PCR Amplification Using RAPD Primer

PCR Amplification Using RAPD Primers
RAPD analysis was performed in five DNA sample with one RAPD primer OPB-7 (Integrated DNA Technologies,
Germany). In 25 μL reaction mixture 1x buffer (50mM KCL, 10mM tris-HCL, 1.5mM MgCl2), 10mM dNTP’s
(Sigma), 1.0U Taq DNA polymerase (Bangalore Genei), 20pmol primers (IDT, Germany) and 30ng of template
DNA to perform PCR reaction in Eppendrof Mastercycler, Germany. Amplification reaction were initiated by 3 min
pre-denaturation at 940C and followed by 35 cycles each at 920C, 540C for 1 min, and 720C for 2 min. A final
extension step at 720C for 10 min was performed after 35 cycles. PCR amplified products were separated by
electrophoresis in 2.0% agarose gel at 90 V in 1x TAE buffer. Gel stained with Ethidium Bromide and then was
imaged in Alpha DigiDoc (UV-solo model) gel documentation system.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ไพรเมอร์อาร์เอพีดีใช้ของ PCR ขยายงานในห้าอย่างดีเอ็นเอกับหนึ่งอาร์เอพีดีพื้น OPB-7 (เทคโนโลยีดีเอ็นเอ อาร์เอพีดีวิเคราะห์เยอรมนี) ใน 25 μL ปฏิกิริยาผสม 1 x บัฟเฟอร์ (KCL ทริสเรทติ้ง 10 มม. 50 มม.-HCL, 1.5 มม. MgCl2), dNTP 10 มม.(ซิกมา), 1.0U Taq DNA พอลิเมอเรส (บังกาลอร์ Genei), ไพรเมอร์ 20pmol (IDT เยอรมนี) และ 30ng ของแม่ดีเอ็นเอเพื่อทำปฏิกิริยา PCR ใน Eppendrof Mastercycler เยอรมนี ปฏิกิริยาขยายได้เริ่มต้น ด้วย 3 นาทีdenaturation ก่อนที่ 940 C และตาม ด้วย 35 รอบละ 920 C, 540 C ใน 1 นาที และ 720 C สำหรับ 2 นาที ตัวสุดท้ายมีดำเนินการขั้นตอนการขยายที่ 720C สำหรับ 10 นาทีหลังจากรอบ 35 PCR ขยายผลิตภัณฑ์ถูกคั่นด้วยelectrophoresis ใน 2.0% agarose เจลที่ 90 V ในบัฟเฟอร์เต้ x 1 สีกับโบรไมด์ Ethidium และถูกแล้วimaged ในระบบเอกสารเจ DigiDoc อัลฟา (UV-โซรุ่น)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

PCR Amplification
ใช้ไพรเมอร์อาร์เอพีวิเคราะห์ดีเอ็นเอที่ได้ดำเนินการในห้าตัวอย่างดีเอ็นเอที่มีไพรเมอร์RAPD หนึ่ง OPB-7 (DNA
แบบบูรณาการเทคโนโลยีเยอรมนี) ใน 25 ไมโครลิตรปฏิกิริยาส่วนผสมบัฟเฟอร์ 1x (50mm KCL, 10 mM tris-HCL, 1.5mm MgCl2) 10 mM dNTP ของ
(ซิกม่า) 1.0U Taq ดีเอ็นเอโพลิเมอร์ (บังกาลอร์ Genei) ไพรเมอร์ 20pmol (ราชกิจจานุเบกษา, เยอรมนี) และ 30ng
แม่แบบดีเอ็นเอทำปฏิกิริยา PCR ใน Eppendrof Mastercycler เยอรมนี ปฏิกิริยาการขยายถูกริเริ่มโดย 3 นาที
denaturation ก่อนที่ 940C และตามด้วย 35 รอบแต่ละ 920C, 540C เป็นเวลา 1 นาทีและ 720C เป็นเวลา 2 นาที สุดท้ายขั้นตอนการขยายที่ 720C เป็นเวลา 10 นาทีหลังจากที่ได้ดำเนินการ 35 รอบ
PCR
ผลิตภัณฑ์ขยายถูกแยกจากกันโดยอิเล็ก2.0% agarose เจลที่ 90 V ในบัฟเฟอร์ 1x TAE เจลย้อมด้วยสี Ethidium Bromide
แล้วถูกถ่ายภาพในDigiDoc อัลฟา (รุ่น UV-เดี่ยว) ระบบเอกสารเจล

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การขยาย PCR โดยใช้ไพรเมอร์โดยการวิเคราะห์ RAPD
5 ตัวอย่างดีเอ็นเอด้วย RAPD primer opb-7 ( รวมดีเอ็นเอเทคโนโลยี
เยอรมนี ) 25 μ L ปฏิกิริยาผสมใช้บัฟเฟอร์ ( 50mm KCl 10mm นอกจากนี้ HCl , 1.5mm MgCl2 ) , 10mm dntp
( Sigma ) 1.0u แท็ค DNA polymerase ( บังกาลอร์ genei ) 20pmol PCR ( ไอดีที , เยอรมนี ) และ 30ng ดีเอ็นเอแม่แบบ
แสดงปฏิกิริยา PCR ใน mastercycler eppendrof ,เยอรมนี ปฏิกิริยาแบบถูกริเริ่มโดย 3 นาที
( ที่ 940c ก่อนและตามด้วย 35 รอบแต่ละที่ 920c 540c , 1 นาที และ 720c 2 นาทีสุดท้าย
ส่วนขยายขั้นตอน 720c 10 นาทีได้ หลังจาก 3 รอบ เพื่อขยายผลิตภัณฑ์โดยแยก
electrophoresis ใน 2.0 % เจลที่ 90 V ใน 1X แท บัฟเฟอร์ ทิเดียมโบรไมด์เจลที่เปื้อนแล้วคือ
อื่นๆในอัลฟา digidoc ( แบบเดี่ยว UV ) เอกสารในระบบเจล