- ข้อความ
- ประวัติศาสตร์
Material and methods2.1. Reagents a
Material and methods
2.1. Reagents and other materials
The following HPLC-grade reagents were used [the purity grade of the reagents is reported as percentage]: methanol (Tedia, USA) [99.9], acetonitrile (Vetec, Brazil) [99.8], ethyl acetate (Mallinckrodt, USA) [99.9], and acetic acid (Vetec, Brazil) [99.7]. Ultrapure water was produced with the Milli-Q® system (Millipore, USA). The following reagents of analytical grade were used: dithiothreitol (DTT) (Sigma Aldrich, Germany) [99.0], metaphosphoric acid (Merck, Germany) [90.5–99.5], sulfuric acid (Mallinckrodt, USA) [97], Trizma buffer (Nuclear, Brazil) [99.8], ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA), phosphoric acid (Proquímios, Brazil) [85.0], monobasic sodium phosphate (Synth, Brazil) [98–102], acetone (Vetec, Brazil) [99.5], petroleum ether (Impex, Brazil) [99.9], ethyl ether (Impex, Brazil) [99.9], anhydrous sodium sulfate (Impex, Brazil) [99], Celite (Synth, Brazil), and magnesium oxide (Vetec, Brazil) [95]. The L-AA standard was acquired from Vetec (Brazil) [99.0]. The lycopene and β-carotene standards were separated by open-column chromatography. The samples were filtered through filter paper. Before injection, the samples and standard solutions were filtered through Millex HV filter units (polyethylene housing, 0.45-μm pore size; Millipore, Brazil).
2.2. Fruits
Persimmon (Diospyros kaki L., var. Rama Forte), acerola (Malpighia punicifolia L., var. Olivier) and strawberry (Fragaria vesca L., var. Oso Grande) fruits were obtained from the São Paulo Company Kórin Agricultura Natural Ltda., located in Atibaia, São Paulo, Brazil. The fruits were grown by organic and conventional farming in the same geographic region (Atibaia, São Paulo, Brazil) under the same climatic conditions and were collected randomly during the harvest season of each fruit throughout 2007. The organic fruits had a certificate issued by the Motika Okada Certification (CMO) service. The fruits were harvested in the partially ripe stage (stage of commercialisation) and properly stored in cardboard boxes protected against shock. The fruits were transported overland and arrived at the Laboratory of Vitamin Analysis, Department of Nutrition, Federal University of Viçosa, Minas Gerais, Brazil, within 48 h post-harvest.
2.3. Experimental design
A completely randomised design consisting of two treatments (organic and conventional production system) and six repetitions per treatment was used. The samples were collected randomly during the harvest season of each fruit.
2.4. Collection, sampling and sample preparation
The organic and conventional fruits were collected in such a way to obtain six different repetitions. The production area was divided into six small plots. In each plot, 2 kg of persimmons and 1 kg of acerola and strawberries produced by organic and conventional farming were collected. The six repetitions were sent to the laboratory in a single step, corresponding to 12 kg of persimmons and 6 kg of acerola and strawberries per treatment.
After receiving the fruits, each repetition was subdivided into two parts for sample preparation. One half was used for analysis of vitamin C on the same day and was therefore stored at room temperature. The other half was stored in a refrigerator at approximately 10 °C for sample preparation and analysis of carotenoids on the next day.
Persimmons, acerola and strawberries were washed under running water and the non-edible parts (acerola seeds and leaves of persimmon and strawberry) were removed. The fruits were then chopped and homogenised in a multi-purpose food processor for 5 min until complete homogenisation of the sample, thus guaranteeing more reliable sampling. This procedure was performed six times for each treatment (organic and conventional farming).
2.5. Extraction of vitamin C and carotenoids
Vitamin C was extracted from the fruits according to the method of Campos et al. (2009). The previously homogenised sample was weighed (about 1 g) and 15 ml extraction solution (3% metaphosphoric acid, 8% acetic acid, 0.3 N sulfuric acid and 1 mM EDTA) was added. Next, the sample was triturated in a micro-homogenizer for 5 min and vacuum filtered through filter paper. The filtrate was diluted in ultrapure water until a volume of 25 ml in a volume balloon and centrifuged at 1789g for 15 min. The supernatant was stored in a refrigerator at about 5 °C until the time for chromatographic analysis.
Carotenoids were extracted as described by Rodriguez-Amaya, Raymundo, Lee, Simpson, and Chichester (1976), with some modifications. Approximately 1 g of previously homogenised persimmons and acerola and 5 g of strawberries were triturated with cold acetone (60 ml), vacuum filtered through a Büchner funnel, and transferred to cold petroleum ether (50 ml). The extract was concentrated in a rotary evaporator at a temperature of 35–37 °C. Next, the carotenoids were dissolved in 25 ml petroleum ether and stored frozen (at about −5 °C) in amber glass flasks until the time for chromatographic analysis.
The samples were protected from light throughout the process of chemical analysis using amber glass ware and aluminum wrapping.
2.6. Determination of ascorbic acid and carotenoids
The presence of ascorbic acid and carotenoids in fruits was analysed by HPLC using a Shimadzu liquid chromatography system (model SCL 10AT VP) equipped with a high-pressure pump (model LC-10AT VP), automatic loop injector (50 μl; model SIL-10AF), and UV/visible detector (diode array; model SPD-M10A). The system was controlled with the Multi System software, Class VP 6.12.
AA was analysed using the method optimised by Campos et al. (2009). The mobile phase consisted of 1 mM monobasic sodium phosphate (NaH2PO4) and 1 mM EDTA, with the pH adjusted to 3.0 with phosphoric acid (H3PO4), and was eluted isocratically on a Lichospher 100 RP18 column (250 × 4 mm, 5 μm; Merck, Germany) at a flow rate of 1 ml/min. AA was detected at 245 nm.
Carotenoids were analysed using the chromatographic conditions described by Pinheiro-Sant’Ana et al. (1998), with some modifications. The mobile phase consisted of methanol:ethyl acetate:acetonitrile (50:40:10) and was eluted isocratically at a flow rate of 2 ml/min on a Phenomenex C18 column (250 × 4.6 mm, 5 μm) coupled to a Phenomenex ODS guard column (C18, 4 × 3 mm). β-Carotene and lycopene were detected at 450 and 469 nm, respectively.
AA, lycopene and β-carotene were identified in the samples by comparison of the retention times obtained with those of the respective standards analysed under the same conditions, and by comparison of the absorption spectra of the standards and peaks of interest in the samples using a diode array detector.
2.7. Validation tests
Recovery of AA, lycopene and β-carotene was analysed, in triplicate, by the addition of the standard to persimmon, acerola and strawberry samples at a proportion of 20–100% of the average original content in the samples.
The linear range was determined by injection, in duplicate, of five increasing concentrations of the standard solutions of AA, lycopene and β-carotene under the same chromatographic conditions as those used for sample analysis.
The limit of detection was calculated as the minimum concentration able to provide a chromatographic signal three times higher than the background noise (Rodriguez-Amaya, 1999). The limit of quantification was calculated as the minimum concentration able to provide a chromatographic signal five times higher than the background noise (Rodriguez-Amaya, 1999).
2.8. Conversion and quantification of dehydroascorbic acid
DHA was quantified in the fruits by determination of the difference between total AA content (after conversion of DHA into AA) and original AA content (before conversion of DHA). DHA was converted into AA according to the method of Campos et al. (2009), adapted for fruits. Trizma buffer (0.5 M) containing 40 mM DTT (2.0 ml for persimmons and acerola and 2.5 ml for strawberries) was added to 1 ml of the sample extract. Addition of the buffer to the extract increased the pH to a value close to neutrality (pH 5.5–6.0). The mixture was left to react for 10 min at room temperature in the dark. After this period, 0.4 M H2SO4 was added (1.5 ml for persimmons and acerola and 2.0 ml for strawberries) to again reduce the pH before chromatographic injection.
2.9. Calculation of vitamin A value
Vitamin A value is expressed as retinol activity equivalent (RAE) per 100 g sample according to the conversion factors for vitamin A value established by the Institute of Medicine (Institute of Medicine (IOM-US), 2001). According to the IOM definition, 1 RAE corresponds to 1 μg retinol or 12 μg β-carotene.
2.10. Statistical analysis
The results were analysed by the Student t-test (α = 5%) using the SAS (Statistical Analysis System) program, version 9.1, licensed to the Federal University of Viçosa, Minas Gerais, Brazil.
3. Results and discussion
3.1. Qualitative separation of the compounds
Fig. 1 shows typical chromatograms obtained for the analysis of AA, lycopene and β-carotene in fruits. AA and β-carotene were found in all fruit samples, whereas lycopene was only detected in persimmons. DHA was detected in all fruits analysed, except for conventionally grown acerola.
2.1. Reagents and other materials
The following HPLC-grade reagents were used [the purity grade of the reagents is reported as percentage]: methanol (Tedia, USA) [99.9], acetonitrile (Vetec, Brazil) [99.8], ethyl acetate (Mallinckrodt, USA) [99.9], and acetic acid (Vetec, Brazil) [99.7]. Ultrapure water was produced with the Milli-Q® system (Millipore, USA). The following reagents of analytical grade were used: dithiothreitol (DTT) (Sigma Aldrich, Germany) [99.0], metaphosphoric acid (Merck, Germany) [90.5–99.5], sulfuric acid (Mallinckrodt, USA) [97], Trizma buffer (Nuclear, Brazil) [99.8], ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA), phosphoric acid (Proquímios, Brazil) [85.0], monobasic sodium phosphate (Synth, Brazil) [98–102], acetone (Vetec, Brazil) [99.5], petroleum ether (Impex, Brazil) [99.9], ethyl ether (Impex, Brazil) [99.9], anhydrous sodium sulfate (Impex, Brazil) [99], Celite (Synth, Brazil), and magnesium oxide (Vetec, Brazil) [95]. The L-AA standard was acquired from Vetec (Brazil) [99.0]. The lycopene and β-carotene standards were separated by open-column chromatography. The samples were filtered through filter paper. Before injection, the samples and standard solutions were filtered through Millex HV filter units (polyethylene housing, 0.45-μm pore size; Millipore, Brazil).
2.2. Fruits
Persimmon (Diospyros kaki L., var. Rama Forte), acerola (Malpighia punicifolia L., var. Olivier) and strawberry (Fragaria vesca L., var. Oso Grande) fruits were obtained from the São Paulo Company Kórin Agricultura Natural Ltda., located in Atibaia, São Paulo, Brazil. The fruits were grown by organic and conventional farming in the same geographic region (Atibaia, São Paulo, Brazil) under the same climatic conditions and were collected randomly during the harvest season of each fruit throughout 2007. The organic fruits had a certificate issued by the Motika Okada Certification (CMO) service. The fruits were harvested in the partially ripe stage (stage of commercialisation) and properly stored in cardboard boxes protected against shock. The fruits were transported overland and arrived at the Laboratory of Vitamin Analysis, Department of Nutrition, Federal University of Viçosa, Minas Gerais, Brazil, within 48 h post-harvest.
2.3. Experimental design
A completely randomised design consisting of two treatments (organic and conventional production system) and six repetitions per treatment was used. The samples were collected randomly during the harvest season of each fruit.
2.4. Collection, sampling and sample preparation
The organic and conventional fruits were collected in such a way to obtain six different repetitions. The production area was divided into six small plots. In each plot, 2 kg of persimmons and 1 kg of acerola and strawberries produced by organic and conventional farming were collected. The six repetitions were sent to the laboratory in a single step, corresponding to 12 kg of persimmons and 6 kg of acerola and strawberries per treatment.
After receiving the fruits, each repetition was subdivided into two parts for sample preparation. One half was used for analysis of vitamin C on the same day and was therefore stored at room temperature. The other half was stored in a refrigerator at approximately 10 °C for sample preparation and analysis of carotenoids on the next day.
Persimmons, acerola and strawberries were washed under running water and the non-edible parts (acerola seeds and leaves of persimmon and strawberry) were removed. The fruits were then chopped and homogenised in a multi-purpose food processor for 5 min until complete homogenisation of the sample, thus guaranteeing more reliable sampling. This procedure was performed six times for each treatment (organic and conventional farming).
2.5. Extraction of vitamin C and carotenoids
Vitamin C was extracted from the fruits according to the method of Campos et al. (2009). The previously homogenised sample was weighed (about 1 g) and 15 ml extraction solution (3% metaphosphoric acid, 8% acetic acid, 0.3 N sulfuric acid and 1 mM EDTA) was added. Next, the sample was triturated in a micro-homogenizer for 5 min and vacuum filtered through filter paper. The filtrate was diluted in ultrapure water until a volume of 25 ml in a volume balloon and centrifuged at 1789g for 15 min. The supernatant was stored in a refrigerator at about 5 °C until the time for chromatographic analysis.
Carotenoids were extracted as described by Rodriguez-Amaya, Raymundo, Lee, Simpson, and Chichester (1976), with some modifications. Approximately 1 g of previously homogenised persimmons and acerola and 5 g of strawberries were triturated with cold acetone (60 ml), vacuum filtered through a Büchner funnel, and transferred to cold petroleum ether (50 ml). The extract was concentrated in a rotary evaporator at a temperature of 35–37 °C. Next, the carotenoids were dissolved in 25 ml petroleum ether and stored frozen (at about −5 °C) in amber glass flasks until the time for chromatographic analysis.
The samples were protected from light throughout the process of chemical analysis using amber glass ware and aluminum wrapping.
2.6. Determination of ascorbic acid and carotenoids
The presence of ascorbic acid and carotenoids in fruits was analysed by HPLC using a Shimadzu liquid chromatography system (model SCL 10AT VP) equipped with a high-pressure pump (model LC-10AT VP), automatic loop injector (50 μl; model SIL-10AF), and UV/visible detector (diode array; model SPD-M10A). The system was controlled with the Multi System software, Class VP 6.12.
AA was analysed using the method optimised by Campos et al. (2009). The mobile phase consisted of 1 mM monobasic sodium phosphate (NaH2PO4) and 1 mM EDTA, with the pH adjusted to 3.0 with phosphoric acid (H3PO4), and was eluted isocratically on a Lichospher 100 RP18 column (250 × 4 mm, 5 μm; Merck, Germany) at a flow rate of 1 ml/min. AA was detected at 245 nm.
Carotenoids were analysed using the chromatographic conditions described by Pinheiro-Sant’Ana et al. (1998), with some modifications. The mobile phase consisted of methanol:ethyl acetate:acetonitrile (50:40:10) and was eluted isocratically at a flow rate of 2 ml/min on a Phenomenex C18 column (250 × 4.6 mm, 5 μm) coupled to a Phenomenex ODS guard column (C18, 4 × 3 mm). β-Carotene and lycopene were detected at 450 and 469 nm, respectively.
AA, lycopene and β-carotene were identified in the samples by comparison of the retention times obtained with those of the respective standards analysed under the same conditions, and by comparison of the absorption spectra of the standards and peaks of interest in the samples using a diode array detector.
2.7. Validation tests
Recovery of AA, lycopene and β-carotene was analysed, in triplicate, by the addition of the standard to persimmon, acerola and strawberry samples at a proportion of 20–100% of the average original content in the samples.
The linear range was determined by injection, in duplicate, of five increasing concentrations of the standard solutions of AA, lycopene and β-carotene under the same chromatographic conditions as those used for sample analysis.
The limit of detection was calculated as the minimum concentration able to provide a chromatographic signal three times higher than the background noise (Rodriguez-Amaya, 1999). The limit of quantification was calculated as the minimum concentration able to provide a chromatographic signal five times higher than the background noise (Rodriguez-Amaya, 1999).
2.8. Conversion and quantification of dehydroascorbic acid
DHA was quantified in the fruits by determination of the difference between total AA content (after conversion of DHA into AA) and original AA content (before conversion of DHA). DHA was converted into AA according to the method of Campos et al. (2009), adapted for fruits. Trizma buffer (0.5 M) containing 40 mM DTT (2.0 ml for persimmons and acerola and 2.5 ml for strawberries) was added to 1 ml of the sample extract. Addition of the buffer to the extract increased the pH to a value close to neutrality (pH 5.5–6.0). The mixture was left to react for 10 min at room temperature in the dark. After this period, 0.4 M H2SO4 was added (1.5 ml for persimmons and acerola and 2.0 ml for strawberries) to again reduce the pH before chromatographic injection.
2.9. Calculation of vitamin A value
Vitamin A value is expressed as retinol activity equivalent (RAE) per 100 g sample according to the conversion factors for vitamin A value established by the Institute of Medicine (Institute of Medicine (IOM-US), 2001). According to the IOM definition, 1 RAE corresponds to 1 μg retinol or 12 μg β-carotene.
2.10. Statistical analysis
The results were analysed by the Student t-test (α = 5%) using the SAS (Statistical Analysis System) program, version 9.1, licensed to the Federal University of Viçosa, Minas Gerais, Brazil.
3. Results and discussion
3.1. Qualitative separation of the compounds
Fig. 1 shows typical chromatograms obtained for the analysis of AA, lycopene and β-carotene in fruits. AA and β-carotene were found in all fruit samples, whereas lycopene was only detected in persimmons. DHA was detected in all fruits analysed, except for conventionally grown acerola.
0/5000
วัสดุและวิธีการ2.1. reagents และวัสดุอื่น ๆใช้ reagents HPLC เกรดดังต่อไปนี้ [เกรดความบริสุทธิ์ของ reagents ที่รายงานเป็นเปอร์เซ็นต์]: เมทานอล (Tedia สหรัฐอเมริกา) [99.9], acetonitrile (Vetec บราซิล) [99.8], acetate เอทิล (Mallinckrodt สหรัฐอเมริกา) [99.9], และกรดอะซิติก (Vetec บราซิล) [99.7] น้ำ ultrapure ถูกผลิต ด้วยระบบ Q ® (มาก สหรัฐอเมริกา) ใช้ reagents ต่อเกรดวิเคราะห์: dithiothreitol (DTT) (Aldrich ซิก เยอรมนี) [99.0], กรด metaphosphoric (เมอร์ค เยอรมนี) [90.5-99.5], กรดกำมะถัน (Mallinckrodt สหรัฐอเมริกา) [97], Trizma บัฟเฟอร์ (นิวเคลียร์ บราซิล) [99.8], กรด ethylenediaminetetraacetic (EDTA), กรดฟอสฟอริก (Proquímios บราซิล) [85.0], monobasic โซเดียมฟอสเฟต (Synth บราซิล) [98 – 102], อะซิโตน (Vetec บราซิล) [99.5], ปิโตรเลียมอีเทอร์ (Impex บราซิล) [99.9], เอทิลอีเทอร์ (Impex บราซิล) [99.9] ไดโซเดียมซัลเฟต (อิมเพ็กซ์ บราซิล) [99], Celite (Synth บราซิล), และแมกนีเซียมออกไซด์ (Vetec บราซิล) [95] มาตรฐาน L AA มาจาก Vetec (บราซิล) [99.0] มาตรฐาน lycopene และβ-แคโรทีนถูกแยก ด้วยคอลัมน์เปิด chromatography ตัวอย่างที่ถูกกรองผ่านกระดาษกรอง ก่อนฉีดยา ตัวอย่างการแก้ถูกกรองผ่านหน่วยกรอง Millex HV (เอทิลีนที่อยู่อาศัย ขนาดรูพรุน 0.45-μm มาก บราซิล)2.2. ผลไม้พลับ (kaki มะพลับ L. เพียงพระรามฟอร์ท), acerola (เชอร์รีสเปน punicifolia L. เพียง Olivier) และสตรอเบอร์รี่ (Fragaria vesca L. เพียงแกรนด์ Oso) ผลไม้ได้รับจากการเซาเปาลูบริษัท Kórin Agricultura ธรรมชาติ Ltda. อยู่ใน Atibaia เซาเปาลู บราซิล ผลไม้ที่ปลูก โดยเกษตรอินทรีย์ และเกษตรในเดียวกันภูมิภาค (Atibaia เซาเปาลู บราซิล) ภายใต้เงื่อนไข climatic เดียวธรรมดา และถูกรวบรวมไว้ได้ในช่วงฤดูเก็บเกี่ยวของผลไม้แต่ละตลอดปี 2007 ผลไม้อินทรีย์มีใบรับรองที่ออก โดยผู้ให้บริการออกใบรับรอง Motika โอคาดะ (CMO) ผลไม้ถูกเก็บเกี่ยวในระยะสุกบางส่วน (ระยะของ commercialisation) และถูกเก็บไว้ในกล่องกระดาษแข็งป้องกันกับช็อค ผลไม้ถูกขนส่งทาง และมาถึงที่ห้องปฏิบัติการ วิเคราะห์วิตามิน ภาควิชา โภชนวิทยา มหาวิทยาลัยของรัฐบาลกลาง Viçosa, Minas Gerais บราซิล ภายใน 48 h หลังเก็บเกี่ยว2.3 การทดลองออกแบบใช้แบบ randomised สมบูรณ์ที่ประกอบด้วยสอง (ระบบการผลิตอินทรีย์ และทั่วไป) และมีการทำซ้ำ 6 ต่อการรักษา ตัวอย่างถูกเก็บรวบรวมในช่วงฤดูเก็บเกี่ยวของผลไม้แต่ละแบบสุ่ม2.4 การเรียกเก็บเงิน สุ่มตัวอย่างและการเตรียมตัวอย่างผลไม้อินทรีย์ และปกติถูกเก็บรวบรวมในลักษณะดังกล่าวสามารถทำซ้ำแตกต่างกัน 6 พื้นที่การผลิตถูกแบ่งออกเป็นผืนเล็ก 6 ในแต่ละแผน persimmons และ acerola และสตรอเบอร์รี่ที่ผลิต โดยทำการเกษตรอินทรีย์ และแบบธรรมดา 1 กิโลกรัม 2 กิโลกรัมถูกเก็บรวบรวม ทำซ้ำหกถูกส่งไปห้องปฏิบัติการในขั้นตอนเดียว ตรงกับ 12 กิโลกรัม persimmons และ 6 กิโลกรัม acerola และสตรอเบอร์รี่ต่อการรักษาหลังจากได้รับผลไม้ ทำซ้ำแต่ละถูกปฐมภูมิเป็นสองส่วนสำหรับการเตรียมตัวอย่าง ครึ่งหนึ่งใช้สำหรับการวิเคราะห์วิตามินซีในวันเดียว และดังนั้นถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้อง อีกครึ่งหนึ่งถูกเก็บไว้ในตู้เย็นประมาณ 10 ° C สำหรับการเตรียมตัวอย่างและการวิเคราะห์ของ carotenoids ที่ในวันถัดไปPersimmons, acerola และสตรอเบอร์รี่ถูกล้างใต้น้ำวิ่ง และออกส่วน-กิน (acerola เมล็ดและใบของพลับและสตรอเบอร์รี่) ผลไม้ที่สับแล้ว และ homogenised ในโปรแกรมประมวลผลอาหารอเนกประสงค์สำหรับ 5 นาทีจนกระทั่ง homogenisation สมบูรณ์ของตัวอย่าง รับประกันจึง สุ่มตัวอย่างที่น่าเชื่อถือมากขึ้น กระบวนการนี้ถูกดำเนินการ 6 ครั้งสำหรับทรีต (ทำนาอินทรีย์ และธรรมดา)2.5 การสกัดวิตามินซีและ carotenoidsวิตามินซีที่สกัดจากผลไม้ตามวิธีของ Campos et al. (2009) ตัวอย่างก่อนหน้านี้ homogenised มีน้ำหนัก (ประมาณ 1 กรัม) และเพิ่ม 15 ml สกัดโซลูชัน (3% metaphosphoric กรด กรดอะซิติก 8%, 0.3 N ซัลฟิวริก และ 1 mM EDTA) ตัวอย่างถัดไป ที่ triturated ในไมโคร homogenizer 5 นาทีและกรองโดยใช้กระดาษกรองสุญญากาศ สารกรองถูกทำให้เจือจางในน้ำ ultrapure จนปริมาตรของในบอลลูนปริมาตร 25 ml และ centrifuged ที่ 1789g สำหรับ 15 นาที Supernatant ถูกเก็บไว้ในตู้เย็นที่ประมาณ 5 ° C จนถึงเวลาวิเคราะห์ chromatographicCarotenoids ถูกสกัดดังที่ ทาง คาร็อดริเกซ Raymundo ลี ซิมป์สัน ชิชิสเตอร์ (1976), มีการปรับเปลี่ยนบางอย่าง ประมาณ 1 g persimmons ก่อนหน้านี้ homogenised และ acerola และ g 5 ของสตรอเบอร์รี่ได้ triturated กับเย็นอะซีโตน (60 มล.), เครื่องดูดฝุ่นกรองผ่านปล่อง Büchner และโอนย้ายไปเย็นปิโตรเลียมอีเทอร์ (50 มล.) การดึงข้อมูลเข้มข้นใน evaporator โรตารี่ที่อุณหภูมิ 35-37 องศาเซลเซียส ถัดไป carotenoids ถูกละลายในอีเทอร์ปิโตรเลียม 25 ml และเก็บแช่แข็ง (ที่เกี่ยวกับ −5 ° C) ในน้ำแก้วสีเหลืองอำพันจนถึงเวลาวิเคราะห์ chromatographicตัวอย่างถูกป้องกันจากแสงตลอดกระบวนการของการวิเคราะห์ทางเคมีโดยใช้เครื่องสีเหลืองอำพันแก้วและอลูมิเนียมที่ตัด2.6 การกำหนดของกรดแอสคอร์บิคและ carotenoidsของกรดแอสคอร์บิคและ carotenoids ในผลไม้ถูก analysed โดย HPLC ใช้ Shimadzu chromatography เหลวระบบ (รุ่น SCL 10AT VP) ปั๊มแรงดันสูง (รุ่น LC 10AT VP), หัวฉีดวนอัตโนมัติ (50 μl รุ่น 10AF ภาษาศาสตร์), และเครื่องตรวจจับ UV/เห็น (ไดโอดอาร์เรย์ รุ่น SPD-M10A) ระบบถูกควบคุม ด้วยซอฟต์แวร์ระบบ Multi, 6.12 ระดับ VPAA คือ analysed โดยใช้วิธีการเหมาะงานกราฟฟิกโดย Campos et al. (2009) เฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วย 1 มม. monobasic โซเดียมฟอสเฟต (NaH2PO4) และ EDTA 1 มม. มี pH ปรับปรุง 3.0 กับกรดฟอสฟอริก (H3PO4), และ isocratically eluted ในคอลัมน์ Lichospher 100 RP18 (250 × 4 mm, 5 μm เมอร์ค เยอรมนี) ในขั้นตอนการ อัตรา 1 มิลลิลิตร/นาที AA พบที่ 245 nmCarotenoids มี analysed ด้วยเงื่อนไข chromatographic อธิบายโดย Pinheiro Sant'Ana et al. (1998), ปรับเปลี่ยนบางอย่าง เฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วยเอทิลเมทานอล: acetate: acetonitrile (50:40:10) และมี isocratically eluted ที่อัตราการไหล 2 ml/นาที บนคอลัมน์ Phenomenex C18 (250 × 4.6 มม. 5 μm) ควบคู่กับ Phenomenex ODS รักษาคอลัมน์ (C18, 4 × 3 mm) Βแคโรทีนและ lycopene พบที่ 469 และ 450 nm ตามลำดับเอเอ lycopene และβ-แคโรทีนได้ระบุไว้ในตัวอย่างโดยการเปรียบเทียบ เวลาคงได้รับกับมาตรฐานเกี่ยวข้อง analysed ภายใต้เงื่อนไขเดียวกัน และโดยการเปรียบเทียบ absorption spectra ของมาตรฐานและยอดเขาที่น่าสนใจในตัวอย่างใช้เป็นไดโอดอาร์เรย์จับ2.7 การตรวจสอบทดสอบการกู้คืนของ AA, lycopene และβ-แคโรทีนถูก analysed ใน triplicate โดยการเพิ่มมาตรฐานพลับ acerola และตัวอย่างสตรอเบอร์รี่ในสัดส่วน 20 – 100% ของเนื้อหาต้นฉบับเฉลี่ยในตัวอย่างช่วงเชิงเส้นถูกกำหนด โดยการฉีด สำเนา ความเข้มข้นเพิ่มขึ้นห้าในโซลูชั่นมาตรฐาน AA, lycopene และβ-แคโรทีนภายใต้เงื่อนไข chromatographic เดียวที่ใช้สำหรับการวิเคราะห์ตัวอย่างขีดจำกัดของการตรวจสอบมีคำนวณเป็นความเข้มข้นต่ำสุดที่สามารถให้สัญญาณ chromatographic สามครั้งมากกว่าเสียงพื้นหลัง (ร็อดริเกซคา 1999) มีคำนวณจำนวนนับเป็นความเข้มข้นต่ำสุดที่สามารถให้สัญญาณ chromatographic ห้าครั้งสูงกว่าเสียงรบกวนรอบข้าง (ร็อดริเกซคา 1999)2.8 การแปลงและนับของกรด dehydroascorbicดีเอชเอมี quantified ในผลไม้ โดยกำหนดความแตกต่างระหว่างเนื้อหา AA รวม (หลังจากการแปรสภาพของดีเอชเอเอเอ) และต้นฉบับเนื้อหา AA (ก่อนการแปลงของดีเอชเอ) ดีเอชเอถูกแปลงเป็น AA ตามวิธีของ Campos et al. (2009), ดัดแปลงสำหรับผลไม้ บัฟเฟอร์ Trizma (0.5 M) ประกอบด้วย 40 มม. DTT (2.0 ml persimmons และ acerola และ 2.5 ml สำหรับสตรอเบอร์รี่) ถูกเพิ่มเข้าไป 1 ml ของสารสกัดตัวอย่าง เพิ่มบัฟเฟอร์เพื่อสกัดการเพิ่ม pH ให้มีค่าใกล้กับความเป็นกลาง (pH 5.5-6.0) ส่วนผสมที่เหลือเพื่อตอบสนองสำหรับ 10 นาทีที่อุณหภูมิห้องในมืด หลังจากเวลานี้ 0.4 M กำมะถันเพิ่ม (1.5 ml persimmons และ acerola และ 2.0 ml สำหรับสตรอเบอร์รี่) เพื่อลด pH ก่อนฉีด chromatographic อีก2.9 การคำนวณค่าวิตามินเอค่าวิตามิน A จะแสดงเป็น retinol กิจกรรมเทียบเท่า (แร่) ต่อตัวอย่าง 100 กรัมตามปัจจัยแปลงค่าวิตามินเอก่อตั้งขึ้น โดยสถาบันการแพทย์ (สถาบันการแพทย์ (IOM-สหรัฐอเมริกา), 2001) ตามคำนิยามของ IOM แร่ 1 ตรงกับ 1 μg retinol หรือ 12 μg β-แคโรทีน2.10. สถิติวิเคราะห์ผลลัพธ์ได้ analysed โดยนักเรียน t-ทดสอบ (ด้วยกองทัพ = 5%) โดยใช้โปรแกรม SAS (สถิติวิเคราะห์ระบบ) เวอร์ชัน 9.1 ได้รับใบอนุญาตมหาวิทยาลัยกลาง Viçosa, Minas Gerais บราซิล3. ผลลัพธ์ และสนทนา3.1. แยกคุณภาพของสารประกอบFig. 1 แสดง chromatograms ทั่วไปที่ได้รับสำหรับการวิเคราะห์ของ AA, lycopene และβ-แคโรทีนในผลไม้ AA และβ-แคโรทีนพบในตัวอย่างผลไม้ทั้งหมด ในขณะที่เพียงพบ lycopene ใน persimmons ดีเอชเอที่พบใน analysed ยกเว้น acerola ดีปลูกผลไม้ทั้งหมด
การแปล กรุณารอสักครู่..
วัสดุและวิธีการ
2.1 รีเอเจนต์และวัสดุอื่น ๆต่อไปนี้น้ำยา HPLC เกรดถูกนำมาใช้ [เกรดความบริสุทธิ์ของสารเคมีที่มีการรายงานว่าร้อยละ]: เมทานอล (Tedia สหรัฐอเมริกา) [99.9] acetonitrile (Vetec, บราซิล) [99.8] เอทิลอะซิเต (Mallinckrodt, สหรัฐอเมริกา) [99.9] และกรดอะซิติก (Vetec, บราซิล) [99.7] น้ำบริสุทธิ์ที่ผลิตด้วยระบบ Milli-Q® (คสหรัฐอเมริกา) สารต่อไปนี้ของชั้นประถมศึกษาปีถูกนำมาใช้ในการวิเคราะห์: dithiothreitol (DTT) (ซิกม่าดิช, เยอรมนี) [99.0] กรด metaphosphoric (เมอร์ค, เยอรมนี) [90.5-99.5] กรดกำมะถัน (Mallinckrodt สหรัฐอเมริกา) [97] บัฟเฟอร์ Trizma ( นิวเคลียร์บราซิล) [99.8] กรด Ethylenediaminetetraacetic (EDTA), กรดฟอสฟอรัส (Proquímios, บราซิล) [85.0] โซเดียมฟอสเฟต monobasic (Synth, บราซิล) [98-102] อะซีโตน (Vetec, บราซิล) [99.5] ปิโตรเลียม อีเธอร์ (อิมเพ็กซ์, บราซิล) [99.9] เอทิลอีเทอร์ (อิมเพ็กซ์, บราซิล) [99.9] โซเดียมซัลเฟตปราศจากน้ำ (อิมเพ็กซ์, บราซิล) [99] Celite (Synth, บราซิล) และแมกนีเซียมออกไซด์ (Vetec, บราซิล) [95 ] มาตรฐาน L-AA ได้มาจาก Vetec (บราซิล) [99.0] ไลโคปีนและมาตรฐานβแคโรทีนที่ถูกแยกจากกันโดยโคเปิดคอลัมน์ กลุ่มตัวอย่างที่ได้รับการกรองผ่านกระดาษกรอง ก่อนที่จะฉีดตัวอย่างและการแก้ปัญหามาตรฐานกรองผ่าน Millex HV หน่วยกรอง (ที่อยู่อาศัยพลาสติก 0.45 ไมครอนขนาดรูขุมขน; ค, บราซิล). 2.2 ผลไม้ลูกพลับ (Diospyros Kaki ลิตร var. พระราม Forte), อะเซโรล่า (Malpighia punicifolia ลิตร var. โอลิเวีย) และสตรอเบอร์รี่ (Fragaria vesca ลิตร var. Oso แกรนด์) ผลไม้ที่ได้รับจาก บริษัท เซาเปาโล Korin เกษตรธรรมชาติ Ltda . ที่ตั้งอยู่ใน Atibaia, เซาเปาโลประเทศบราซิล ผลไม้ที่ปลูกโดยการทำเกษตรอินทรีย์และการชุมนุมในพื้นที่ทางภูมิศาสตร์เดียวกัน (Atibaia, เซาเปาลู, บราซิล) ภายใต้สภาพภูมิอากาศเดียวกันและถูกเก็บรวบรวมแบบสุ่มในช่วงฤดูเก็บเกี่ยวของผลไม้แต่ละตลอดปี 2007 ผลไม้อินทรีย์มีใบรับรองที่ออกโดย Motika ดะรับรอง (CMO) บริการ ผลไม้ที่เก็บเกี่ยวในระยะสุกบางส่วน (ขั้นตอนของการค้า) และเก็บไว้อย่างถูกต้องในกล่องกระดาษแข็งป้องกันการช็อต ผลไม้ที่ถูกส่งทางบกและมาถึงที่ห้องปฏิบัติการของวิตามินวิเคราะห์กรมโภชนาการมหาวิทยาลัยสหพันธ์Viçosa, Minas Gerais, บราซิล, ภายใน 48 ชั่วโมงหลังการเก็บเกี่ยว. 2.3 การออกแบบการทดลองออกแบบสุ่มสมบูรณ์ประกอบด้วยสองการรักษา (อินทรีย์และระบบการผลิตแบบเดิม) และหกซ้ำต่อการรักษาถูกนำมาใช้ กลุ่มตัวอย่างที่สุ่มเก็บรวบรวมในช่วงฤดูเก็บเกี่ยวของผลไม้แต่ละ. 2.4 การเก็บตัวอย่างและการจัดทำตัวอย่างผลไม้อินทรีย์และถูกเก็บไว้ในลักษณะที่จะได้รับหกซ้ำที่แตกต่างกัน พื้นที่การผลิตที่ได้รับการแบ่งออกเป็นหกแปลงขนาดเล็ก ในแต่ละแปลง 2 กิโลกรัมของลูกพลับและ 1 กิโลกรัมของอะเซโรล่าและสตรอเบอร์รี่ที่ผลิตโดยการทำเกษตรอินทรีย์และการชุมนุมที่ถูกเก็บรวบรวม หกซ้ำถูกส่งไปยังห้องปฏิบัติการในขั้นตอนเดียวที่สอดคล้องกับ 12 กิโลกรัมของลูกพลับและ 6 กิโลกรัมของอะเซโรล่าและสตรอเบอร์รี่ต่อการรักษา. หลังจากที่ได้รับผลไม้ซ้ำแต่ละคนถูกแบ่งออกเป็นสองส่วนในการจัดทำตัวอย่าง ครึ่งหนึ่งถูกนำมาใช้สำหรับการวิเคราะห์ของวิตามินซีในวันเดียวกันและถูกเก็บไว้ดังนั้นที่อุณหภูมิห้อง อีกครึ่งหนึ่งได้รับการจัดเก็บไว้ในตู้เย็นประมาณ 10 องศาเซลเซียสเป็นเวลาเตรียมตัวและการวิเคราะห์ของนอยด์ในวันถัดไป. พลับ, อะเซโรล่าและสตรอเบอร์รี่ถูกล้างภายใต้การใช้น้ำและชิ้นส่วนที่ไม่กิน (เมล็ดอะเซโรล่าและใบของลูกพลับและสตรอเบอร์รี่ ) ถูกถอดออก ผลไม้ที่ถูกสับแล้วและ homogenised ในการประมวลผลอาหารอเนกประสงค์สำหรับ 5 นาทีจน homogenisation สมบูรณ์ของตัวอย่างจึงรับประกันการสุ่มตัวอย่างน่าเชื่อถือมากขึ้น ขั้นตอนนี้ได้ดำเนินการหกครั้งในการรักษาแต่ละ (อินทรีย์และการเกษตรทั่วไป). 2.5 การสกัดวิตามินซีและนอยด์วิตามินซีสกัดจากผลไม้ตามวิธีการของ Campos et al, (2009) กลุ่มตัวอย่างก่อนหน้านี้ได้รับการ homogenised ชั่งน้ำหนัก (ประมาณ 1 กรัม) และ 15 มิลลิลิตรสกัด (3% กรด metaphosphoric, 8% กรดอะซิติก 0.3 ไม่มีกรดกำมะถันและ 1 มิลลิ EDTA) ถูกเพิ่มเข้ามา ถัดไปตัวอย่างถูก triturated ในไมโคร homogenizer เวลา 5 นาทีและสูญญากาศกรองผ่านกระดาษกรอง กรองถูกเจือจางในน้ำบริสุทธิ์จนกว่าปริมาณ 25 มล. ในบอลลูนปริมาณและหมุนเหวี่ยงที่ 1789g เป็นเวลา 15 นาที สารละลายที่ถูกเก็บไว้ในตู้เย็นประมาณ 5 องศาเซลเซียสจนกว่าจะถึงเวลาสำหรับการวิเคราะห์สารได้. Carotenoids สกัดตามที่อธิบาย Rodriguez-Amaya, Raymundo ลีซิมป์สันและชิเชสเตอร์ (1976) ด้วยการปรับเปลี่ยนบางอย่าง ประมาณ 1 กรัมพลับ homogenised ก่อนหน้านี้และอะเซโรล่าและ 5 กรัมสตรอเบอร์รี่ที่ถูก triturated ด้วยอะซิโตนเย็น (60 มล.) สูญญากาศกรองผ่านช่องทางBüchnerและโอนไปยังปิโตรเลียมอีเทอร์เย็น (50 มล.) สารสกัดเข้มข้นในเครื่องระเหยแบบหมุนที่อุณหภูมิ 35-37 องศาเซลเซียส ถัดไปนอยด์ที่ถูกกลืนหายไปใน 25 มล. ปิโตรเลียมอีเทอร์และจัดเก็บแช่แข็ง (ประมาณ -5 ° C) ในขวดแก้วสีเหลืองอำพันจนกว่าจะถึงเวลาสำหรับการวิเคราะห์สารได้. กลุ่มตัวอย่างที่ได้รับการปกป้องจากแสงตลอดทั้งกระบวนการของการวิเคราะห์ทางเคมีโดยใช้เครื่องแก้วและสีเหลืองอำพัน ตัดอลูมิเนียม. 2.6 ความมุ่งมั่นของวิตามินซีและ carotenoids การปรากฏตัวของวิตามินซีและนอยด์ในผลไม้ได้รับการวิเคราะห์โดยวิธี HPLC โดยใช้ระบบของเหลว chromatography Shimadzu (รุ่น SCL 10AT VP) การติดตั้งเครื่องสูบน้ำแรงดันสูง (รุ่น LC-10AT VP) หัวฉีดวงอัตโนมัติ ( 50 ไมโครลิตร; รูปแบบ SIL-10AF) และยูวี / เครื่องตรวจจับที่มองเห็น (อาร์เรย์ไดโอด; รุ่น SPD-M10A) ระบบจะถูกควบคุมด้วยระบบซอฟแวร์หลายรุ่น VP 6.12. เอเอได้รับการวิเคราะห์โดยใช้วิธีการเพิ่มประสิทธิภาพโดย Campos, et al (2009) เฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วย 1 มิลลิโซเดียมฟอสเฟต monobasic (NaH2PO4) และ EDTA 1 มิลลิมีค่า pH ปรับ 3.0 กับกรดฟอสฟ (H3PO4) และถูกชะ isocratically บน Lichospher 100 คอลัมน์ RP18 (250 × 4 มิลลิเมตร 5 ไมครอน; เมอร์ค, เยอรมนี) ที่อัตราการไหล 1 มล. / นาที AA ถูกตรวจพบที่ 245 นาโนเมตร. Carotenoids ถูกวิเคราะห์โดยใช้เงื่อนไขโครมาอธิบายโดย Pinheiro-Sant'Ana et al, (1998) ด้วยการปรับเปลี่ยนบางอย่าง เฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วยเมทานอล: เอทิลอะซิเต: acetonitrile (50:40:10) และได้รับการชะ isocratically ที่อัตราการไหล 2 มล. / นาทีในคอลัมน์ Phenomenex C18 (250 × 4.6 มม 5 ไมครอน) คู่กับ ODS Phenomenex คอลัมน์ยาม (C18, 4 × 3 มิลลิเมตร) เบต้าแคโรทีนและไลโคปีนที่ตรวจพบที่ 450 และ 469 นาโนเมตรตามลำดับ. AA, ไลโคปีนและβแคโรทีนที่ถูกระบุในตัวอย่างโดยการเปรียบเทียบเวลาการเก็บรักษาได้กับบรรดาของมาตรฐานที่เกี่ยวข้องวิเคราะห์ภายใต้เงื่อนไขเดียวกันและโดยการเปรียบเทียบ สเปกตรัมการดูดซึมของมาตรฐานการและยอดที่น่าสนใจในกลุ่มตัวอย่างโดยใช้เครื่องตรวจจับอาร์เรย์ไดโอด. 2.7 การทดสอบการตรวจสอบการกู้คืนของ AA, ไลโคปีนและแคโรทีนβวิเคราะห์ในเพิ่มขึ้นสามเท่าโดยนอกเหนือจากมาตรฐานเพื่อลูกพลับ, อะเซโรล่าและตัวอย่างสตรอเบอร์รี่ที่สัดส่วนของ 20-100% ของเนื้อหาต้นฉบับเฉลี่ยในตัวอย่างที่. ช่วงเชิงเส้น ถูกกำหนดโดยการฉีดในที่ซ้ำกันในห้าของความเข้มข้นที่เพิ่มขึ้นของการแก้ปัญหามาตรฐานของเอเอไลโคปีนและβแคโรทีนภายใต้เงื่อนไขที่โครมาเช่นเดียวกับที่ใช้ในการวิเคราะห์ตัวอย่าง. ขีด จำกัด ของการตรวจสอบที่คำนวณได้เป็นความเข้มข้นต่ำสุดที่สามารถให้การให้ สัญญาณโครมาสามครั้งสูงกว่าเสียงพื้นหลัง (Rodriguez-Amaya, 1999) ขีด จำกัด ของปริมาณที่คำนวณได้เป็นความเข้มข้นต่ำสุดที่สามารถให้สัญญาณโครมาห้าครั้งสูงกว่าเสียงพื้นหลัง (Rodriguez-Amaya, 1999). 2.8 การแปลงและการหาปริมาณของกรด dehydroascorbic DHA ถูกวัดในผลไม้โดยการกำหนดความแตกต่างระหว่างเนื้อหา AA รวม (หลังจากการแปลงของดีเอชเอเข้า AA) และเนื้อหา AA เดิม (ก่อนการแปลงของดีเอชเอ) ดีเอชเอถูกดัดแปลงเป็น AA ตามวิธีการของ Campos et al, (2009) ดัดแปลงสำหรับผลไม้ บัฟเฟอร์ Trizma (0.5 M) ที่มี 40 มิลลิ DTT (2.0 มล. สำหรับลูกพลับและอะเซโรล่าและ 2.5 มล. สำหรับสตรอเบอร์รี่) ถูกบันทึกอยู่ใน 1 มิลลิลิตรของสารสกัดจากตัวอย่าง นอกเหนือจากการบัฟเฟอร์สารสกัดที่เพิ่มขึ้นค่า pH เป็นค่าที่ใกล้เคียงกับความเป็นกลาง (pH 5.5-6.0) ส่วนผสมที่ถูกทิ้งไว้ในการตอบสนองเป็นเวลา 10 นาทีที่อุณหภูมิห้องในที่มืด หลังจากช่วงเวลานี้ 0.4 M H2SO4 ถูกบันทึก (1.5 มล. สำหรับลูกพลับและอะเซโรล่าและ 2.0 มล. สำหรับสตรอเบอร์รี่) เพื่อลดค่า pH อีกครั้งก่อนที่จะฉีดสารได้. 2.9 การคำนวณค่าวิตามินเอวิตามินค่าจะแสดงเป็นเทียบเท่ากิจกรรมเรติน (RAE) ต่อ 100 กรัมตัวอย่างตามปัจจัยการแปลงสำหรับวิตามินค่าที่จัดตั้งขึ้นโดยสถาบันการแพทย์ (สถาบันการแพทย์ (IOM-US), 2001) ตามคำนิยาม IOM 1 RAE สอดคล้องกับ 1 ไมโครกรัมหรือเรติน 12 ไมโครกรัมβแคโรทีน. 2.10 การวิเคราะห์ทางสถิติผลการวิเคราะห์โดย t-test นักเรียน (α = 5%) โดยใช้เอสเอ (การวิเคราะห์ทางสถิติ System) โปรแกรมเวอร์ชั่น 9.1 ได้รับอนุญาตให้มหาวิทยาลัยกลางแห่งViçosa, Minas Gerais, บราซิล. 3 และการอภิปรายผล3.1 แยกคุณภาพของสารรูป 1 แสดง chromatograms ทั่วไปที่ได้รับการวิเคราะห์ AA, ไลโคปีนและβแคโรทีนในผลไม้ AA และβแคโรทีนที่พบในตัวอย่างผลไม้ทั้งหมดในขณะที่ไลโคปีนที่ตรวจพบเฉพาะในลูกพลับ ดีเอชเอถูกตรวจพบในผลไม้วิเคราะห์ยกเว้นสำหรับปลูกตามอัตภาพอะเซโรล่า
2.1 รีเอเจนต์และวัสดุอื่น ๆต่อไปนี้น้ำยา HPLC เกรดถูกนำมาใช้ [เกรดความบริสุทธิ์ของสารเคมีที่มีการรายงานว่าร้อยละ]: เมทานอล (Tedia สหรัฐอเมริกา) [99.9] acetonitrile (Vetec, บราซิล) [99.8] เอทิลอะซิเต (Mallinckrodt, สหรัฐอเมริกา) [99.9] และกรดอะซิติก (Vetec, บราซิล) [99.7] น้ำบริสุทธิ์ที่ผลิตด้วยระบบ Milli-Q® (คสหรัฐอเมริกา) สารต่อไปนี้ของชั้นประถมศึกษาปีถูกนำมาใช้ในการวิเคราะห์: dithiothreitol (DTT) (ซิกม่าดิช, เยอรมนี) [99.0] กรด metaphosphoric (เมอร์ค, เยอรมนี) [90.5-99.5] กรดกำมะถัน (Mallinckrodt สหรัฐอเมริกา) [97] บัฟเฟอร์ Trizma ( นิวเคลียร์บราซิล) [99.8] กรด Ethylenediaminetetraacetic (EDTA), กรดฟอสฟอรัส (Proquímios, บราซิล) [85.0] โซเดียมฟอสเฟต monobasic (Synth, บราซิล) [98-102] อะซีโตน (Vetec, บราซิล) [99.5] ปิโตรเลียม อีเธอร์ (อิมเพ็กซ์, บราซิล) [99.9] เอทิลอีเทอร์ (อิมเพ็กซ์, บราซิล) [99.9] โซเดียมซัลเฟตปราศจากน้ำ (อิมเพ็กซ์, บราซิล) [99] Celite (Synth, บราซิล) และแมกนีเซียมออกไซด์ (Vetec, บราซิล) [95 ] มาตรฐาน L-AA ได้มาจาก Vetec (บราซิล) [99.0] ไลโคปีนและมาตรฐานβแคโรทีนที่ถูกแยกจากกันโดยโคเปิดคอลัมน์ กลุ่มตัวอย่างที่ได้รับการกรองผ่านกระดาษกรอง ก่อนที่จะฉีดตัวอย่างและการแก้ปัญหามาตรฐานกรองผ่าน Millex HV หน่วยกรอง (ที่อยู่อาศัยพลาสติก 0.45 ไมครอนขนาดรูขุมขน; ค, บราซิล). 2.2 ผลไม้ลูกพลับ (Diospyros Kaki ลิตร var. พระราม Forte), อะเซโรล่า (Malpighia punicifolia ลิตร var. โอลิเวีย) และสตรอเบอร์รี่ (Fragaria vesca ลิตร var. Oso แกรนด์) ผลไม้ที่ได้รับจาก บริษัท เซาเปาโล Korin เกษตรธรรมชาติ Ltda . ที่ตั้งอยู่ใน Atibaia, เซาเปาโลประเทศบราซิล ผลไม้ที่ปลูกโดยการทำเกษตรอินทรีย์และการชุมนุมในพื้นที่ทางภูมิศาสตร์เดียวกัน (Atibaia, เซาเปาลู, บราซิล) ภายใต้สภาพภูมิอากาศเดียวกันและถูกเก็บรวบรวมแบบสุ่มในช่วงฤดูเก็บเกี่ยวของผลไม้แต่ละตลอดปี 2007 ผลไม้อินทรีย์มีใบรับรองที่ออกโดย Motika ดะรับรอง (CMO) บริการ ผลไม้ที่เก็บเกี่ยวในระยะสุกบางส่วน (ขั้นตอนของการค้า) และเก็บไว้อย่างถูกต้องในกล่องกระดาษแข็งป้องกันการช็อต ผลไม้ที่ถูกส่งทางบกและมาถึงที่ห้องปฏิบัติการของวิตามินวิเคราะห์กรมโภชนาการมหาวิทยาลัยสหพันธ์Viçosa, Minas Gerais, บราซิล, ภายใน 48 ชั่วโมงหลังการเก็บเกี่ยว. 2.3 การออกแบบการทดลองออกแบบสุ่มสมบูรณ์ประกอบด้วยสองการรักษา (อินทรีย์และระบบการผลิตแบบเดิม) และหกซ้ำต่อการรักษาถูกนำมาใช้ กลุ่มตัวอย่างที่สุ่มเก็บรวบรวมในช่วงฤดูเก็บเกี่ยวของผลไม้แต่ละ. 2.4 การเก็บตัวอย่างและการจัดทำตัวอย่างผลไม้อินทรีย์และถูกเก็บไว้ในลักษณะที่จะได้รับหกซ้ำที่แตกต่างกัน พื้นที่การผลิตที่ได้รับการแบ่งออกเป็นหกแปลงขนาดเล็ก ในแต่ละแปลง 2 กิโลกรัมของลูกพลับและ 1 กิโลกรัมของอะเซโรล่าและสตรอเบอร์รี่ที่ผลิตโดยการทำเกษตรอินทรีย์และการชุมนุมที่ถูกเก็บรวบรวม หกซ้ำถูกส่งไปยังห้องปฏิบัติการในขั้นตอนเดียวที่สอดคล้องกับ 12 กิโลกรัมของลูกพลับและ 6 กิโลกรัมของอะเซโรล่าและสตรอเบอร์รี่ต่อการรักษา. หลังจากที่ได้รับผลไม้ซ้ำแต่ละคนถูกแบ่งออกเป็นสองส่วนในการจัดทำตัวอย่าง ครึ่งหนึ่งถูกนำมาใช้สำหรับการวิเคราะห์ของวิตามินซีในวันเดียวกันและถูกเก็บไว้ดังนั้นที่อุณหภูมิห้อง อีกครึ่งหนึ่งได้รับการจัดเก็บไว้ในตู้เย็นประมาณ 10 องศาเซลเซียสเป็นเวลาเตรียมตัวและการวิเคราะห์ของนอยด์ในวันถัดไป. พลับ, อะเซโรล่าและสตรอเบอร์รี่ถูกล้างภายใต้การใช้น้ำและชิ้นส่วนที่ไม่กิน (เมล็ดอะเซโรล่าและใบของลูกพลับและสตรอเบอร์รี่ ) ถูกถอดออก ผลไม้ที่ถูกสับแล้วและ homogenised ในการประมวลผลอาหารอเนกประสงค์สำหรับ 5 นาทีจน homogenisation สมบูรณ์ของตัวอย่างจึงรับประกันการสุ่มตัวอย่างน่าเชื่อถือมากขึ้น ขั้นตอนนี้ได้ดำเนินการหกครั้งในการรักษาแต่ละ (อินทรีย์และการเกษตรทั่วไป). 2.5 การสกัดวิตามินซีและนอยด์วิตามินซีสกัดจากผลไม้ตามวิธีการของ Campos et al, (2009) กลุ่มตัวอย่างก่อนหน้านี้ได้รับการ homogenised ชั่งน้ำหนัก (ประมาณ 1 กรัม) และ 15 มิลลิลิตรสกัด (3% กรด metaphosphoric, 8% กรดอะซิติก 0.3 ไม่มีกรดกำมะถันและ 1 มิลลิ EDTA) ถูกเพิ่มเข้ามา ถัดไปตัวอย่างถูก triturated ในไมโคร homogenizer เวลา 5 นาทีและสูญญากาศกรองผ่านกระดาษกรอง กรองถูกเจือจางในน้ำบริสุทธิ์จนกว่าปริมาณ 25 มล. ในบอลลูนปริมาณและหมุนเหวี่ยงที่ 1789g เป็นเวลา 15 นาที สารละลายที่ถูกเก็บไว้ในตู้เย็นประมาณ 5 องศาเซลเซียสจนกว่าจะถึงเวลาสำหรับการวิเคราะห์สารได้. Carotenoids สกัดตามที่อธิบาย Rodriguez-Amaya, Raymundo ลีซิมป์สันและชิเชสเตอร์ (1976) ด้วยการปรับเปลี่ยนบางอย่าง ประมาณ 1 กรัมพลับ homogenised ก่อนหน้านี้และอะเซโรล่าและ 5 กรัมสตรอเบอร์รี่ที่ถูก triturated ด้วยอะซิโตนเย็น (60 มล.) สูญญากาศกรองผ่านช่องทางBüchnerและโอนไปยังปิโตรเลียมอีเทอร์เย็น (50 มล.) สารสกัดเข้มข้นในเครื่องระเหยแบบหมุนที่อุณหภูมิ 35-37 องศาเซลเซียส ถัดไปนอยด์ที่ถูกกลืนหายไปใน 25 มล. ปิโตรเลียมอีเทอร์และจัดเก็บแช่แข็ง (ประมาณ -5 ° C) ในขวดแก้วสีเหลืองอำพันจนกว่าจะถึงเวลาสำหรับการวิเคราะห์สารได้. กลุ่มตัวอย่างที่ได้รับการปกป้องจากแสงตลอดทั้งกระบวนการของการวิเคราะห์ทางเคมีโดยใช้เครื่องแก้วและสีเหลืองอำพัน ตัดอลูมิเนียม. 2.6 ความมุ่งมั่นของวิตามินซีและ carotenoids การปรากฏตัวของวิตามินซีและนอยด์ในผลไม้ได้รับการวิเคราะห์โดยวิธี HPLC โดยใช้ระบบของเหลว chromatography Shimadzu (รุ่น SCL 10AT VP) การติดตั้งเครื่องสูบน้ำแรงดันสูง (รุ่น LC-10AT VP) หัวฉีดวงอัตโนมัติ ( 50 ไมโครลิตร; รูปแบบ SIL-10AF) และยูวี / เครื่องตรวจจับที่มองเห็น (อาร์เรย์ไดโอด; รุ่น SPD-M10A) ระบบจะถูกควบคุมด้วยระบบซอฟแวร์หลายรุ่น VP 6.12. เอเอได้รับการวิเคราะห์โดยใช้วิธีการเพิ่มประสิทธิภาพโดย Campos, et al (2009) เฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วย 1 มิลลิโซเดียมฟอสเฟต monobasic (NaH2PO4) และ EDTA 1 มิลลิมีค่า pH ปรับ 3.0 กับกรดฟอสฟ (H3PO4) และถูกชะ isocratically บน Lichospher 100 คอลัมน์ RP18 (250 × 4 มิลลิเมตร 5 ไมครอน; เมอร์ค, เยอรมนี) ที่อัตราการไหล 1 มล. / นาที AA ถูกตรวจพบที่ 245 นาโนเมตร. Carotenoids ถูกวิเคราะห์โดยใช้เงื่อนไขโครมาอธิบายโดย Pinheiro-Sant'Ana et al, (1998) ด้วยการปรับเปลี่ยนบางอย่าง เฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วยเมทานอล: เอทิลอะซิเต: acetonitrile (50:40:10) และได้รับการชะ isocratically ที่อัตราการไหล 2 มล. / นาทีในคอลัมน์ Phenomenex C18 (250 × 4.6 มม 5 ไมครอน) คู่กับ ODS Phenomenex คอลัมน์ยาม (C18, 4 × 3 มิลลิเมตร) เบต้าแคโรทีนและไลโคปีนที่ตรวจพบที่ 450 และ 469 นาโนเมตรตามลำดับ. AA, ไลโคปีนและβแคโรทีนที่ถูกระบุในตัวอย่างโดยการเปรียบเทียบเวลาการเก็บรักษาได้กับบรรดาของมาตรฐานที่เกี่ยวข้องวิเคราะห์ภายใต้เงื่อนไขเดียวกันและโดยการเปรียบเทียบ สเปกตรัมการดูดซึมของมาตรฐานการและยอดที่น่าสนใจในกลุ่มตัวอย่างโดยใช้เครื่องตรวจจับอาร์เรย์ไดโอด. 2.7 การทดสอบการตรวจสอบการกู้คืนของ AA, ไลโคปีนและแคโรทีนβวิเคราะห์ในเพิ่มขึ้นสามเท่าโดยนอกเหนือจากมาตรฐานเพื่อลูกพลับ, อะเซโรล่าและตัวอย่างสตรอเบอร์รี่ที่สัดส่วนของ 20-100% ของเนื้อหาต้นฉบับเฉลี่ยในตัวอย่างที่. ช่วงเชิงเส้น ถูกกำหนดโดยการฉีดในที่ซ้ำกันในห้าของความเข้มข้นที่เพิ่มขึ้นของการแก้ปัญหามาตรฐานของเอเอไลโคปีนและβแคโรทีนภายใต้เงื่อนไขที่โครมาเช่นเดียวกับที่ใช้ในการวิเคราะห์ตัวอย่าง. ขีด จำกัด ของการตรวจสอบที่คำนวณได้เป็นความเข้มข้นต่ำสุดที่สามารถให้การให้ สัญญาณโครมาสามครั้งสูงกว่าเสียงพื้นหลัง (Rodriguez-Amaya, 1999) ขีด จำกัด ของปริมาณที่คำนวณได้เป็นความเข้มข้นต่ำสุดที่สามารถให้สัญญาณโครมาห้าครั้งสูงกว่าเสียงพื้นหลัง (Rodriguez-Amaya, 1999). 2.8 การแปลงและการหาปริมาณของกรด dehydroascorbic DHA ถูกวัดในผลไม้โดยการกำหนดความแตกต่างระหว่างเนื้อหา AA รวม (หลังจากการแปลงของดีเอชเอเข้า AA) และเนื้อหา AA เดิม (ก่อนการแปลงของดีเอชเอ) ดีเอชเอถูกดัดแปลงเป็น AA ตามวิธีการของ Campos et al, (2009) ดัดแปลงสำหรับผลไม้ บัฟเฟอร์ Trizma (0.5 M) ที่มี 40 มิลลิ DTT (2.0 มล. สำหรับลูกพลับและอะเซโรล่าและ 2.5 มล. สำหรับสตรอเบอร์รี่) ถูกบันทึกอยู่ใน 1 มิลลิลิตรของสารสกัดจากตัวอย่าง นอกเหนือจากการบัฟเฟอร์สารสกัดที่เพิ่มขึ้นค่า pH เป็นค่าที่ใกล้เคียงกับความเป็นกลาง (pH 5.5-6.0) ส่วนผสมที่ถูกทิ้งไว้ในการตอบสนองเป็นเวลา 10 นาทีที่อุณหภูมิห้องในที่มืด หลังจากช่วงเวลานี้ 0.4 M H2SO4 ถูกบันทึก (1.5 มล. สำหรับลูกพลับและอะเซโรล่าและ 2.0 มล. สำหรับสตรอเบอร์รี่) เพื่อลดค่า pH อีกครั้งก่อนที่จะฉีดสารได้. 2.9 การคำนวณค่าวิตามินเอวิตามินค่าจะแสดงเป็นเทียบเท่ากิจกรรมเรติน (RAE) ต่อ 100 กรัมตัวอย่างตามปัจจัยการแปลงสำหรับวิตามินค่าที่จัดตั้งขึ้นโดยสถาบันการแพทย์ (สถาบันการแพทย์ (IOM-US), 2001) ตามคำนิยาม IOM 1 RAE สอดคล้องกับ 1 ไมโครกรัมหรือเรติน 12 ไมโครกรัมβแคโรทีน. 2.10 การวิเคราะห์ทางสถิติผลการวิเคราะห์โดย t-test นักเรียน (α = 5%) โดยใช้เอสเอ (การวิเคราะห์ทางสถิติ System) โปรแกรมเวอร์ชั่น 9.1 ได้รับอนุญาตให้มหาวิทยาลัยกลางแห่งViçosa, Minas Gerais, บราซิล. 3 และการอภิปรายผล3.1 แยกคุณภาพของสารรูป 1 แสดง chromatograms ทั่วไปที่ได้รับการวิเคราะห์ AA, ไลโคปีนและβแคโรทีนในผลไม้ AA และβแคโรทีนที่พบในตัวอย่างผลไม้ทั้งหมดในขณะที่ไลโคปีนที่ตรวจพบเฉพาะในลูกพลับ ดีเอชเอถูกตรวจพบในผลไม้วิเคราะห์ยกเว้นสำหรับปลูกตามอัตภาพอะเซโรล่า
การแปล กรุณารอสักครู่..
วัสดุและวิธีการ
2.1 . สารเคมีและวัสดุ
ต่อไปนี้ HPLC เกรดที่สามารถใช้ [ ความบริสุทธิ์เกรดของสารเคมีมีรายงานเป็นเปอร์เซ็นต์ ] : เมทานอล ( tedia สหรัฐอเมริกา ) [ บอก ] , ไน ( vetec , บราซิล 99.8% ) [ ] , เอทิลอะซิเตท ( Mallinckrodt , USA ) [ บริสุทธิ์ ] และกรดอะซิติก ( vetec , บราซิล ) [ 99.7 ] น้ำบริสุทธิ์มากถูกผลิตด้วยระบบ® milli-q ( มิลลิ , USA )สารเคมีเกรดวิเคราะห์ต่อไปนี้ใช้บัตรแข็ง ( DTT ) ( ซิกม่า Aldrich , เยอรมัน ) [ 99.0 ] , เมตทาฟอสฟอริกแอซิด ( Merck , เยอรมัน ) [ 90.5 – 99.5 ] , กรดซัลฟูริค ( Mallinckrodt , USA ) [ 97 ] trizma บัฟเฟอร์ ( นิวเคลียร์ , บราซิล ) [ 99.8% ] บอน acid ( EDTA ) , กรดฟอสฟอริก ( proqu í mios , บราซิล ) [ 85.0 ] , โซเดียมฟอสเฟต monobasic ( SYNTH , บราซิล ) [ 98 ] ( vetec – 102 , อะซิโตน ,บราซิล ) [ ระบบ ] , ปิโตรเลียมอีเทอร์ ( อิมเพ็กซ์ , บราซิล ) [ บอก ] เอทิลอีเทอร์ ( อิมเพ็กซ์ , บราซิล ) [ บอก ] , แอนไฮดรัสโซเดียมซัลเฟต ( อิมเพ็กซ์ , บราซิล ) [ 99 ] สมาคม ( SYNTH , บราซิล ) , และแมกนีเซียมออกไซด์ ( vetec , บราซิล ) [ 95 ] มาตรฐาน l-aa ได้มาจาก vetec ( บราซิล ) [ 99.0 ] บีตา - แคโรทีนและไลโคปีนมาตรฐานและถูกแยกด้วยคอลัมน์โครมาโตกราฟฟีเปิด ตัวอย่างที่ถูกกรองผ่านกระดาษกรองก่อนฉีดตัวอย่างและโซลูชั่นมาตรฐานถูกกรองผ่านตัวกรอง ( Polyethylene millex HV หน่วยที่อยู่อาศัย , 0.45 - μ M ขนาดรูพรุน ; มิลลิ , บราซิล ) .
. . ผลไม้
ลูกพลับ ( diospyros สีกากี L . var . พระราม ฟอร์เต้ ) Acerola ( โทนี แบรกซ์ตัน punicifolia L . var . โอลิ ) และสตรอเบอร์รี่ ( fragaria vesca L . var .โอโซ Grande ) ผลที่ได้จากเซาเปาลู บริษัท เค óริน agricultura ธรรมชาติ Ltda . , ตั้งอยู่ใน Atibaia , เซาเปาลู , บราซิล ผลไม้ที่ปลูกโดยใช้อินทรีย์และเกษตรในพื้นที่ทางภูมิศาสตร์เดียวกัน ( Atibaia , เซาเปาลู , บราซิล ) ภายใต้เดียวกันสภาพภูมิอากาศและจำนวนสุ่มในช่วงฤดูกาลเก็บเกี่ยวของผลไม้แต่ละตลอด 2007ผลไม้อินทรีย์มีใบรับรองที่ออกโดย motika โอคาดะ รับรอง ( CMO ) บริการ ผลอายุเก็บเกี่ยวในระยะสุกบางส่วน ( เวทีของ commercialisation ) และถูกเก็บไว้ในกล่องกระดาษแข็งป้องกันช็อก ผลไม้ขนส่งทางบกและมาถึงที่ห้องปฏิบัติการของการวิเคราะห์วิตามิน ภาควิชาโภชนาการ มหาวิทยาลัยสหพันธ์ 6 5 Osa , Minas Gerais ,บราซิล ภายใน 48 ชั่วโมงหลังการเก็บเกี่ยว
2.3
โดยออกแบบการทดลองแบบสุ่ม ประกอบด้วย 2 ชนิด ( อินทรีย์และการผลิตระบบ ) และหก repetitions ต่อการใช้ โดยเก็บตัวอย่างแบบสุ่มในช่วงฤดูกาลเก็บเกี่ยวของผลไม้แต่ละ .
2.4 . การเก็บตัวอย่างและการเตรียมตัวอย่าง
ผลไม้อินทรีย์และถูกเก็บในลักษณะที่จะได้รับหก repetitions ที่แตกต่างกัน พื้นที่การผลิตที่ถูกแบ่งออกเป็นหกแปลงเล็ก ในแต่ละล็อต 2 กก. ลูกพลับและ 1 กิโลกรัม Acerola และสตรอเบอร์รี่ที่ฟาร์มอินทรีย์และการเก็บรวบรวม . หก repetitions ถูกส่งไปปฏิบัติการในขั้นตอนเดียวสอดคล้องกับ 12 กิโลกรัม ลูกพลับและ 6 กก. Acerola และสตรอเบอร์รี่ต่อรักษา
หลังจากได้รับผลไม้แต่ละซ้ำถูกแบ่งออกเป็น 2 ส่วน เพื่อการเตรียมตัวอย่าง ครึ่งหนึ่งถูกใช้สำหรับการวิเคราะห์ของ วิตามิน ซี ในวันเดียวกัน และจึง เก็บไว้ที่อุณหภูมิห้องครึ่งอื่น ๆที่เก็บไว้ในตู้เย็นประมาณ 10 องศา C สำหรับการเตรียมตัวอย่างและการวิเคราะห์ของ carotenoids ในวันถัดไป
ลูกพลับ สตรอเบอรี่ Acerola และล้างภายใต้น้ำไหลกับไม่กิน ส่วนเมล็ดและใบของลูกพลับ Acerola และสตรอเบอร์รี่ ) ออกผลไม้แล้วสับและ homogenised ในการประมวลผลอาหารอเนกประสงค์สำหรับ 5 นาทีจนกว่าโฮโมจีไนเซชั่นที่สมบูรณ์ของตัวอย่าง ดังนั้นรับประกันเชื่อถือได้มากกว่าคน ขั้นตอนนี้คือการรักษาแต่ละครั้ง ( อินทรีย์และเกษตรแบบดั้งเดิม ) .
2.5 การสกัดวิตามินซีและแคโรทีนอยด์
วิตามินซีสกัดจากผลไม้ตามวิธีการของ Campos et al .
2.1 . สารเคมีและวัสดุ
ต่อไปนี้ HPLC เกรดที่สามารถใช้ [ ความบริสุทธิ์เกรดของสารเคมีมีรายงานเป็นเปอร์เซ็นต์ ] : เมทานอล ( tedia สหรัฐอเมริกา ) [ บอก ] , ไน ( vetec , บราซิล 99.8% ) [ ] , เอทิลอะซิเตท ( Mallinckrodt , USA ) [ บริสุทธิ์ ] และกรดอะซิติก ( vetec , บราซิล ) [ 99.7 ] น้ำบริสุทธิ์มากถูกผลิตด้วยระบบ® milli-q ( มิลลิ , USA )สารเคมีเกรดวิเคราะห์ต่อไปนี้ใช้บัตรแข็ง ( DTT ) ( ซิกม่า Aldrich , เยอรมัน ) [ 99.0 ] , เมตทาฟอสฟอริกแอซิด ( Merck , เยอรมัน ) [ 90.5 – 99.5 ] , กรดซัลฟูริค ( Mallinckrodt , USA ) [ 97 ] trizma บัฟเฟอร์ ( นิวเคลียร์ , บราซิล ) [ 99.8% ] บอน acid ( EDTA ) , กรดฟอสฟอริก ( proqu í mios , บราซิล ) [ 85.0 ] , โซเดียมฟอสเฟต monobasic ( SYNTH , บราซิล ) [ 98 ] ( vetec – 102 , อะซิโตน ,บราซิล ) [ ระบบ ] , ปิโตรเลียมอีเทอร์ ( อิมเพ็กซ์ , บราซิล ) [ บอก ] เอทิลอีเทอร์ ( อิมเพ็กซ์ , บราซิล ) [ บอก ] , แอนไฮดรัสโซเดียมซัลเฟต ( อิมเพ็กซ์ , บราซิล ) [ 99 ] สมาคม ( SYNTH , บราซิล ) , และแมกนีเซียมออกไซด์ ( vetec , บราซิล ) [ 95 ] มาตรฐาน l-aa ได้มาจาก vetec ( บราซิล ) [ 99.0 ] บีตา - แคโรทีนและไลโคปีนมาตรฐานและถูกแยกด้วยคอลัมน์โครมาโตกราฟฟีเปิด ตัวอย่างที่ถูกกรองผ่านกระดาษกรองก่อนฉีดตัวอย่างและโซลูชั่นมาตรฐานถูกกรองผ่านตัวกรอง ( Polyethylene millex HV หน่วยที่อยู่อาศัย , 0.45 - μ M ขนาดรูพรุน ; มิลลิ , บราซิล ) .
. . ผลไม้
ลูกพลับ ( diospyros สีกากี L . var . พระราม ฟอร์เต้ ) Acerola ( โทนี แบรกซ์ตัน punicifolia L . var . โอลิ ) และสตรอเบอร์รี่ ( fragaria vesca L . var .โอโซ Grande ) ผลที่ได้จากเซาเปาลู บริษัท เค óริน agricultura ธรรมชาติ Ltda . , ตั้งอยู่ใน Atibaia , เซาเปาลู , บราซิล ผลไม้ที่ปลูกโดยใช้อินทรีย์และเกษตรในพื้นที่ทางภูมิศาสตร์เดียวกัน ( Atibaia , เซาเปาลู , บราซิล ) ภายใต้เดียวกันสภาพภูมิอากาศและจำนวนสุ่มในช่วงฤดูกาลเก็บเกี่ยวของผลไม้แต่ละตลอด 2007ผลไม้อินทรีย์มีใบรับรองที่ออกโดย motika โอคาดะ รับรอง ( CMO ) บริการ ผลอายุเก็บเกี่ยวในระยะสุกบางส่วน ( เวทีของ commercialisation ) และถูกเก็บไว้ในกล่องกระดาษแข็งป้องกันช็อก ผลไม้ขนส่งทางบกและมาถึงที่ห้องปฏิบัติการของการวิเคราะห์วิตามิน ภาควิชาโภชนาการ มหาวิทยาลัยสหพันธ์ 6 5 Osa , Minas Gerais ,บราซิล ภายใน 48 ชั่วโมงหลังการเก็บเกี่ยว
2.3
โดยออกแบบการทดลองแบบสุ่ม ประกอบด้วย 2 ชนิด ( อินทรีย์และการผลิตระบบ ) และหก repetitions ต่อการใช้ โดยเก็บตัวอย่างแบบสุ่มในช่วงฤดูกาลเก็บเกี่ยวของผลไม้แต่ละ .
2.4 . การเก็บตัวอย่างและการเตรียมตัวอย่าง
ผลไม้อินทรีย์และถูกเก็บในลักษณะที่จะได้รับหก repetitions ที่แตกต่างกัน พื้นที่การผลิตที่ถูกแบ่งออกเป็นหกแปลงเล็ก ในแต่ละล็อต 2 กก. ลูกพลับและ 1 กิโลกรัม Acerola และสตรอเบอร์รี่ที่ฟาร์มอินทรีย์และการเก็บรวบรวม . หก repetitions ถูกส่งไปปฏิบัติการในขั้นตอนเดียวสอดคล้องกับ 12 กิโลกรัม ลูกพลับและ 6 กก. Acerola และสตรอเบอร์รี่ต่อรักษา
หลังจากได้รับผลไม้แต่ละซ้ำถูกแบ่งออกเป็น 2 ส่วน เพื่อการเตรียมตัวอย่าง ครึ่งหนึ่งถูกใช้สำหรับการวิเคราะห์ของ วิตามิน ซี ในวันเดียวกัน และจึง เก็บไว้ที่อุณหภูมิห้องครึ่งอื่น ๆที่เก็บไว้ในตู้เย็นประมาณ 10 องศา C สำหรับการเตรียมตัวอย่างและการวิเคราะห์ของ carotenoids ในวันถัดไป
ลูกพลับ สตรอเบอรี่ Acerola และล้างภายใต้น้ำไหลกับไม่กิน ส่วนเมล็ดและใบของลูกพลับ Acerola และสตรอเบอร์รี่ ) ออกผลไม้แล้วสับและ homogenised ในการประมวลผลอาหารอเนกประสงค์สำหรับ 5 นาทีจนกว่าโฮโมจีไนเซชั่นที่สมบูรณ์ของตัวอย่าง ดังนั้นรับประกันเชื่อถือได้มากกว่าคน ขั้นตอนนี้คือการรักษาแต่ละครั้ง ( อินทรีย์และเกษตรแบบดั้งเดิม ) .
2.5 การสกัดวิตามินซีและแคโรทีนอยด์
วิตามินซีสกัดจากผลไม้ตามวิธีการของ Campos et al .
การแปล กรุณารอสักครู่..
ภาษาอื่น ๆ
การสนับสนุนเครื่องมือแปลภาษา: กรีก, กันนาดา, กาลิเชียน, คลิงออน, คอร์สิกา, คาซัค, คาตาลัน, คินยารวันดา, คีร์กิซ, คุชราต, จอร์เจีย, จีน, จีนดั้งเดิม, ชวา, ชิเชวา, ซามัว, ซีบัวโน, ซุนดา, ซูลู, ญี่ปุ่น, ดัตช์, ตรวจหาภาษา, ตุรกี, ทมิฬ, ทาจิก, ทาทาร์, นอร์เวย์, บอสเนีย, บัลแกเรีย, บาสก์, ปัญจาป, ฝรั่งเศส, พาชตู, ฟริเชียน, ฟินแลนด์, ฟิลิปปินส์, ภาษาอินโดนีเซี, มองโกเลีย, มัลทีส, มาซีโดเนีย, มาราฐี, มาลากาซี, มาลายาลัม, มาเลย์, ม้ง, ยิดดิช, ยูเครน, รัสเซีย, ละติน, ลักเซมเบิร์ก, ลัตเวีย, ลาว, ลิทัวเนีย, สวาฮิลี, สวีเดน, สิงหล, สินธี, สเปน, สโลวัก, สโลวีเนีย, อังกฤษ, อัมฮาริก, อาร์เซอร์ไบจัน, อาร์เมเนีย, อาหรับ, อิกโบ, อิตาลี, อุยกูร์, อุสเบกิสถาน, อูรดู, ฮังการี, ฮัวซา, ฮาวาย, ฮินดี, ฮีบรู, เกลิกสกอต, เกาหลี, เขมร, เคิร์ด, เช็ก, เซอร์เบียน, เซโซโท, เดนมาร์ก, เตลูกู, เติร์กเมน, เนปาล, เบงกอล, เบลารุส, เปอร์เซีย, เมารี, เมียนมา (พม่า), เยอรมัน, เวลส์, เวียดนาม, เอสเปอแรนโต, เอสโทเนีย, เฮติครีโอล, แอฟริกา, แอลเบเนีย, โคซา, โครเอเชีย, โชนา, โซมาลี, โปรตุเกส, โปแลนด์, โยรูบา, โรมาเนีย, โอเดีย (โอริยา), ไทย, ไอซ์แลนด์, ไอร์แลนด์, การแปลภาษา.
- ในปัจจุบันอังกฤษมีปัญหาในด้านการค้าเกิดก
- are container and label inspect prior to
- Par Value StockOn September 1, Matrix, I
- ขอพรจากพ่อแม่ญาติผู้ใหญ่
- A contract is like a promise between peo
- This was possibly because the smaller ta
- ขอให้ความสงบสุขกลับมาถึงปารีส
- เสาตาข่ายจะต้องตั้งอยู่บนเส้นเขตข้างของป
- ยังคงชัดเจนทุกอย่าง และยังมีแค่เธอเท่านั
- ร้านอะไร
- ขอบคุณมากครับ
- อยากมีคนพิเศษ
- ทุกๆเช้าที่ฉันตื่นนอนคุณคือคนแรกที่ฉันคิ
- ® Wearing surface: 20-25 cm Portland cem
- the next world cup
- ้how are you
- New research suggests that taking vitami
- กำไล
- ในปัจจุบันอังกฤษมีปัญหาในด้านการค้าเกิดก
- You never loved
- หูด้านขวาปกติ หูด้านซ้ายสมรรถภาพการได้ยิ
- ้how are you
- summer is just around the corner and it'
- relatively centralized kingdom
