Fatty acid composition of isolated

Fatty acid composition of isolated lipid droplets and young adult
nematodeswas determined by gas chromatography/mass spectrometry
(GC/MS) as previously described [30,31]. Separation of the TAG and
phospholipid fractions used a two-solvent TLC protocol. Lipids were extracted
by adding 5 ml of ice-cold chloroform:methanol (1:1) and incubating
overnight at 20 °C with occasional shaking. A solution of 0.2 M
H3PO4 and 1 M KCl was added to samples, which resulted in phase
separation of the organic and aqueous phase. The organic phase was
removed and dried under argon, then resuspended in chloroform.
Samples were loaded in triplicate, and TLC plates were developed two
thirds of the way up the plate in the first solvent system:
chloroform:methanol:water:acetic acid (65:43:3:2.5), dried, and then
the second solvent system hexane:diethylether:acetic acid (80:20:2)
was developed to the top of the plate. Lipids were visualized under UV
light after spraying the plate with 0.005% primuline, and spots corresponding
to TAG and the major phospholipids were scraped, spiked
with a known standard (15:0), and transesterified for GC/MS analysis
to determine the fatty acid composition as well as to determine the relative
levels of TAG, phosphatidylethanolamine (PE), and phosphatidylcholine
(PC) fractions. At least three biological replicates were used for
TLC analysis. Significance was determined by t-test calculation using
GraphPad Prism 5 software.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

องค์ประกอบกรดไขมันของไขมันแยกหยดและผู้ใหญ่หนุ่มสาวnematodeswas ตาม spectrometry chromatography ก๊าซ/มวล(GC/MS) อธิบายไว้ว่า ก่อนหน้านี้ [30,31] แยกแท็ก และส่วนฟอสโฟลิพิดใช้โพรโทคอ TLC สองตัวทำละลาย มีขยายโครงการโดยการเพิ่ม 5 ml ของฉ่ำคลอโรฟอร์ม: เมทานอล (1:1) และ incubatingนอนที่ 20 ° C มีสั่นเป็นครั้งคราว โซลูชันของ 0.2 MH3PO4 และ 1 M KCl ได้เพิ่มตัวอย่าง ซึ่งมีผลในระยะแยกระยะอควี และอินทรีย์ของ มีขั้นตอนการอินทรีย์อบแห้งภายใต้ และเอาอาร์กอน resuspended แล้ว ในคลอโรฟอร์มตัวอย่างที่โหลดใน triplicate และแผ่น TLC ได้พัฒนา 2สามทางขึ้นจานในระบบตัวทำละลายแรก:เมทานอล: คลอโรฟอร์ม: น้ำ: กรดอะซิติก (65:43:3:2.5), แห้ง แล้วสองระบบตัวทำละลายเฮกเซน: diethylether: กรดอะซิติก (80:20:2)ถูกพัฒนาขึ้นไปด้านบนของจาน โครงการมี visualized ภายใต้ UVไฟหลังพ่นแผ่น primuline 0.005% และจุดที่สอดคล้องแท็กและ phospholipids หลักถูกขูด spikedรู้จักมาตรฐาน (15:0), และ transesterified สำหรับการวิเคราะห์ GC/MSการกำหนดองค์ประกอบกรดไขมันเช่นตามกำหนดญาติระดับของป้าย phosphatidylethanolamine (PE), และสำคัญเศษส่วน (พีซี) เหมือนกับชีวภาพน้อย 3 ใช้สำหรับวิเคราะห์ TLC กำหนดความสำคัญโดย t-ทดสอบคำนวณซอฟต์แวร์ GraphPad ปริซึม 5

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

องค์ประกอบของกรดไขมันของหยดไขมันที่แยกและผู้ใหญ่
nematodeswas กำหนดโดยแก๊ส chromatography / มวลสาร
(GC / MS) ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [30,31] แยกของ TAG
และเศษส่วนเรียมใช้สองตัวทำละลายโปรโตคอลTLC ไขมันถูกสกัดโดยการเพิ่ม 5 มิลลิลิตรคลอโรฟอร์มเย็น: เมทานอล (1: 1) และบ่มค้างคืนที่อุณหภูมิ20 องศาเซลเซียสเป็นครั้งคราวด้วยการเขย่า วิธีการแก้ปัญหาของ 0.2 M H3PO4 และ 1 M KCl ถูกบันทึกอยู่ในตัวอย่างซึ่งส่งผลให้ในขั้นตอนการแยกเฟสอินทรีย์และน้ำ เฟสอินทรีย์ถูกลบออกและอบแห้งภายใต้อาร์กอน resuspended แล้วในคลอโรฟอร์ม. ตัวอย่างในการโหลดเพิ่มขึ้นสามเท่าและแผ่น TLC ได้รับการพัฒนาสองในสามของทางขึ้นจานในระบบตัวทำละลายแรก: คลอโรฟอร์ม: เมทานอล: น้ำ: กรดอะซิติก (65 : 43: 3: 2.5) แห้งแล้วระบบตัวทำละลายเฮกเซนที่สอง: ไดเอทิลอีเทอร์: กรดอะซิติก (80: 20: 2) ได้รับการพัฒนาไปด้านบนของแผ่น ไขมันที่ถูกมองเห็นภายใต้แสงยูวีแสงหลังการฉีดพ่นแผ่นที่มี primuline 0.005% และจุดที่สอดคล้องกันในการแท็กและฟอสโฟสำคัญที่ถูกคัดลอก, ถูกแทงที่มีมาตรฐานเป็นที่รู้จักกัน (15: 0) และ transesterified สำหรับการวิเคราะห์ GC / MS เพื่อตรวจสอบกรดไขมัน องค์ประกอบเช่นเดียวกับการตรวจสอบเทียบระดับของTAG, phosphatidylethanolamine (PE) และฟอส(PC) เศษส่วน อย่างน้อยสามซ้ำชีวภาพถูกนำมาใช้สำหรับการวิเคราะห์ TLC ความสำคัญถูกกำหนดโดยการคำนวณ t-test โดยใช้ปริซึมGraphPad ซอฟแวร์ 5

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

องค์ประกอบของกรดไขมันและแยกไขมันพบ nematodeswas ผู้ใหญ่
ยังกำหนดโดยวิธีแก๊สโครมาโตกราฟี / แมสสเปกโทรเมทรี
( GC / MS ) ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ 30,31 [ ] การแยกของแท็กและ
เศษส่วนปใช้ตัวทำละลายมี 2 ขั้นตอน ไขมันสกัด
โดยการเพิ่ม 5 ml ของน้ำแข็งเย็น : เมทานอลคลอโรฟอร์ม ( 1 : 1 ) และการแช่ค้างคืนที่ 20 ° C
เขย่าเป็นครั้งคราวสารละลาย HCl 0.2 M
1 M KCl และเติมตัวอย่าง ซึ่งส่งผลให้เกิดการแยกเฟส
ของอินทรีย์และเฟสน้ำ . ระยะอินทรีย์คือ
ลบออกและแห้งภายใต้อาร์กอน จากนั้น resuspended ในคลอโรฟอร์ม
จำนวนโหลดทั้งสามใบ และมีแผ่นถูกพัฒนาสอง
ในสามของทางจานแรกในระบบตัวทำละลายคลอโรฟอร์ม : เมทานอล : น้ำ :
: กรดน้ำส้ม ( 65:43:3:2.5 )แห้งแล้ว
2 ระบบตัวทำละลายเฮกเซนไดเ ธิลอีเทอร์ : กรดน้ำส้ม ( 80:20:2 )
ถูกพัฒนาไปด้านบนของจาน ไขมันยังมองเห็นแสงยูวี
หลังจากพ่นจานกับ primuline 0.005% และจุดที่สอดคล้องกัน
แท็กและกลุ่มเป้าหมายหลักคือขูดตะปู
กับรู้จักมาตรฐาน ( 15:0 ) และ transesterified สำหรับ GC / MS การวิเคราะห์
เพื่อศึกษาองค์ประกอบกรดไขมัน รวมทั้งกำหนดระดับสัมพัทธ์
ของแท็ก phosphatidylethanolamine ( PE ) และฟอสฟาติดิลโคลีน
( PC ) เศษส่วน แบบชีวภาพอย่างน้อยสามถูกใช้เพื่อการวิเคราะห์ (
. โดยมีกำหนดโดยการคำนวณ t-test โดยใช้
graphpad ปริซึม 5 ซอฟต์แวร์