตำแหน่งอื่น ๆ ยกเลิกการเชื่อมโยง (ino2 และ ino4) ไม่ได้ผลิตข้ามปฏิกิริยาโปรตีน จากการวิเคราะห์นี้สถานที ino1 ถูกระบุว่าเป็นยีนโครงสร้างเอนไซม์ นอกจากนี้ยังแสดงให้เห็นว่านาย = 62,000 หน่วยย่อยเป็นส่วนใหญ่มาจากสารสกัดที่เตรียมจากยีสต์ชนิดป่าที่ปลูกในการปรากฏตัวของการระงับความเข้มข้นของทอ