Plasma and Milk PAG ELISA After com

Plasma and Milk PAG ELISA
After completion of sample collection at the end of
the experiment, frozen plasma samples were shipped overnight in a cooled container by courier from the Uni- versity of Wisconsin to Idexx Laboratories for analysis of plasma PAG levels using a commercial ELISA kit
(the Idexx Bovine Pregnancy Test, Idexx Laboratories). Milk samples were delivered weekly to AgSource head- quarters (Verona, WI) on the day of collection through- out the experiment and then to AgSource Laboratories (Menomonie, WI) for analysis of milk PAG levels using a commercial ELISA kit (The Idexx Milk Pregnancy Test, Idexx Laboratories).
Plasma and milk PAG ELISA tests were conducted according to the manufacturer's instructions by trained technicians who were blinded to the pregnancy status of the cows. Briefly, a microtiter plate format was config- ured by coating an anti-PAG monoclonal antibody onto the plate. The PAG monoclonal antibody was raised against the PAG-55 protein fraction comprising PAG-4, PAG-6, PAG-9, PAG-16, PAG-18, and PAG-19 (Nagap- pan et al., 2009). After incubation of the diluted test sample in the coated well, captured PAG was detected with a PAG-specific antibody (detector solution) and horseradish peroxidase conjugate. Unbound conjugate was washed away, and 3,3 ,5,5 -tetramethylbenzidine substrate was added to the wells. Color development was proportional to the amount of PAG in the sample and was measured using a spectrophotometer. Results were calculated from the optical density (OD) of the sample [corrected by subtraction of the reference wavelength OD of the sample (S) minus the OD of the negative control (N) at 450 nm (with both values corrected by subtraction of the reference wavelength OD of the negative control)], which resulted in an S-N value. Each microplate included negative and positive controls.
Pregnancy outcomes were determined based on cutoff values determined by the PAG ELISA manufac- turer. For the plasma PAG ELISA, when the S-N value was 0.300 to

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

พลาสม่าและนมปลายแห่งชาติ ELISA หลังจากเสร็จสิ้นการเก็บตัวอย่างที่ ทดลอง ตัวอย่างพลาสม่าแช่แข็งจัดส่งข้ามคืนในภาชนะที่เย็นไปรษณีย์จาก Uni-versity ของวิสคอนซินเพื่อห้องปฏิบัติการ Idexx สำหรับการวิเคราะห์ระดับพลาสมาปลายแห่งชาติใช้ ELISA ชุดเชิงพาณิชย์ (การเกษตร Idexx ทดสอบการตั้งครรภ์ ห้องปฏิบัติการ Idexx) ตัวอย่างนมถูกส่งทุกสัปดาห์ไป AgSource สำนัก (เวโรนา WI) ในวันเก็บผ่านเอาท์การทดลอง และห้อง ปฏิบัติการ AgSource (Menomonie, WI) สำหรับการวิเคราะห์ระดับปลายแห่งชาตินมที่ใช้ชุดของ ELISA เชิงพาณิชย์ (การทดสอบการตั้งครรภ์น้ำนม Idexx ห้องปฏิบัติการ Idexx) พลาสม่าและนมปลายแห่งชาติ ELISA การทดสอบปฏิบัติตามคำแนะนำของผู้ผลิตโดยฝึกช่างเทคนิคที่มีตาบอดสถานะการตั้งครรภ์ของวัว สั้น ๆ รูปแผ่น microtiter ถูกกำหนดค่า ured โดยการเคลือบแอนติบอดี monoclonal ป้องกันปลายแห่งชาติไปยังแผ่น แอนติบอดี monoclonal ปลายแห่งชาติขึ้นกับสัดส่วนโปรตีน 55 ปลายแห่งชาติประกอบด้วยปลายแห่งชาติ-4 ปลายแห่งชาติ-6, 9 ปลายแห่งชาติ ปลายแห่งชาติ-16, 18 ปลายแห่งชาติ และปลายแห่งชาติ-19 (แพน Nagap et al. 2009) หลังจากบ่มตัวอย่างทดสอบเจือจางในการเคลือบอย่างดี จับปลายแห่งชาติ ตรวจพบแอนติบอดีเฉพาะปลายแห่งชาติ (โซลูชั่นตรวจจับ) และฮอร์สฮอส conjugate Conjugate ผูกถูกล้างไป และ 3, 3, 5,5 - tetramethylbenzidine พื้นถูกเพิ่มลงในหลุม การพัฒนาสีเป็นสัดส่วนกับจำนวนปลายแห่งชาติในตัวอย่าง และมีวัดโดยใช้เครื่อง spectrophotometer ผลคำนวณจากความหนาแน่นออปติคอล (OD) ของตัวอย่าง [แก้ไข โดยลบของความยาวคลื่นอ้างอิง OD ของตัวอย่าง (S) ลบ OD ของตัวควบคุมค่าลบ (N) ที่ 450 nm (พร้อมทั้งค่าแก้ไข โดยลบของความยาวคลื่นอ้างอิง OD ของตัวควบคุมค่าลบ)], ซึ่งส่งผลให้ค่า S-N แต่ละ microplate รวมตัวควบคุมบวก และลบ ผลการตั้งครรภ์ถูกกำหนดตามค่าตัดที่กำหนด โดย ELISA ปลายแห่งชาติ manufac-turer สำหรับพลาสม่า ELISA ปลายแห่งชาติ เมื่อค่า S N < 0.300 วัวจัดอยู่ "ไม่ท้อง" เมื่อค่า S N ถูก > 0.300 การ < 1.000 วัวถูกจัด "ตรวจ" และเมื่อค่า S N 1.000 วัวถูกจัด "ตั้งครรภ์" นมปลายแห่งชาติ ELISA เมื่อค่า S N < 0.100 วัวจัดอยู่ "ไม่ท้อง" เมื่อค่า S N ถูก > 0.100 $การ < 0.250 วัวถูกจัดเป็น "ตรวจ" และเมื่อค่า S N 0.250 วัว อย่างมี- sified "ตั้งครรภ์"

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

พลาสม่าและนม PAG ELISA
หลังจากเสร็จสิ้นการเก็บตัวอย่างในตอนท้ายของการทดลองตัวอย่างพลาสมาแช่แข็งที่ถูกส่งคืนในภาชนะที่ระบายความร้อนด้วยการจัดส่งจากหนึ่ง - Versity วิสคอนซินไปยังห้องปฏิบัติการ IDEXX สำหรับการวิเคราะห์ระดับ PAG พลาสม่าโดยใช้ชุด ELISA เชิงพาณิชย์ (การทดสอบการตั้งครรภ์ IDEXX วัว, IDEXX ห้องปฏิบัติการ) ตัวอย่างนมที่ถูกส่งมาทุกสัปดาห์เพื่อสำานักงานใหญ่ AgSource (เวโรนา, WI) ในวันที่ของการเก็บ through- ทดลองและจากนั้นจะ AgSource ห้องปฏิบัติการ (เมโน, WI) สำหรับการวิเคราะห์ระดับ PAG นมโดยใช้ชุด ELISA เชิงพาณิชย์ (นม IDEXX ทดสอบการตั้งครรภ์, IDEXX ห้องปฏิบัติการ). พลาสม่าและ PAG นมทดสอบ ELISA ได้ดำเนินการตามคำแนะนำของผู้ผลิตโดยช่างที่ผ่านการอบรมที่ได้รับการตาบอดสถานะการตั้งครรภ์ของวัว สั้น ๆ , รูปแบบแผ่นไมโครเป็น Ured config- โดยการเคลือบโมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อต้าน PAG ลงบนจาน โมโนโคลนอลแอนติบอดี PAG ถูกยกขึ้นกับส่วนโปรตีน PAG-55 ประกอบด้วย PAG-4, PAG-6, PAG-9, PAG-16, PAG-18 และ PAG-19 (Nagap- แพน et al., 2009) หลังจากการบ่มของตัวอย่างทดสอบเจือจางในเคลือบกันจับ PAG พบกับแอนติบอดี PAG เฉพาะ (สารละลายเครื่องตรวจจับ) และพืชชนิดหนึ่งที่ผัน peroxidase ผันหลุดถูกล้างออกไปและ 3,3, 5,5 พื้นผิว -tetramethylbenzidine ถูกบันทึกอยู่ในหลุม การพัฒนาสีเป็นสัดส่วนกับปริมาณของ PAG ในตัวอย่างและได้รับการวัดโดยใช้สเปก ผลจะถูกคำนวณจากความหนาแน่นของแสง (OD) ของกลุ่มตัวอย่าง [แก้ไขโดยการลบของความยาวคลื่นอ้างอิง OD ของกลุ่มตัวอย่าง (S) ลบ OD ของการควบคุมเชิงลบ (N) ที่ 450 นาโนเมตร (มีค่าทั้งการแก้ไขโดยการลบของ ความยาวคลื่นอ้างอิง OD ของการควบคุมลบ)] ซึ่งส่งผลให้ค่า SN แต่ละ microplate รวมการควบคุมเชิงลบและบวก. ผลการตั้งครรภ์ถูกกำหนดขึ้นอยู่กับค่าตัด turer กำหนดโดยวิธี ELISA PAG ซึ่งผลิตภัณฑ์ของ บริษัท สำหรับพลาสม่า PAG ELISA เมื่อค่า SN เป็น <0.300 วัวถูกจัด "ไม่ได้ตั้งครรภ์"; เมื่อค่า SN เป็น> 0.300 ที่ <1.000 วัวถูกจัด "ตรวจสอบ"; และเมื่อค่า SN เป็น1.000วัวถูกจัด "ตั้งครรภ์". สำหรับนม PAG ELISA เมื่อค่า SN เป็น <0.100 วัวถูกจัด "ไม่ได้ตั้งครรภ์"; เมื่อค่า SN เป็น> 0.100 ที่ <0.250 วัวที่ถูกจัดเป็น "ตรวจสอบ"; และเมื่อค่า SN เป็น0.250วัวถูก clas- sified "ตั้งครรภ์".

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

พลาสมาและนม Pag ELISAหลังเสร็จจากการเก็บตัวอย่างที่สิ้นสุดของการทดลองแช่แข็งพลาสมาจำนวนจัดส่งค้างคืนในเย็นคอนเทนเนอร์โดย courier ขนาดจาก Uni - versity ของวิสคอนซิน idexx ห้องปฏิบัติการวิเคราะห์ระดับพลาสมาโดยใช้วิธี ELISA Kit Pag พาณิชย์( ห้องปฏิบัติการ idexx idexx วัวที่ทดสอบการตั้งครรภ์ ) ตัวอย่างนมถูกส่งทุกสัปดาห์เพื่อ agsource หัว - ไตร ( เวโรน่า , WI ) ในวันที่เก็บรวบรวมผ่านออกจากการทดลองแล้ว agsource ห้องปฏิบัติการ ( menomonie , WI ) สำหรับการวิเคราะห์ระดับของปั๊กนมโดยใช้วิธีเชิงพาณิชย์ ( ห้องปฏิบัติการ idexx ที่ idexx นมชุดทดสอบการตั้งครรภ์ )พลาสมาและนม Pag ELISA การทดสอบได้ดำเนินการตามคําแนะนําของผู้ผลิตโดยการฝึกอบรมช่างเทคนิคที่ตาบอดกับการตั้งครรภ์ สถานะของวัว สั้น , ไมโครจานรูปแบบคือ config ured โดยการเคลือบป้องกัน - Pag โมโนโคลนอลแอนติบอดีลงบนจาน pag โมโนโคลนอลแอนติบอดีขึ้นต่อต้าน pag-55 เศษส่วนประกอบด้วยโปรตีน pag-4 pag-6 pag-9 pag-16 , , , , pag-18 และ pag-19 ( nagap - แพน et al . , 2009 ) หลังจากบ่มเพาะการเจือจางตัวอย่างการทดสอบในเคลือบดี จับ Pag Pag ถูกตรวจพบมีแอนติบอดี ( เครื่องตรวจจับเฉพาะโซลูชั่น ) และมะรุมมีคู่ . หลุดคู่ถูกล้างออกไปและสำหรับ 5 , 5 - tetramethylbenzidine , พื้นผิวที่ถูกเพิ่มเข้าไปในบ่อน้ำ การพัฒนาสีก็เป็นสัดส่วนกับปริมาณผักในตัวอย่าง และทำการวัดโดยใช้วัสดุ ผลลัพธ์ที่ได้จากความหนาแน่นของแสง ( OD ) ของตัวอย่าง [ แก้ไขโดยการลบการอ้างอิงความยาวคลื่น OD ของตัวอย่าง ( s ) ลบ OD ของการควบคุมด้านลบ ( n ) 450 nm ( ทั้งค่าแก้ไขโดยการลบการอ้างอิงความยาวคลื่น OD ของการควบคุมด้านลบ ) ซึ่งมีผลใน S-N มีค่า ในพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย ได้แก่ การควบคุมทางลบและบวกผลลัพธ์ของการตั้งครรภ์ได้รับการพิจารณาตามนี้ค่ากำหนดโดย Pag ) - turer manufac . สำหรับพลาสมา Pag ELISA เมื่อค่า S-N คือ < 0.300 , วัวถูกจัด " ตั้งครรภ์ " ; เมื่อค่า S-N คือ > 0.300 ถึง < 1.000 , วัวถูกจัด " ตรวจสอบ " ; และเมื่อค่า S-N คือ 1.000 , วัวถูกจัด " ท้อง " สำหรับนม Pag ELISA เมื่อค่า S-N คือ < 0.100 , วัวถูกจัด " ตั้งครรภ์ " ; เมื่อค่า S-N คือ > < 0.100 ถึง 0.250 , วัวถูกจัดเป็น " ตรวจสอบ " ; และเมื่อค่า S-N คือ 0.250 , วัว 2 - คือsified " ตั้งครรภ์ " .