2. Materials and methods2.1. Chemic

2. Materials and methods

2.1. Chemicals and reagents

Pesticides and VDs analytical standards were purchased from Sigma-Aldrich (Madrid, Spain), Riedel-de-Haën (Seelze, Germany), Fluka (Steinheim, Germany), Dr. Ehrenstorfer GmbH (Ausburg, Germany), Witega (Berlin, Germany), Santa Cruz (Santa Cruz, CA, USA) and European Pharmacopoeia (Strasbourg, France). Indivi- dual stock standard solutions (100–450 mg L 1) were prepared in methanol, acetone or acetonitrile, and they were stored at 5 1C or
18 1C (VDs). LC–MS grade methanol, acetonitrile and acetone were obtained from Fluka. VDs were grouped in families and a solution for each of them was prepared from corresponding individual stock standard solutions in methanol or acetonitrile, whereas two multi-pesticide solutions (corresponding to typical LC and GC-amenable compounds) were prepared in acetone or methanol. Then, a multi-compound working solution containing all the analytes (0.41 mg L 1) was prepared by combining suitable aliquots of each individual standard stock solution and diluting them with LC–MS-grade methanol. This solution was kept at
18 1C. Formic acid (purity 4 98%) and ammonium formate (purity 4 99%) were obtained from Panreac (Barcelona, Spain). LC–MS water was provided by Scharlau (Barcelona, Spain). Extra- Bond Florisil cartridges (500 mg, 3 mL) were purchased from Scharlau (Barcelona, Spain). For accurate mass calibration, a mixture of caffeine, Met-Arg-Phe-Ala acetate salt (MRFA) and Ultramark 1600 (Proteo Mass LTQ/FT-Hybrid ESI positive mode calibration mix) and a mixture of acetic acid, sodium dodecyl sulphate, taurocholic acid sodium salt hydrate and Ultramark
1621 (fluorinated phosphazines) (ProteoMass LTQ/FT-Hybrid ESI

negative mode calibration mix) from Thermo Fisher Scientific
(Rockford, IL, USA) were used in the Orbitrap analyser.

2.2. Apparatus

For the extraction procedure, a rotary agitator from Heidolph (Schwabach, Germany) and an analytical AB204-S balance (Mettler Toledo, Greinfesee, Switzerland) were used. Centrifugations were performed in a Consul 21 high-volume centrifuge from Olto Alresa (Madrid, Spain).

2.3. UHPLC-Orbitrap-MS analysis

The separation of the analytes was carried out using a Trans- cend 600LC (Thermo Scientific Transcend™, Thermo Fisher Scien- tific, San Jose, CA, USA) equipped with an analytical column Hypersil GOLD aQ C18 column (100 mm 2.1 mm, 1.7 mm particle size) from Thermo. The mobile phase consisted of 0.1% (v/v) formic acid and ammonium formate 4 mM in water (eluent A) and 0.1% (v/v) formic acid and ammonium formate 4 mM in methanol (eluent B). The analysis started with 95% of eluent A. After
1 min, this percentage was linearly decreased to 0% in 7.0 min. This composition was held during 4.0 min and increased again up to 95% in 0.5 min, followed by a re-equilibration time of 1.5 min (total running time ¼ 14.0 min). The flow rate was 0.3 mL min 1 and the column temperature was set at 30 1C. Aliquots of 10 mL of the sample extract were injected into the chromatographic system.
The UHPLC system was coupled to a single stage Orbitrap mass spectrometer (Exactive™, Thermo Fisher Scientific, Bremen, Ger- many) operating with a heated electrospray interface (HESI-II, Thermo Fisher Scientific, San Jose, CA, USA), in positive (ESI þ ) and negative ionization mode (ESI ) using the previously developed parameters [27]. Mass spectra were acquired using four alternat- ing acquisition functions: (1) full MS, ESI þ , without fragmentation (the higher collisional dissociation (HCD) collision cell was switched off), mass resolving power ¼ 25000 FWHM; scan time ¼ 0.25 s; (2) all ions fragmentation (AIF), ESI þ , with frag- mentation (HCD on, collision energy ¼ 30 eV), mass resolving power ¼ 10000 FWHM; scan time ¼ 0.10 s; (3) full MS, ESI—using the settings explained for (1); and (4) AIF, ESI—using the settings explained for (2). Mass range in the full scan experiments was set at m/z 70–1000. All the analyses were performed without lock mass. Mass accuracy was carefully monitored as follows: checked daily with the calibration mix solution (see Section 2.1); evaluated (once a week) and calibrated when necessary (every two weeks at least). Data were acquired using matrix-matched external calibra- tion mode and they were processed using Xcalibur™ version 2.2.1 (Thermo Fisher Scientific, Les Ulis, France) with Qual and Quan- browser. Genesis peak detection was applied. ToxID™ 2.1.1 (auto- mated compound screening software, Thermo Scientific) was used for screening and LCQuan™ 2.6 software (Thermo Scientific) was used for quantification during method validation and sample analysis.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการ2.1. เคมีและ reagentsยาฆ่าแมลงและมาตรฐานวิเคราะห์ VDs ถูกซื้อจากซิก-Aldrich (มาดริด สเปน), Riedel-เดอ-Haën (Seelze เยอรมนี), Fluka (Steinheim เยอรมนี), ดร. Ehrenstorfer GmbH (Ausburg เยอรมนี), Witega (เบอร์ลิน เยอรมนี), ซานตาครูซ (ซานตาครูซ CA, USA) และยุโรป Pharmacopoeia (สตราสบูร์ก ฝรั่งเศส) แก้ไขมาตรฐานคู่ Indivi หุ้น (100-450 มิลลิกรัม L 1) ถูกเตรียมไว้ในเมทานอล อะซิโตน หรือ acetonitrile และพวกเขาถูกเก็บไว้ที่ 5 1C หรือ 18 1C (VDs) เมทานอลเกรด LC – MS, acetonitrile และอะซีโตนได้รับจาก Fluka VDs ถูกจัดกลุ่มในครอบครัว และแก้ไขปัญหาสำหรับแต่ละของพวกเขาถูกเตรียมจากสอดคล้องแต่ละหุ้นแก้ในเมทานอลหรือ acetonitrile ในขณะที่โซลูชั่นสองแมลงหลาย (ที่สอดคล้องกับปกติสาร LC และ GC amenable) ถูกเตรียมไว้ในอะซิโตนหรือเมทานอล แล้ว โซลูชันทำงานซับซ้อนหลายที่ประกอบด้วยทั้งหมด analytes (0.41 มิลลิกรัม L 1) ถูกเตรียม โดยรวม aliquots เหมาะสมของแต่ละแต่ละมาตรฐานหุ้น และ diluting ด้วยเมธานอ LC – MS-เกรด วิธีนี้ถูกเก็บไว้ที่ 18 1C. กรด (4 บริสุทธิ์ 98%) และแอมโมเนียรูปแบบเอกสาร (บริสุทธิ์ 4 99%) ได้รับจาก Panreac (บาร์เซโลนา สเปน) LC – MS น้ำถูกจัดให้ โดย Scharlau (บาร์เซโลนา สเปน) ตลับ Florisil Extra-บอนด์ (500 มิลลิกรัม 3 mL) ที่ซื้อจาก Scharlau (บาร์เซโลนา สเปน) สำหรับการปรับเทียบโดยรวมถูกต้อง ส่วนผสมของคาเฟอีน เม็ทอาร์กิวเมนต์ของค่าเพอลา acetate เกลือ (MRFA) และ Ultramark 1600 (ESI LTQ FT-ผสมมวล Proteo โหมดบวกเทียบผสม) และส่วนผสมของกรดน้ำส้ม โซเดียม dodecyl ซัลเฟต โซเดียม taurocholic กรดเกลือ Ultramark และผับ/เลาจน์1621 (fluorinated phosphazines) (ESI ProteoMass LTQ/FT-ไฮบริด ลบโหมดเทียบผสม) จากเทอร์โมฟิชเชอร์ Scientific(ร็อคฟอร์ด IL สหรัฐอเมริกา) ถูกใช้ใน Orbitrap analyser2.2 เครื่องสำหรับขั้นตอนการสกัด agitator โรตารี่จาก Heidolph (Schwabach เยอรมนี) และดุล AB204 S วิเคราะห์ (Mettler Toledo, Greinfesee สวิตเซอร์แลนด์) ใช้ มีดำเนินการ centrifugations ในเครื่องหมุนเหวี่ยงความ 21 กงสุลจาก Olto Alresa (มาดริด สเปน)2.3. UHPLC-Orbitrap-MS วิเคราะห์แยกของ analytes ถูกดำเนินการโดยใช้ 600LC cend ธุรกรรม (Transcend เทอร์โม Scientific ™ เทอร์โม Fisher Scien-tific, San Jose, CA, USA) พร้อมกับมี aQ Hypersil ทองวิเคราะห์คอลัมน์คอลัมน์ C18 (100 มม. 2.1 มม. ขนาดอนุภาค 1.7 mm) จากเทอร์โม เฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วยกรด 0.1% (v/v) และรูปแบบเอกสารแอมโมเนีย 4 มม.ในน้ำ (eluent A) และ 0.1% (v/v) กรดแอมโมเนียรูปแบบเอกสาร 4 มม.ในเมทานอล (eluent B) การวิเคราะห์เริ่มต้น ด้วย 95% ของ eluent A. หลัง1 นาที เปอร์เซ็นต์นี้เป็นเชิงเส้นลดลงเป็น 0% ในนาที 7.0 องค์ประกอบนี้ระหว่าง 4.0 min และเพิ่มขึ้นอีกถึง 95% ใน 0.5 นาที ตาม ด้วยเวลา equilibration อีก 1.5 นาที (รวมใช้เวลา¼ 14.0 นาที) อัตรา flow ถูกต่ำสุด 0.3 mL 1 และอุณหภูมิคอลัมน์ถูกตั้งค่าที่ 30 1C. Aliquots 10 mL ของสารสกัดตัวอย่างถูกฉีดเข้าไปในระบบ chromatographicระบบ UHPLC ถูกควบคู่กับการขั้นเดียว Orbitrap โดยรวมสเปกโตรมิเตอร์ (Exactive ™ Scientific Fisher เทอร์โม เบรเมน เกออาร์ตหลาย) ดำเนินงานด้วยอินเตอร์เฟซวิธีพ่นละอองไฟฟ้าอุ่น (HESI-II เทอร์โม Fisher Scientific, San Jose, CA สหรัฐอเมริกา), บวก (ESI þ) และโหมด ionization ลบ (ESI) โดยใช้พารามิเตอร์การพัฒนาก่อนหน้านี้ [27] แรมสเป็คตราโดยรวมได้รับมาใช้ฟังก์ชันซื้อ alternat-ing 4: MS เต็ม (1) ESI þ โดยไม่มีการกระจายตัว (เซลล์ชน dissociation collisional (HCD) สูงถูกปิด), โดยรวมการแก้ไขพลังงาน¼ 25000 FWHM การสแกนเวลา¼ 0.25 s (2) การกระจายตัวของประจุ (AIF) ESI þ กับ frag-เอกสารทั้งหมด (HCD ใน พลังงานชน¼ 30 eV), โดยรวมแก้ไขพลังงาน¼ 10000 FWHM การสแกนเวลา¼ 0.10 s (3) เต็ม MS, ESI ซึ่งอธิบายโดยใช้การตั้งค่าใน (1); และ (4) AIF, ESI ซึ่งอธิบายโดยใช้การตั้งค่าใน (2) ช่วงโดยรวมในการทดลองการสแกนแบบเต็มถูกกำหนดที่ z m 70 – 1000 ทั้งหมดที่ดำเนินการวิเคราะห์โดยไม่ล็อคมวล ความแม่นยำโดยรวมถูกตรวจสอบอย่างระมัดระวังดังนี้: ตรวจสอบทุกวัน ด้วยโซลูชั่นผสมเทียบ (ดูหัวข้อ 2.1); ประเมิน (สัปดาห์ละหนึ่งครั้ง) และเมื่อจำเป็นในการปรับเทียบ (ทุกสองสัปดาห์น้อย) ข้อมูลที่ได้รับมาใช้โหมดจับคู่เมทริกซ์ภายนอก calibra-สเตรชัน และพวกเขาถูกประมวลผล Xcalibur ™รุ่น 2.2.1 (เทอร์โม Fisher Scientific, Les Ulis ฝรั่งเศส) ด้วย Qual และ Quan เบราว์เซอร์ ใช้ตรวจจับสูงสุดปฐมกาล ToxID ™ 2.1.1 (auto-mated คัดกรองผสมซอฟต์แวร์ เทอร์โม Scientific) ใช้สำหรับคัดกรอง และซอฟต์แวร์ LCQuan ™ 2.6 (เทอร์โม Scientific) ใช้สำหรับ quantification ในระหว่างวิธีการตรวจสอบและตัวอย่างการวิเคราะห์

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2. วัสดุและวิธีการ2.1 สารเคมีและสารเคมีกำจัดศัตรูพืชและ VDS มาตรฐานการวิเคราะห์ที่ซื้อมาจาก บริษัท Sigma-Aldrich (มาดริด, สเปน), Riedel-de-HAEN (Seelze, เยอรมนี), Fluka (Steinheim, เยอรมนี), ดร. Ehrenstorfer GmbH (Ausburg, เยอรมนี), Witega ( เบอร์ลิน, เยอรมนี), ซานตาครูซ (Santa Cruz, CA, USA) และยุโรปตำรับยา (Strasbourg, ฝรั่งเศส) Indivi- หุ้นคู่โซลูชั่นมาตรฐาน (100-450 มิลลิกรัมต่อลิตร 1) ได้จัดทำขึ้นเมทานอลอะซิโตนหรือ acetonitrile และพวกเขาก็เก็บไว้ที่ 5 1C หรือ18 1C (VDS) เมทานอลเกรด LC-MS, acetonitrile และอะซีโตนที่ได้รับจาก Fluka VDS ถูกจัดกลุ่มในครอบครัวและโซลูชั่นสำหรับแต่ละของพวกเขาได้รับการจัดทำขึ้นจากบุคคลที่สอดคล้องหุ้นโซลูชั่นมาตรฐานในเมทานอลหรือ acetonitrile ในขณะที่สองโซลูชั่นหลายสารกำจัดศัตรูพืช (ตรงกับ LC ทั่วไปและสารประกอบ GC-คล้อย) ได้จัดทำขึ้นอะซิโตนหรือเมทานอล แล้ววิธีการทำงานแบบ multi-สารประกอบที่มีการวิเคราะห์ทั้งหมด (0.41 มิลลิกรัมต่อลิตร 1) ได้รับการจัดทำขึ้นโดยรวมส่วนลงตัวที่เหมาะสมของการแก้ปัญหามาตรฐานหุ้นแต่ละบุคคลและเจือจางพวกเขาด้วยเมทานอล LC-MS-เกรด การแก้ปัญหานี้ได้รับการเก็บรักษาไว้ที่18 1C กรดฟอร์มิค (ความบริสุทธิ์ 4 98%) และรูปแบบแอมโมเนียม (ความบริสุทธิ์ 4 99%) ที่ได้รับจาก Panreac (บาร์เซโลน่า, สเปน) น้ำ LC-MS ได้รับจาก Scharlau (บาร์เซโลน่า, สเปน) วาระพิเศษบอนด์ตลับ Florisil (500 มก., 3 มิลลิลิตร) ที่ซื้อมาจาก Scharlau (บาร์เซโลน่า, สเปน) สำหรับการสอบเทียบมวลที่ถูกต้องมีส่วนผสมของคาเฟอีน, Met-Arg เพ-Ala เกลืออะซิเตท (Mrfa) และ Ultramark 1600 (Proteo มวล LTQ / FT-Hybrid ผสมผสานการสอบเทียบโหมดบวก ESI) และส่วนผสมของกรดอะซิติก, โซเดียมโดเดซิลซัลเฟต, ไฮเดรตเกลือโซเดียมกรด taurocholic และ Ultramark 1621 (phosphazines uorinated FL) (ProteoMass LTQ / FT-Hybrid ESI ผสมสอบเทียบโหมดลบ) จากเทอร์โมฟิชเชอร์ scienti Fi ค(ฟอร์ด, อิลลินอยส์, สหรัฐอเมริกา) ถูกนำมาใช้ในการวิเคราะห์ Orbitrap. 2.2 เครื่องมือสำหรับขั้นตอนการสกัดปลุกปั่นหมุนจาก Heidolph (Schwabach, เยอรมนี) และการวิเคราะห์ความสมดุล AB204-S (Mettler Toledo, Greinfesee วิตเซอร์แลนด์) ถูกนำมาใช้ Centrifugations ได้ดำเนินการในกงสุล 21 centrifuge ปริมาณสูงจาก Olto Alresa (มาดริด, สเปน). 2.3 การวิเคราะห์ UHPLC-Orbitrap-MS แยกวิเคราะห์ได้ดำเนินการโดยใช้ Trans- Cend 600LC (เทอร์โม scienti Fi คชนะ™, เทอร์โมฟิชเชอร์ Scien- TI สาย C, San Jose, CA, USA) พร้อมกับคอลัมน์วิเคราะห์ Hypersil GOLD AQ คอลัมน์ C18 ( 100 มมมม 2.1, 1.7 มมขนาดอนุภาค) จากเทอร์โม เฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วย 0.1% (v / v) กรดและรูปแบบแอมโมเนียม 4 มมในน้ำ (ชะ) และ 0.1% (v / v) และกรดแอมโมเนียมรูปแบบ 4 มิลลิในเมทานอล (ชะ B) การวิเคราะห์เริ่มต้นด้วย 95% ของเอชะหลังจาก1 นาที, เปอร์เซ็นต์นี้ลดลงเป็นเส้นตรงให้เหลือ 0% ใน 7.0 นาที องค์ประกอบนี้ถูกจัดขึ้นในช่วง 4.0 นาทีและเพิ่มขึ้นอีกถึง 95% ใน 0.5 นาทีตามด้วยเวลาใหม่สมดุล 1.5 นาที (เวลาทำงานทั้งหมด¼ 14.0 นาที) อัตราโอ๊ยชั้นถูก 0.3 มิลลิลิตร 1 นาทีและอุณหภูมิคอลัมน์ที่ถูกกำหนดวันที่ 30 1C aliquots 10 มิลลิลิตรของสารสกัดจากตัวอย่างที่ถูกฉีดเข้าไปในระบบโครมา. ระบบ UHPLC ถูกคู่กับขั้นตอนเดียว Orbitrap สเปกโตรมิเตอร์มวล (Exactive ™, เทอร์โมฟิชเชอร์ scienti Fi คเบรเมน-GER-อีกหลายคน) การดำเนินงานที่มีอินเตอร์เฟซ Electrospray อุ่น (HESI- ครั้งที่สองเทอร์โมฟิชเชอร์ scienti สาย C, San Jose, CA, USA) ในเชิงบวก (ESI ไทย) และโหมดการไอออไนซ์ลบ (ESI) โดยใช้พารามิเตอร์การพัฒนาก่อนหน้านี้ [27] สเปกตรัมมวลได้มาโดยใช้ฟังก์ชั่นการเข้าซื้อกิจการไอเอ็นจี alternat- สี่ (1) MS เต็ม ESI TH, โดยไม่มีการกระจายตัว (แยกออกจากกัน collisional สูง (HCD) เซลล์ชนถูกปิด) มวลการแก้ไขอำนาจ¼ 25000 FWHM; เวลาสแกน¼ 0.25 วินาที (2) การกระจายตัวทุกไอออน (AIF) ESI TH, กับ mentation frag- (HCD บน¼พลังงานชน 30 eV) มวลการแก้ไขอำนาจ¼ 10000 FWHM; เวลาสแกน¼ 0.10 วินาที (3) เต็มรูปแบบ MS, ESI-ใช้การตั้งค่าสำหรับการอธิบาย (1); และ (4) AIF, ESI-ใช้การตั้งค่าสำหรับการอธิบาย (2) ช่วงมวลชนในการทดลองการสแกนเต็มรูปแบบตั้งอยู่ที่ม. / Z 70-1000 การวิเคราะห์ทั้งหมดถูกดำเนินการโดยไม่ต้องมวลล็อค ความถูกต้องมวลได้รับการตรวจสอบอย่างระมัดระวังดังนี้การตรวจสอบทุกวันด้วยวิธีการแก้ปัญหาการผสมการสอบเทียบ (ดูมาตรา 2.1); การประเมิน (สัปดาห์ละครั้ง) และการสอบเทียบเมื่อจำเป็น (ทุกสองสัปดาห์อย่างน้อย) ข้อมูลที่ได้มาใช้เทียบภายนอกเมทริกซ์ที่จับคู่โหมดการและพวกเขาได้รับการประมวลผลโดยใช้รุ่น Xcalibur ™ 2.2.1 (เทอร์โมฟิชเชอร์ scienti สาย C, Les Ulis, ฝรั่งเศส) กับเบราว์เซอร์ดิ้นรนและ Quan- การตรวจสอบยอดเจเนซิสถูกนำมาใช้ ToxID ™ 2.1.1 (อัตโนมัติแต่งงานแล้วซอฟแวร์การคัดกรองสารเทอร์โม scienti Fi ค) ถูกนำมาใช้ในการคัดกรองและ LCQuan ™ 2.6 ซอฟแวร์ (เทอร์โม scienti Fi ค) ที่ใช้สำหรับไอออนบวก Fi quanti ระหว่างการตรวจสอบวิธีการและวิเคราะห์ตัวอย่าง