abstract
2.1. Sample collection and pathogen isolation
A survey was conducted in August 2014 across the southern region of Alberta to assess the occurrence and impact of root rot on soybean crops. Pathogen isolations were made following the pro- cedure described by Dorrance et al. (2008). Briefly, roots with typical rot symptoms were washed under running tap water and cut into small pieces (~1 cm in length) with a sharp knife. The root pieces were placed in a 0.5% sodium hypochlorite solution for 30 s to 1 min in a laminar flow hood to surface-sterilize the tissue, rinsed three times with sterile distilled water, and then placed on sterile paper towels to remove excess water. The surface- sterilized root pieces were transferred into Petri dishes filled with pentachloronitrobenzene-benomyl-neomycin-iprodione-chloram- phenicol (PBNIC) agar, a selective growth medium (Schmitthenner et al., 1994). The PBNIC agar was prepared with some modifications as described by Dorrance et al. (2008): Filtered V-8 juice 40 mL; CaCO3 0.6 g; Bacto yeast extract (Sigma-Aldrich, Saint Louis, MO, USA) 0.2 g; sucrose 1.0 g; Bacto agar 20.0 g (BD Diagnostic Systems, Sparks, MD, USA); distilled water 1000 mL; benomyl 0.0050 g; (Dow AgroSciences, Edmonton, AB) pentachloronitrobenzene 0.0405 g (Sigma-Aldrich); iprodione 0.02 g (Bayer CropScience Inc., Calgary, AB); neomycin sulphate 0.1 g (Sigma-Aldrich); and chlor- amphenicol 0.01 g (Sigma-Aldrich). After placing the root pieces on the agar, the agar layer was picked up from the Petri dish with a spatula and flipped back onto the dish so that the root pieces were sandwiched between the bottom of the dish and the agar. The agar layer was cut close to the edge of the plate and pressed gently around each root piece with a sterile spatula to seal the agar to the bottom of the dish. The Petri dishes were incubated under
นามธรรม
2.1 การเก็บตัวอย่างและการแยกเชื้อ
จากการสำรวจได้ดำเนินการในสิงหาคม 2014 ทั่วภาคใต้ของอัลเบอร์ต้าในการประเมินการเกิดขึ้นและผลกระทบของโรครากเน่าในพืชถั่วเหลือง isolations เชื้อโรคได้ทำดังต่อไปนี้ทางกระบวนการอธิบายโดย Dorrance et al, (2008) สั้น ๆ , รากที่มีอาการเน่าทั่วไปถูกล้างภายใต้น้ำประปาและตัดเป็นชิ้นเล็ก ๆ (~ 1 ซม. ยาว) ด้วยมีดคม ชิ้นรากถูกวางไว้ในสารละลายโซเดียมไฮโปคลอไรต์ 0.5% เป็นเวลา 30 วินาทีถึง 1 นาทีในตู้ดูดไหลไปยังพื้นผิวฆ่าเชื้อเนื้อเยื่อล้างสามครั้งด้วยน้ำกลั่นผ่านการฆ่าเชื้อแล้ววางไว้บนผ้าขนหนูกระดาษปลอดเชื้อเพื่อเอาน้ำส่วนเกิน surface- ฆ่าเชื้อชิ้นรากถูกโอนเข้ามาในจานเลี้ยงเชื้อที่เต็มไปด้วย pentachloronitrobenzene-benomyl-neomycin-iprodione-chloram- phenicol (PBNIC) วุ้นเป็นสื่อการเจริญเติบโตของการคัดเลือก (Schmitthenner et al., 1994) PBNIC วุ้นถูกจัดทำขึ้นด้วยการปรับเปลี่ยนบางอย่างตามที่อธิบาย Dorrance et al, (2008): กรอง V-8 น้ำ 40 มล; CaCO3 0.6 กรัม Bacto สกัดจากยีสต์ (Sigma-Aldrich, Saint Louis, มิสซูรี, สหรัฐอเมริกา) 0.2 กรัม ซูโครส 1.0 กรัม Bacto วุ้น 20.0 กรัม (BD วินิจฉัยระบบ, ประกายไฟ, MD, USA); น้ำกลั่น 1,000 มล; benomyl 0.0050 กรัม (Dow AgroSciences เอดมันตัน, AB) pentachloronitrobenzene 0.0405 กรัม (Sigma-Aldrich); iprodione 0.02 กรัม (ไบเออร์ CropScience อิงค์ Calgary, AB); neomycin ซัลเฟต 0.1 กรัม (Sigma-Aldrich); และ chlor- amphenicol 0.01 กรัม (Sigma-Aldrich) หลังจากที่วางชิ้นรากบนวุ้นชั้นวุ้นถูกหยิบขึ้นมาจากจานเลี้ยงเชื้อด้วยไม้พายและพลิกกลับขึ้นไปบนจานเพื่อให้ชิ้นรากถูกคั่นกลางระหว่างด้านล่างของจานและวุ้นที่ ชั้นวุ้นถูกตัดใกล้กับขอบของแผ่นและกดเบา ๆ รอบ ๆ ชิ้นรากแต่ละคนมีไม้พายผ่านการฆ่าเชื้อในการปิดผนึกวุ้นไปที่ด้านล่างของจาน จาน Petri ถูกบ่มภายใต้
การแปล กรุณารอสักครู่..
