3.2. Enzyme-assisted stevioside ext

3.2. Enzyme-assisted stevioside extraction
3.2.1. Effect of Incubation time
An incubation period of 45 min was found to be optimum for
hemicellulase (1.0%, w/v)-based extraction of stevioside
(152.00 ± 0.05 lg). However, for pectinase and cellulase, the highest
recovery was achieved in 60 min. Pectinase-assisted extraction
of stevioside (333.28 ± 2.20 lg) was more effective than cellulose-
(128.05 ± 0.05 lg) or hemicellulase- (152 ± 0.05 lg) assisted
extraction (Fig 3). Cellulase and hemicellulase act on cellulose
and cleave beta-1,4 linkages, which are present in the primary wall
beneath the first layer of the middle lamella of the plant cell wall,
and catalyse its breakdown into glucose and cellobiose. A large in-
Table 1
Stevioside yields from experimental and predicted methods (using model equation) with different conditions obtained from central composite design (CCD).
Standard order Pectinase (%, w/w) Cellulase (%, w/w) Hemicellulase (%, w/w) Temperature (C) Incubation time (min) Stevioside concentration (lg)
A B C D E Experimental Predicted
1 3.00 3.00 1.00 60.00 20.00 105.00 133.22
2 3.00 1.00 3.00 60.00 20.00 385.00 413.22
3 1.00 3.00 3.00 45.00 60.00 340.00 368.22
4 3.00 3.00 3.00 45.00 20.00 785.00 813.22
5 3.00 3.00 1.00 45.00 60.00 430.00 458.22
6 3.00 1.00 1.00 60.00 60.00 735.00 763.22
7 1.00 1.00 3.00 60.00 60.00 590.00 618.22
8 1.00 3.00 1.00 60.00 60.00 275.00 303.22
9 3.00 1.00 3.00 45.00 60.00 560.00 588.22
10 1.00 3.00 3.00 60.00 20.00 340.00 368.22
11 1.00 1.00 1.00 45.00 20.00 360.00 416.45
12 0.18 2.00 2.00 52.50 40.00 330.00 278.94
13 3.82 2.00 2.00 52.50 40.00 700.00 648.94
14 2.00 0.18 2.00 52.50 40.00 950.00 898.94
15 2.00 3.82 2.00 52.50 40.00 850.00 798.94
16 2.00 2.00 0.18 52.50 40.00 505.00 453.94
17 2.00 2.00 3.82 52.50 40.00 927.00 875.94
18 2.00 2.00 2.00 38.84 40.00 130.00 78.94
19 2.00 2.00 2.00 66.16 40.00 110.00 58.94
20 2.00 2.00 2.00 52.50 3.58 921.00 869.94
21 2.00 2.00 2.00 52.50 76.42 975.00 923.94
22 2.00 2.00 2.00 52.50 40.00 785.00 819.38
23 2.00 2.00 2.00 52.50 40.00 787.00 819.38
24 2.00 2.00 2.00 52.50 40.00 784.00 819.38
25 2.00 2.00 2.00 52.50 40.00 780.00 819.38
26 2.00 2.00 2.00 52.50 40.00 782.00 819.38
O CH2OH
OH
OH
O
O
HOH2C
OH
HO
HO
CH3 CH2
O
CH3
(1)
(7)
(2)
(17)
(10) (8)
(5)
(4) (6)
(3)
(9)
(18) (11)
(12)
(13)
(14)
(16)
(19)
(15)
(a)
(b) (c) (d)
(vi) (e) (f)
(E)
(20)
O
O
O
CH2OH
OH
HO
HO
(A)
(B)
(C)
(D)
(F)
(iii) (ii) (i)
(iv) (v)
Fig. 1. Chemical structure of stevioside, based on NMR analysis.
M. Puri et al. / Food Chemistry 132 (2012) 1113–1120 1115
crease in yield (237%) compared to control (solvent-based) was
observed for the pectinase-treated sample. Pectinase (being pectolytic)
has the ability to degrade pectic compounds, which are found
in the middle lamella of primary walls. Increasing extraction times
to 65–70 min did not further increase extraction yields (data not
shown). Thus, enzyme-assisted extraction required less time than
did the conventional method for stevioside extraction, which takes
12 h (Jaitak, Bandana, Singh, & Kaul, 2009). The results for
enzymatic extraction agree with results obtained for other plantbased
bioactives, such as carotenoid (Choudhari & Ananthanarayan,
2007) and polysaccharide (Wu et al., 2007) where cellulase
was used for aiding extraction. These results indicate that degradation
of cell wall polysaccharides is the key step in enhancing yields
of stevioside from S. rebudiana.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

3.2. เอนไซม์ช่วย stevioside สกัด
3.2.1 ผลของเวลาบ่ม
พบเป็นระยะฟักตัว 45 นาทีจะเหมาะสมสำหรับ
hemicellulase (1.0%, w/v) -ตามสกัด stevioside
(152.00 ± 0.05 lg) อย่างไรก็ตาม สำหรับ pectinase และ cellulase สูงสุด
กู้คืนสำเร็จใน 60 นาทีช่วย Pectinase สกัด
ของ stevioside (333.28 ± 2.20 lg) มีประสิทธิภาพกว่าเซลลูโลส -
(128.05 lg ± 0.05) หรือ hemicellulase (152 ± 0.05 lg) ช่วย
สกัด (ฟิก 3) Cellulase และ hemicellulase ดำเนินเซลลูโลส
และ cleave เบต้า 1,4 ลิงค์ ซึ่งอยู่ในผนังหลัก
ใต้ชั้นแรกของ lamella กลางของผนังเซลล์พืช,
และ catalyse แบ่งของกลูโคสและ cellobiose ขนาดใหญ่ใน
ตาราง 1
Stevioside ก่อให้เกิดจากวิธีการทดลอง และคาดการณ์ (ใช้แบบจำลองสมการ) กับเงื่อนไขต่าง ๆ ที่ได้รับจากการออกแบบคอมโพสิตเซ็นทรัล (CCD) .
สั่งมาตรฐาน Pectinase (% w/w) Cellulase (% w/w) Hemicellulase (% w/w) อุณหภูมิ (C) บ่มเวลา (นาที) ความเข้มข้น Stevioside (lg)
A B C D E ทดลองคาดการณ์
1 3.00 3.00 1.00 60.00 20.00 105.00 133.22
2 3.00 1.00 3.00 60413.22 385.00 00 20.00
3 1.00 3.00 3.00 45.00 60.00 340.00 368.22
4 813.22 20.00 785.00 3.00 45.00 3.00 3.00
5 3.00 3.00 1.00 45.00 60.00 430.00 458.22
6 3.00 1.00 1.00 60.00 60.00 735.00 763.22
7 1.00 1.00 3.00 60.00 60.00 618.22 590.00
8 1.00 3.00 1.00 60.00 60.00 275.00 303.22
9 3.00 1.00 3.00 45.00 60.00 588.22 560.00
10 368.22 20.00 340.00 3.00 60.00 1.00 3.00
11 1.00 1.00 1.00 45.00 2000 360.00 416.45
12 278.94 40.00 330.00 2.00 52.50 0.18 2.00
13 3.82 2.00 2.00 52.50 40.00 700.00 648.94
14 2.00 0.18 2.00 52.50 40.00 950.00 898.94
15 2.00 3.82 2.00 52.50 40.00 850.00 798.94
16 2.00 2.00 0.18 52.50 40.00 505.00 453.94
17 2.00 2.00 3.82 52.50 40.00 927.00 875.94
18 78.94 40.00 130.00 2.00 38.84 2.00 2.00
19 58.94 ทะเบียน 110.00 40.00 2.00 66.16 2.00 2.00
20 2.00 2.00 2.00 52.50 358 921.00 869.94
21 2.00 2.00 2.00 52.50 76.42 975.00 923.94
22 2.00 2.00 2.00 52.50 40.00 785.00 819.38
23 2.00 2.00 2.00 52.50 40.00 787.00 819.38
24 2.00 2.00 2.00 52.50 40.00 784.00 819.38
25 2.00 2.00 2.00 52.50 40.00 780.00 819.38
26 2.00 2.00 2.00 52.50 40.00 782.00 819.38
O CH2OH
OH
OH
O
O
HOH2C
OH
โฮจิมินห์
โฮจิมินห์
CH3 CH2
O
CH3
(1)
(7)
(2)
(17)
(10) (8)
(5)
(4) (6)
(3)
(9)
(18) (11)
(12)
(13)
(14)
(16)
(19)
(15)
(a)
(b) (c) (d)
(vi) (e) (f)
(E)
(20)
O
O
O
CH2OH
OH
HO
HO
(A)
(B)
(C)
(D)
(F)
(iii) (ii) (i)
(iv) (v)
Fig. 1 โครงสร้างเคมีของ stevioside ตามวิเคราะห์ NMR.
ม.ปูร้อยเอ็ด al. / 132 เคมีอาหาร (2012) 1113-1120 1115
รอยผลตอบแทน (237%) เมื่อเทียบกับตัวควบคุม (โดยใช้ตัวทำละลาย) ถูก
สังเกตสำหรับตัวอย่าง pectinase ถือว่า Pectinase (ถูก pectolytic)
มีความสามารถในการย่อยสลายสารประกอบ pectic ซึ่งพบ
ใน lamella กลางผนังหลัก เพิ่มเวลาสกัด
ไป 65-70 นาทีได้ไม่เติมเพิ่มผลผลิตสกัด (ข้อมูลไม่
แสดง) ดังนั้น สกัดเอนไซม์ช่วยต้องใช้เวลาน้อยกว่า
ได้วิธีการทั่วไปสำหรับสกัด stevioside ซึ่งใช้
12 h (Jaitak โพก สิงห์ & Kaul, 2009) ผลลัพธ์สำหรับ
สกัดเอนไซม์ในระบบยอมรับกับผลที่ได้อื่น ๆ plantbased
bioactives เช่น carotenoid (Choudhari & Ananthanarayan,
2007) และ polysaccharide (Wu et al., 2007) ที่ cellulase
ใช้สำหรับช่วยงานสกัด ผลลัพธ์เหล่านี้บ่งชี้ว่า ย่อยสลาย
polysaccharides ผนังเซลล์เป็นขั้นตอนสำคัญในการเพิ่มผลผลิต
ของ stevioside จาก S. rebudiana

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

3.2 เอนไซม์ช่วยสกัดสตีวิโอไซ
3.2.1 ผลของเวลาบ่มเพาะ
ระยะฟักตัวของ 45 นาทีก็พบว่าเป็นที่เหมาะสมสำหรับ
Hemicellulase (1.0% w / v) การสกัดชั่นพุก
(152.00 ± 0.05 LG) แต่สำหรับเพคติเนสและเซลลูเลสที่สูงที่สุด
การกู้คืนก็ประสบความสำเร็จใน 60 นาที การสกัดเพคติเนสช่วย
พุก (333.28 ± 2.20 LG) เป็นมีประสิทธิภาพมากขึ้นกว่า cellulose-
(128.05 ± 0.05 LG) หรือ hemicellulase- (152 ± 0.05 LG) ช่วย
สกัด (รูปที่ 3) เซลลูเลสและ Hemicellulase ดำเนินการกับเซลลูโลส
และยึดเบต้า 1,4 เชื่อมโยงที่มีอยู่ในผนังหลัก
ที่อยู่ใต้ชั้นแรกของใบมีดตรงกลางของผนังเซลล์พืช
และเร่งการสลายของเป็นน้ำตาลกลูโคสและ cellobiose ขนาดใหญ่ทำา
ตารางที่ 1
ผลตอบแทนสตีวิโอไซจากวิธีการทดลองและการคาดการณ์ (โดยใช้สมการแบบจำลอง) ที่มีเงื่อนไขที่แตกต่างจากการออกแบบที่ได้รับประกอบกลาง (CCD)
เพื่อมาตรฐานเพคติ (% w / W) เซลลูเลส (% w / W) Hemicellulase ( % w / W) อุณหภูมิ (องศาเซลเซียส) เวลาบ่มเพาะวิสาหกิจ (นาที) ความเข้มข้นสตีวิโอไซ (LG)
ABCDE การทดลองที่คาดการณ์ไว้
1 3.00 3.00 1.00 60.00 20.00 105.00 133.22
2 3.00 1.00 3.00 60.00 20.00 385.00 413.22
3 1.00 3.00 3.00 45.00 60.00 340.00 368.22
4 3.00 3.00 3.00 45.00 20.00 785.00 813.22
5 3.00 3.00 1.00 45.00 60.00 430.00 458.22
6 3.00 1.00 1.00 60.00 60.00 735.00 763.22
7 1.00 1.00 3.00 60.00 60.00 590.00 618.22
8 1.00 3.00 1.00 60.00 60.00 275.00 303.22
9 3.00 1.00 3.00 45.00 60.00 560.00 588.22
10 1.00 3.00 3.00 60.00 20.00 340.00 368.22
11 1.00 1.00 1.00 45.00 20.00 360.00 416.45
12 0.18 2.00 2.00 52.50 40.00 330.00 278.94
13 3.82 2.00 2.00 52.50 40.00 700.00 648.94
14 2.00 0.18 2.00 52.50 40.00 950.00 898.94
15 2.00 3.82 2.00 52.50 40.00 850.00 798.94
16 2.00 2.00 0.18 52.50 40.00 505.00 453.94
17 2.00 2.00 3.82 52.50 40.00 927.00 875.94
18 2.00 2.00 2.00 38.84 40.00 130.00 78.94
19 2.00 2.00 2.00 66.16 40.00 110.00 58.94
20 2.00 2.00 2.00 52.50 3.58 921.00 869.94
21 2.00 2.00 2.00 52.50 76.42 975.00 923.94
22 2.00 2.00 2.00 52.50 40.00 785.00 819.38
23 2.00 2.00 2.00 52.50 40.00 787.00 819.38
24 2.00 2.00 2.00 52.50 40.00 784.00 819.38
25 2.00 2.00 2.00 52.50 40.00 780.00 819.38
26 2.00 2.00 2.00 52.50 40.00 782.00 819.38
CH2OH O
OH
OH
O
O
HOH2C
OH
HO
HO
CH3 CH2
O
CH3
(1)
( 7)
(2)
(17)
(10) (8)
(5)
(4) (6)
(3)
(9)
(18) (11)
(12)
(13)
(14)
(16)
(19)
(15)
(ก)
(ข) (ค) (ง)
(vi) (จ) (ฉ)
(E)
(20)
O
O
O
CH2OH
OH
HO
HO
(A)
(B)
(C)
(D)
( F)
(iii) (ii) (i)
(iv) (V)
รูปที่ 1 โครงสร้างทางเคมีของสตีวิโอไซขึ้นอยู่กับ NMR วิเคราะห์
เอ็ม Puri และคณะ / อาหารเคมี 132 (2012) 1113-1120 1115
รอยพับผลผลิต (237%) เมื่อเทียบกับการควบคุม (ตัวทำละลาย) ได้
ตั้งข้อสังเกตสำหรับตัวอย่างเพคติเนสได้รับการรักษา เพคติเนส (เป็น pectolytic)
มีความสามารถในการย่อยสลายสารเพคตินซึ่งพบ
ในใบมีดตรงกลางของผนังหลัก เพิ่มขึ้นครั้งสกัด
65-70 นาทีไม่ได้ต่อไปเพิ่มผลผลิตการสกัด (ข้อมูลไม่
แสดง) ดังนั้นการสกัดเอนไซม์ช่วยจำเป็นต้องใช้เวลาน้อยกว่าการ
ทำวิธีการทั่วไปสำหรับการสกัดสตีวิโอไซซึ่งใช้เวลา
12 ชั่วโมง (Jaitak, ผ้าพันคอ, ซิงห์และ Kaul 2009) ผลที่ได้สำหรับ
การสกัดเอนไซม์เห็นด้วยกับผลที่ได้รับสำหรับ plantbased อื่น ๆ
bioactives เช่น carotenoid (Choudhari & Ananthanarayan,
2007) และ polysaccharide (Wu et al. 2007) ที่เซลลูเลส
ที่ใช้สำหรับการช่วยเหลือการสกัด ผลการศึกษานี้ชี้ให้เห็นว่าการย่อยสลาย
ของ polysaccharides ผนังเซลล์เป็นขั้นตอนสำคัญในการเสริมสร้างผลตอบแทน
พุกจากเอ rebudiana

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

3.2 . เอนไซม์ช่วยในการสกัดสตีวิโอไซด์
ดำเนินงาน . ผลของระยะเวลาบ่มฟักตัวของ
เป็น 45 นาที พบว่าเอนไซม์ที่เหมาะสมสำหรับ
( 1.0 % w / v ) ซึ่งการสกัดสตีวิโอไซด์
( 152.00 ± 0.05 LG ) อย่างไรก็ตาม สำหรับเอนไซม์เพคติเนสและเซลลูเลส การกู้คืนสูงสุด
สําเร็จใน 60 นาทีเอนไซม์ช่วยในการสกัดสตีวิโอไซด์ ( 333.28
± 2.20 LG ) มีประสิทธิภาพมากกว่าเซลลูโลส -
( 128 .05 ± 0.05 LG ) หรือเอนไซม์ ( 152 ± 0.05 LG ) ช่วย
การสกัด ( ตารางที่ 3 ) เอนไซม์เซลลูเลส และทำบนเซลลูโลสและ beta-1,4
ติดลิงค์ ซึ่งมีอยู่ใน
ผนังเซลล์ปฐมภูมิภายใต้ชั้นของโครงสร้าง กลางของผนังเซลล์ของพืช และกระตุ้นการสลาย
, ในกลูโคสและเซลโลไบโอส . ขนาดใหญ่ในตารางที่ 1
-
สตีวิโอไซด์และคาดการณ์ผลผลิตจากการทดลองวิธีการ ( ใช้แบบสมการ ) ที่มีเงื่อนไขที่ได้จากการออกแบบส่วนผสมกลาง ( CCD ) .
เอนไซม์เพื่อมาตรฐาน ( % w / w ) เอนไซม์ ( % w / w ) เอนไซม์ ( % w / w ) อุณหภูมิ (  C ) เวลาในการบ่ม ( มิน ) ( สตีวิโอไซด์ความเข้มข้น LG )
A B C D E ทดลองทำนาย
1 3.00 3.00 1.00 60.00 20.00 105.00 133.22
2 3.00 1.00 3.00 6000 บาท 385.00 413.22
3 1.00 3.00 3.00 45.00 60.00 340.00 368.22
4 3.00 3.00 3.00 45.00 บาท 785.00 813.22
5 3.00 3.00 1.00 45.00 60.00 430.00 458.22
6 3.00 1.00 1.00 60.00 60.00 735.00 763.22
7 1.00 1.00 3.00 60.00 60.00 แดง 618.22
8 1.00 3.00 1.00 60.00 60.00 275.00 303.22
9 15.00 1.00 3.00 45.00 60.00 560.00 588.22
10 1.00 3.00 3.00 60.00 20.00 340.00 368.22
11 1.00 1.00 1.00 45.00 2000 360.00 416.45
12 เท่ากับ 2.00 2.00 52.50 40.00 330.00 278.94
13 3.82 2.00 2.00 2.00 52.50 40.00 700.00 648.94
14 เท่ากับ 2.00 52.50 40.00 950.00 898.94
15 2.00 3.82 2.00 52.50 40.00 850.00 798.94
16 2.00 2.00 0.18 52.50 40.00 505.00 453.94
17 2.00 2.00 3.82 52.50 40.00 927.00 875.94 2.00 2.00 2.00 38.84 40.00
18 หน้าอัตราดอกเบี้ย 2.00 2.00 2.00
19 66.16 40.00 520.00 บาท 58.94
20 2.00 2.00 2.00 52.50 358 921.00 869.94 2.00 2.00 2.00 52.50
21 76.42 975.00 2.00 2.00 2.00 923.94
22 52.50 40.00 785.00 819.38 23 2.00 2.00 2.00 52.50
2
24 2.00 2.00 2.00 787.00 819.38 52.50 40.00 784.00 2.00 2.00 2.00 819.38
25 52.50 40.00 780.00 2.00 2.00 2.00 819.38
26 52.50 40.00 782.00 819.38
o

ch2oh โอ้โอ้
o
O
hoh2c


โอ้โฮโฮ
CH3 CH3
C
o
( 1 )
( 7 )
2 )

( 17 ) ( 10 ) ( 8 )

( 4 ) ( 5 ) ( 6 ) ( 3 ) (


( 9 ) 18 ) ( 11 ) ( 12 )

( 13 ) ( 14 )

( 16 ) ( 19 )

( 15 )
( )
( b ) ( c ) ( d )
( 6 ) ( e ) ( F )
( E )
( 20 )
O
O
O
ch2oh


โอ้โฮโฮ
( )
( B )
( C )
( D )
( F )
( III ) ( II ) ( ฉัน ) ( 4 ) ( 5 )

รูปที่ 1 โครงสร้างทางเคมีของสตีวิโอไซด์ ตามการวิเคราะห์ NMR
ม. ปุริ et al . อาหาร / เคมี 132 ( 2012 ) 1185 – 1120 เหลือ
รอยพับในผลผลิต ( 237 ) % เมื่อเทียบกับการควบคุม ( ตัวทำละลายตาม )
) เอนไซม์รักษาตัวอย่าง เอนไซม์เพคติเนส ( pectolytic )
มีความสามารถในการลดที่มีสารประกอบที่พบในกลางของผนัง
โครงสร้างหลัก เพิ่มการสกัดครั้ง
65 - 70 นาที ไม่ได้เพิ่มการสกัดผลผลิต ( ข้อมูลไม่
แสดง ) ดังนั้น เอนไซม์ ช่วยสกัดต้องน้อยกว่า
ได้ตามปกติสำหรับการสกัดสตีวิโอไซด์ ซึ่งใช้เวลา
12 H ( jaitak , ผ้าพันคอ , ซิงห์& , เคาท์ , 2009 ) ผลการค้นหาสำหรับ
การสกัดเอนไซม์ เห็นด้วยกับผลลัพธ์ที่ได้ สำหรับอื่น ๆ plantbased
bioactives เช่นแคโรทีนอยด์ ( choudhari & ananthanarayan
, 2007 ) และพอลิแซ็กคาไรด์ ( Wu et al . , 2007 ) ซึ่งเซลลูเลส
ใช้เพื่อการสกัด ผลลัพธ์เหล่านี้บ่งชี้ว่า การสลายตัวของผนังเซลล์
polysaccharides เป็นขั้นตอนสำคัญในการเพิ่มผลผลิต
สตีวิโอไซด์จาก S . rebudiana .