Fresh bacterial and yeast inoculums

Fresh bacterial and yeast inoculums were prepared from overnight cultures to obtain microbial inoculates in the logarithmic growth phase. The overnight culture of each microorganism was diluted to 1/100 in 10 ml MHB for bacteria or 10 ml SLM for the
yeast, and incubated for 4 to 6 h at 37 C for bacteria and 30 C for the yeast. Optical density was measured at 420 nm and appropriate dilutions were carried out following the standard growth curve to achieve a cell concentration of 105–106 CFU/ml as suggested by the Oxoid Manual (1995). Aliquots (100 ll) of the fresh inoculums were spread over the surface of MHA for bacteria and SDA for the yeast. Agar plates were incubated at 30 C for approximately 15 min until the microbial overlay had dried. Six susceptibility test discs (Oxoid, CT0998B, Ø = 6 mm) were placed onto the agar plates using a six cartridges disc dispenser (Oxoid, ST6090). Only one or two discs were used when essential oils showed great inhibition zones. Discs were then individually impregnated with 10 ll of essential oils or standard antibiotics (positive controls). Because of its high content of methyl cinnamate, E. olida essential oils needed to be re-solubilised by heating before application. Three standard antibiotics were used as positive controls: chloramphenicol (30 lg/disc, Oxoid CT0013B) for E. coli, E. faecalis and S. aureus; gentamicin (30 lg/disc, Oxoid CT0072B) for P. aeruginos; and nystatin (3 mg/ml) for the yeast, while Milli-Q water (Millipore) was used as a negative control. The agar plates were sealed with Parafilm (PM-996, Pechiney Plastic Packaging, Sydney, Australia) and kept at 4 C for 2 h in order to lower the detection limit (Rios, Recio, & Villar, 1988). They were then incubated for 24 h at 37 C for E. coli, P. aeruginosa and S. aureus and 48 h at 30 C for C. albicans. The diameters of the inhibition zones were measured with a digital calliper (Absolute Digimatic, Melboune, Australia). Three agar disc diffusion tests were carried out on each microorganism. Each test was performed in duplicate.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Inoculums แบคทีเรียและยีสต์สดที่เตรียมจากวัฒนธรรมค้างคืนเพื่อให้ได้ จุลินทรีย์ inoculates ในระยะเจริญเติบโตของลอการิทึม วัฒนธรรมของจุลินทรีย์แต่ละบัตรกำนัลถูกผสม 1/100 ใน 10 ml MHB สำหรับแบคทีเรียหรือ 10 ml SLM ในการยีสต์ และ incubated สำหรับ 4-6 h ที่ 37 C แบคทีเรีย และ 30 C สำหรับยีสต์ มีที่วัดความหนาแน่นออปติคอล 420 nm และ dilutions ที่เหมาะสมได้ดำเนินการดังต่อไปนี้เส้นโค้งมาตรฐานการเจริญเติบโตให้มีความเข้มข้นเซลล์ของ 105 – 106 CFU/ml แนะนำโดยคู่มือ Oxoid (1995) Aliquots (100 ll) ของ inoculums สดถูกแพร่กระจายผ่านพื้นผิวของ MHA SDA และแบคทีเรียสำหรับยีสต์จะ มี incubated agar แผ่นที่ 30 C ในประมาณ 15 นาทีจนโอเวอร์เลย์จุลินทรีย์มีแห้ง หกแผ่นทดสอบภูมิไวรับ (Oxoid, CT0998B Ø 6 มม. =) ถูกวางลงบนแผ่น agar ใช้ขวดใส่ดิสก์ตลับหก (Oxoid, ST6090) ใช้ดิสก์เพียงหนึ่ง หรือสองเมื่อระเหยพบโซนดียับยั้ง ดิสก์ถูกแล้วละ impregnated กับ 10 จะระเหยหรือยาปฏิชีวนะมาตรฐาน (ควบคุมบวก) เนื่องจากเนื้อหาสูงของ methyl cinnamate, E. olida น้ำมันต้องมีการ re-solubilised ด้วยความร้อนก่อน ใช้ยาปฏิชีวนะมาตรฐานสามเป็นตัวควบคุมบวก: chloramphenicol (30 lg/ดิสก์, Oxoid CT0013B) สำหรับ E. coli, E. faecalis และ S. หมอเทศข้าง ลาย gentamicin (30 lg/ดิสก์, Oxoid CT0072B) สำหรับ P. aeruginos และ nystatin (3 mg/ml) ในยีสต์ ขณะ Q น้ำ (มาก) ใช้เป็นตัวควบคุมค่าลบ แผ่น agar ถูกปิดผนึก ด้วย Parafilm (PM-996 บรรจุ ภัณฑ์พลาสติก Pechiney ซิดนีย์ ออสเตรเลีย) และเก็บไว้ที่ C 4 2 h สำหรับการลดวงเงินตรวจ (ริออส Recio, & Villar, 1988) นอกจากนี้พวกเขาแล้วมี incubated ใน 24 h h 48 ที่ 30 C สำหรับ C. albicans และ 37 C E. coli, P. aeruginosa และ S. หมอเทศข้างลาย ปัจจุบันโซนยับยั้งถูกวัดกับ calliper แบบดิจิทัล (แน่นอน Digimatic, Melboune ออสเตรเลีย) การทดสอบสาม agar ดิสก์แพร่ได้ดำเนินในจุลินทรีย์แต่ละ มีดำเนินการทดสอบแต่ละสำเนา

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

หัวเชื้อแบคทีเรียเชื้อแบคทีเรียและยีสต์สดที่เตรียมจากวัฒนธรรมในชั่วข้ามคืนที่จะได้รับ inoculates จุลินทรีย์ในระยะการเจริญเติบโตลอการิทึม วัฒนธรรมในชั่วข้ามคืนของจุลินทรีย์แต่ละคนถูกลดลงเหลือ 1/100 10 มล. MHB สำหรับแบคทีเรียหรือ 10 มล. SLM
สำหรับยีสต์และบ่มเป็นเวลา4-6 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสสำหรับแบคทีเรียและ 30 องศาเซลเซียสสำหรับยีสต์ ความหนาแน่นของออปติคอลได้รับการวัดที่ 420 นาโนเมตรและเจือจางที่เหมาะสมได้ดำเนินการดังต่อไปนี้อัตราการเจริญเติบโตเพื่อให้บรรลุมาตรฐานความเข้มข้นของเซลล์ 105-106 CFU / ml ตามที่แนะนำโดยคู่มือ Oxoid (1995) aliquots (100 LL) ของหัวเชื้อแบคทีเรียสดถูกแผ่กระจายไปทั่วพื้นผิวของเลดสำหรับเชื้อแบคทีเรียและ SDA สำหรับยีสต์ แผ่นวุ้นถูกบ่มที่ 30 องศาเซลเซียสประมาณ 15 นาทีจนซ้อนทับจุลินทรีย์แห้ง หกแผ่นทดสอบความไว (Oxoid, CT0998B, Ø = 6 มิลลิเมตร) ถูกวางลงบนจานอาหารเลี้ยงเชื้อโดยใช้หกตลับตู้แผ่นดิสก์ (Oxoid, ST6090) เพียงหนึ่งหรือสองแผ่นถูกนำมาใช้เมื่อน้ำมันหอมระเหยที่แสดงให้เห็นว่าการยับยั้งโซนที่ดี แผ่นชุบจากนั้นก็เป็นรายบุคคลกับ 10 LL ของน้ำมันหอมระเหยหรือยาปฏิชีวนะมาตรฐาน (การควบคุมการบวก) เพราะเนื้อหาที่สูงของการ cinnamate เมธิลอี olida น้ำมันหอมระเหยที่จำเป็นจะต้อง re-solubilised ด้วยความร้อนก่อนที่จะประยุกต์ สามยาปฏิชีวนะมาตรฐานถูกนำมาใช้เป็นตัวควบคุมบวก: chloramphenicol (30 LG / แผ่น Oxoid CT0013B) สำหรับเชื้อ E. coli, E. faecalis และ S. aureus; gentamicin (30 LG / แผ่น Oxoid CT0072B) สำหรับพี aeruginos; และ nystatin (3 mg / ml) สำหรับยีสต์ในขณะที่น้ำ Milli-Q (ค) ถูกนำมาใช้เป็นตัวควบคุมเชิงลบ แผ่นวุ้นถูกปิดผนึกด้วย Parafilm (PM-996, Pechiney บรรจุภัณฑ์พลาสติก, ซิดนีย์, ออสเตรเลีย) และเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 ชั่วโมงเพื่อลดขีด จำกัด ของการตรวจสอบ (ริออส, Recio และ Villar, 1988) พวกเขาถูกบ่มแล้วเป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสสำหรับเชื้อ E. coli, P. aeruginosa และ S. aureus และ 48 ชั่วโมงที่ 30 องศาเซลเซียสสำหรับ C. albicans เส้นผ่าศูนย์กลางของโซนยับยั้งถูกวัดด้วย calliper ดิจิตอล (แอบโซลูท Digimatic, Melboune, ออสเตรเลีย) การทดสอบการแพร่กระจายสามแผ่นวุ้นได้ดำเนินการเกี่ยวกับจุลินทรีย์แต่ละ การทดสอบแต่ละคนได้ดำเนินการในที่ซ้ำกัน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

18 ชั่วโมงแบคทีเรียและยีสต์สดเตรียมจากวัฒนธรรมข้ามคืนเพื่อให้ได้จุลินทรีย์ inoculates ในขั้นตอนการเจริญเติบโตลอการิทึม วัฒนธรรมในชั่วข้ามคืนของแต่ละเชื้อเจือจางถึง 1 / 100 ใน 10 ml mhb แบคทีเรียหรือ 10 ml SLM สำหรับ
ยีสต์ และบ่มเป็นเวลา 4 ถึง 6 ชั่วโมง 37  C 30  C สำหรับแบคทีเรียและยีสต์ความหนาแน่นของแสง คือ วัดที่ 420 นาโนเมตร และวิธีการที่เหมาะสม พบว่าตามเส้นโค้งการเติบโตเพื่อให้บรรลุมาตรฐานเซลล์ความเข้มข้น 105 - 106 cfu / ml เป็นข้อเสนอแนะโดย oxoid คู่มือ ( 1995 ) เฉยๆ ( 100 LL ) ของ 18 ชั่วโมงสดถูกแผ่กระจายไปทั่วพื้นผิวของมะสำหรับแบคทีเรียและ SDA สำหรับยีสต์วุ้นแผ่นอุณหภูมิ 30  C ประมาณ 15 นาทีจนซ้อนทับ จุลินทรีย์แห้ง . ารทดสอบ 6 แผ่น ( oxoid ct0998b Ø , , = 6 มม. ) ถูกวางลงบนจานวุ้นใช้ตู้ Disc 6 ตลับ ( oxoid st6090 , ) เพียงหนึ่งหรือสองดิสก์ถูกใช้เมื่อระเหยพบโซนยับยั้งมากแผ่นเป็นแบบชุบด้วย 10 จะระเหยหรือยาปฏิชีวนะมาตรฐาน ( ควบคุมบวก ) เนื่องจากเนื้อหาสูงของเมทิลซินนาเมท เช่น olida ระเหยต้อง re solubilised โดยความร้อนก่อนที่จะสมัคร สามยาปฏิชีวนะมาตรฐานที่ใช้ควบคุมบวก : คลอแรมเฟนิคอล ( 30 ) / แผ่น oxoid ct0013b ) E . coli , E . faecalis และ S . aureus ;เจนตาไมซิน ( 30 ) / แผ่น oxoid ct0072b ) สำหรับหน้า aeruginos และนัยสะแตติน ( 3 มก. / มล. ) สำหรับยีสต์ ในขณะที่ milli-q น้ำ ( มิลลิ ) ใช้เป็นชุดควบคุมลบ การใช้แผ่นถูกผนึกด้วยพาราฟิล์ม ( pm-996 pechiney , บรรจุภัณฑ์พลาสติก , ซิดนีย์ , ออสเตรเลีย ) และเก็บไว้ที่ 4  C 2 H เพื่อลดขีดจำกัด ( Rios , recio & VILLAR , 2531 )จากนั้นบ่มเป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37  C E . coli , P . aeruginosa และ S . aureus และ 48 ชั่วโมง 30  C C . albicans . ขนาดเส้นผ่านศูนย์กลางของการยับยั้ง โซนวัดกับคาลิเปอร์ ดิจิตอล ( แน่นอน digimatic melboune , ออสเตรเลีย ) สามแผ่นวุ้นกระจายทดสอบที่ออกในแต่ละจุลินทรีย์ ทดสอบแต่ละแสดงในที่ซ้ำกัน