ของ Helicase unwinding assay was pe

ของ Helicase unwinding assay was performed as described previously
[26]. Reactions (20 _l) contained 0.5 nM substrate, and the
indicated concentrations of WRN wild type and mutant protein
in 40 mM Tris–HCl, pH 8.0, 50 mM NaCl, 5 mM MgCl2, 100 _g/ml
BSA, 2 mM ATP, 1 mM DTT. Reactions were carried out at 37 ◦C
for 30 min, and terminated by the addition of 10 _l of SDS stop
solution (2% SDS, 50 mM EDTA, 30% glycerol, 0.1% bromophenol
blue, 0.1% xylene cyanol). Products were separated on 8% nondenaturing
polyacrylamide gel. Radiolabeled DNA was visualized
using Typhoon phosphorimager (Typhoon 9400, GE Healthcare)
and quantified using ImageQuant software (Molecular Dynamics).
For normal forked duplex substrates, following oligonucleotides
were used: 5_-TTTTTTTTTTTTTTTGAGTGTGGTGTACATGCACTAC-
3_, and 5_-GTAGTGCATGTACACCACACTCTTTTTTTTTTTTTTT-3_.
Following oligonucleotides were used for blocked substrate:
5_-TˆTTTTTTTTTTTTTTGAGTGTGGTGTACATGCACTAˆC-3_, and 5_-
GˆTAGTGCATGTACACCACACTCTTTTTTTTTTTTTTˆT-3_, which contain

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ของ helicase ทดสอบคลี่คลายได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้
[26] ปฏิกิริยา (20 _L) ที่มีพื้นผิวนาโนเมตร 0.5, และ
ที่ระบุความเข้มข้นของป่าประเภท WRN
และโปรตีนกลายพันธุ์ใน 40 มม. tris-HCL, pH 8.0, โซเดียมคลอไรด์ 50 มม. , 5 มม. MgCl2, 100 _G / ml
BSA, 2 มม. เอทีพี 1 มม. dtt ปฏิกิริยาที่ได้ดำเนินการที่อุณหภูมิ 37 ◦ C
เป็นเวลา 30 นาทีและสิ้นสุดลงโดยนอกเหนือจาก 10 _L ของการแก้ปัญหา SDS หยุด
(2% SDS,50 มม. EDTA, กลีเซอรอล 30%, 0.1% bromophenol cyanol ไซลีน
ฟ้า, 0.1%) ผลิตภัณฑ์ที่ถูกแยกออกเมื่อวันที่ 8% nondenaturing เจล polyacrylamide
dna radiolabeled เป็นรูปธรรม
ใช้ phosphorimager พายุไต้ฝุ่น (Typhoon 9400, จีอีเฮ)
และปริมาณการใช้ซอฟต์แวร์ imagequant (กลศาสตร์โมเลกุล)
ปกติพื้นผิวเพล็กซ์คดเคี้ยวตาม oligonucleotides
ถูกนำมาใช้.. 5_-tttttttttttttttgagtgtggtgtacatgcactac-
3_ และ 5_-gtagtgcatgtacaccacactcttttttttttttttt-3_
oligonucleotides ต่อไปนี้ถูกนำมาใช้เป็นสารตั้งต้นสำหรับบล็อก:
5_-tttttttttttttttgagtgtggtgtacatgcactac-3_ และ 5_-
gtagtgcatgtacaccacactcttttttttttttttt-3_ ซึ่งมี

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ทำการทดสอบ unwinding Helicase นั้น ๆ ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้
[26] ปฏิกิริยา (20 _l) ประกอบด้วยพื้นผิว nM 0.5 และ
ระบุความเข้มข้นของชนิดป่า WRN และโปรตีนกลายพันธุ์
40 มม. Tris–HCl ค่า pH 8.0, 50 มม. NaCl, 5 mM MgCl2, _g 100 ml
บีเอสเอ 2 มม. ATP, 1 mM DTT ปฏิกิริยาได้ดำเนินการใน 37 ◦C
สำหรับ 30 นาที และยกเลิก โดยการเพิ่ม _l 10 ของ SDS หยุด
โซลูชัน (2% SDS 50 mM EDTA กลีเซอร 30%, 0.1% bromophenol
สีฟ้า 0.1% ไซ cyanol) ผลิตภัณฑ์ถูกแยกจากกันใน 8% nondenaturing
polyacrylamide เจ ดีเอ็นเอ radiolabeled มี visualized
ใช้ phosphorimager ลม (ลม 9400 สุขอนามัย GE)
และ quantified โดยใช้ซอฟต์แวร์ ImageQuant (โมเลกุล Dynamics) .
สำหรับปกติ forked พื้นผิวหน้า ต่อไปนี้ oligonucleotides
ใช้: 5_ - TTTTTTTTTTTTTTTGAGTGTGGTGTACATGCACTAC-
3_ และ 5_-GTAGTGCATGTACACCACACTCTTTTTTTTTTTTTTT-3_.
ต่อ oligonucleotides ใช้สำหรับพื้นผิวที่ถูกบล็อค:
5_ TˆTTTTTTTTTTTTTTGAGTGTGGTGTACATGCACTAˆC 3_ และ 5_-
GˆTAGTGCATGTACACCACACTCTTTTTTTTTTTTTTˆT-3_ ซึ่งประกอบด้วย

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เพลิดเพลินใจไปสอบของ helicase ได้ดำเนินการตามที่ได้อธิบายไว้ก่อนหน้านี้
[ 26 ] การตอบสนอง( 20 _l )มีอยู่ 0.5 ,ชิ้นส่วน,และ
ระบุความเข้มข้นของ wrn ป่าและ ประเภท โปรตีน mutant
ใน 40 มม.ผลิตไฟฟ้าราชบุรีโฮลดิ้งจำกัด - HCL /, pH 8.0 , 50 มม. NaCl , 5 มม. mgcl2 , 100 _ g / ML
BSA , 2 ม.ม. ATP , 1 มม. dtt. การตอบสนองเป็นไปในนาที 37 ◦c
สำหรับ 30 และสิ้นสุดลงโดยการเพิ่มเซิร์ฟเวอร์ SDS 10 _l ของเซิร์ฟเวอร์ SDS หยุด
โซลูชัน( 2%50 มม. edta กลีซ - เออะริน 30% 0.1 bromophenol %
สีฟ้า 0.1% cyanol xylene ) ผลิตภัณฑ์ แยกบนเจล nondenaturing
polyacrylamide 8% radiolabeled ดีเอ็นเอเป็นพายุไต้ฝุ่นเคียงข้าง
การใช้ phosphorimager (พายุไต้ฝุ่น 9400 , GE Healthcare ,)
และคำนวณออกมาเป็นรูปธรรมได้หรือการใช้ซอฟต์แวร์ imagequant ( Dynamics โมเลกุล)..
สำหรับ substrates Duplex ง่ามปกติต่อไปนี้:
oligonucleotides ได้ถูกนำมาใช้5 ___ - tttttttttttttttgagtgtggtgtacatgcactac -
3 ___และ 5 ___ - gtagtgcatgtacaccacactcttttttttttttttt - 3 ___.
ต่อไปนี้: oligonucleotides ได้ถูกนำมาใช้สำหรับยึดไดย์กับบล็อค:
5 ___ - tˆttttttttttttttgagtgtggtgtacatgcactaˆc - 3 ___และ 5 ___ -
gˆtagtgcatgtacaccacactcttttttttttttttˆt - 3 ___ซึ่งประกอบด้วย