AbstractThe prospective isolation o

Abstract
The prospective isolation of purified stem cell populations has dramatically altered the field of stem cell biology, and it has been a major focus of research across tissues in different organisms. Muscle stem cells (MuSCs) are now among the most intensely studied stem cell populations in mammalian systems, and the prospective isolation of these cells has allowed cellular and molecular characterizations that were not dreamed of a decade ago. In this protocol, we describe how to isolate MuSCs from limb muscles of adult mice by fluorescence-activated cell sorting (FACS). We provide a detailed description of the physical and enzymatic dissociation of mononucleated cells from limb muscles, a procedure that is essential in order to maximize cell yield. We also describe a FACS-based method that is used subsequently to obtain highly pure populations of either quiescent or activated MuSCs (VCAM(+)CD31(-)CD45(-)Sca1(-)). The isolation process takes ∼5-6 h to complete. The protocol also allows for the isolation of endothelial cells, hematopoietic cells and mesenchymal stem cells from muscle tissue.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

บทคัดย่อแยกอนาคตของเซลล์ต้นกำเนิดบริสุทธิ์ประชากรได้เปลี่ยนแปลงอย่างมากด้านชีววิทยาเซลล์ต้นกำเนิด และได้รับความสำคัญของงานวิจัยในเนื้อเยื่อในสิ่งมีชีวิตที่แตกต่างกัน กล้ามเนื้อเซลล์ต้นกำเนิด (MuSCs) ขณะนี้อยู่ระหว่างประชากรสุดเจี๊ยบศึกษาสเต็มเซลล์ในระบบ mammalian และแยกเป้าหมายของเซลล์เหล่านี้ทำให้ได้โมเลกุล และเซล characterizations ที่มีฝันของทศวรรษที่ผ่านมา ในโพรโทคอลนี้ เราอธิบายวิธีการแยก MuSCs จากกล้ามเนื้อขาของหนูผู้ใหญ่โดยใช้ fluorescence เซลล์เรียงลำดับ (FACS) เรามีคำอธิบายโดยละเอียดของการร่างกาย และเอนไซม์ในระบบ dissociation mononucleated เซลล์จากกล้ามเนื้อขา ขั้นตอนที่จำเป็นเพื่อเพิ่มผลผลิตเซลล์ เรายังอธิบายวิธีใช้ FACS ที่ใช้ต่อประชากรสูงบริสุทธิ์ของ MuSCs ไม่มีการทำ หรือเปิด (VCAM(+)CD31(-)CD45(-)Sca1(-)) รับ การแยกใช้ h ∼5-6 สมบูรณ์ โพรโทคอลยังช่วยให้สามารถแยกเซลล์บุผนังหลอดเลือด เซลล์กำเนิดของเม็ดเลือด และ mesenchymal สเต็มเซลล์จากเนื้อเยื่อกล้ามเนื้อ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

บทคัดย่อแยกที่คาดหวังของประชากรสเต็มเซลล์บริสุทธิ์มีการเปลี่ยนแปลงอย่างรวดเร็วสาขาชีววิทยาเซลล์ต้นกำเนิดและจะได้รับการมุ่งเน้นที่สำคัญของการวิจัยทั่วเนื้อเยื่อในสิ่งมีชีวิตที่แตกต่างกัน เซลล์ต้นกำเนิดของกล้ามเนื้อ (MuSCs) ตอนนี้ในที่สุดการศึกษาอย่างเข้มข้นประชากรเซลล์ต้นกำเนิดในระบบการเลี้ยงลูกด้วยนมและแยกที่คาดหวังของเซลล์เหล่านี้ได้รับอนุญาตให้สอบของเซลล์และโมเลกุลที่ไม่ได้ฝันถึงทศวรรษที่ผ่านมา ในโปรโตคอลนี้เราจะอธิบายวิธีการแยก MuSCs จากกล้ามเนื้อแขนขาของหนูผู้ใหญ่โดยเรียงลำดับเซลล์เรืองแสงเปิดใช้งาน (FACS) เราให้คำอธิบายรายละเอียดของการแยกตัวออกทางกายภาพและเอนไซม์ของเซลล์ mononucleated จากกล้ามเนื้อแขนขาขั้นตอนที่จำเป็นเพื่อเพิ่มผลผลิตของเซลล์ นอกจากนี้เรายังอธิบายวิธีการมาซึ่งตามที่ถูกนำมาใช้ในภายหลังเพื่อให้ได้ประชากรบริสุทธิ์สูงของทั้ง MuSCs นิ่งหรือเปิดใช้งาน (VCAM (+) CD31 (-) CD45 (-) Sca1 (-)) กระบวนการแยกที่เกิด ~5-6 ชั่วโมงจะเสร็จสมบูรณ์ โปรโตคอลยังช่วยให้การแยกเซลล์บุผนังหลอดเลือดเซลล์เม็ดเลือดและเซลล์ต้นกำเนิด mesenchymal จากเนื้อเยื่อของกล้ามเนื้อ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

นามธรรม
แยกสเต็มเซลล์ในอนาคตให้ประชากรได้เป็นคุ้งเป็นแควเปลี่ยนสาขาชีววิทยาเซลล์ต้นกําเนิด , และได้รับการมุ่งเน้นที่สำคัญของการวิจัยในเนื้อเยื่อของสิ่งมีชีวิตที่แตกต่างกัน สเต็มเซลล์กล้ามเนื้อ ( muscs ) อยู่ในหมู่มากที่สุดตลอดการศึกษาสเต็มเซลล์ในระบบการควบคุมประชากร ,และอนาคตของการแยกเซลล์เหล่านี้ได้รับอนุญาตเซลล์และโมเลกุล characterizations ที่ไม่ได้ฝันของทศวรรษที่ผ่านมา ในขั้นตอนนี้เราจะอธิบายวิธีการแยก muscs จากขากล้ามเนื้อของหนูผู้ใหญ่โดยการเปิดเซลล์เรียง ( facs ) เรามีรายละเอียดของการทางกายภาพและเอนไซม์ของ mononucleated เซลล์จากกล้ามเนื้อขา ,ขั้นตอนที่จำเป็นในการเพิ่มผลผลิตเซลล์ เราก็อธิบาย facs ตามวิธีที่ใช้ในภายหลังเพื่อให้ได้ประชากรสูงเพียว ทั้งนิ่ง หรือเปิดใช้งาน muscs ( vcam ( ) cd31 cd45 ( - ) ( - ) ( - ) sca1 ) กระบวนการแยกเอา∼ 5-6 ชั่วโมงให้เสร็จสมบูรณ์ พิธีสารยังช่วยให้สำหรับการแยกเยื่อบุเซลล์เม็ดโลหิตมีเซนไคมอลสเต็มเซลล์จากเซลล์และเนื้อเยื่อของกล้ามเนื้อ